蔡佳仲，黃珍珍，周 娟，李兆生，胡英杰*

1廣州中醫(yī)藥大學(xué)熱帶醫(yī)學(xué)研究所藥學(xué)研究室，廣州510405;2云南恒大藥業(yè)有限公司，玉溪652605

松露又名塊菌，是一種子囊菌類食用大型真菌，主產(chǎn)于歐洲，我國(guó)西南也有分布。塊菌具有奇特的香味和豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，是世界上最珍貴的可食用菌根菌之一，其中又以法國(guó)黑松露(Tuber melanosporum)和意大利白松露(Tuber magnatum)最為珍貴［1］。國(guó)外已對(duì)歐洲多種松露品種的化學(xué)組成和芳香氣味開展了分析研究，報(bào)道了眾多揮發(fā)性成分［2-4］。鑒于對(duì)國(guó)產(chǎn)松露香味物質(zhì)的分析報(bào)道較少［2，5］，本文對(duì)云南產(chǎn)黑塊菌(Tuber indicum)香味物質(zhì)進(jìn)行了化學(xué)成分分析，以作為研究開發(fā)國(guó)產(chǎn)松露資源的化學(xué)成分基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

BS224S型電子分析天平(德國(guó)Sartorius公司);氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(QP-2010，日本SHIMADZU公司)。

1.2 材料

黑塊菌采自云南;樣品經(jīng)廣東省微生物分析檢測(cè)中心鑒定為黑塊菌Tuber indicum(鑒定報(bào)告編號(hào): 2011ZD0307)。試劑均為分析純。

2 方法

2.1 松露乙醚提取物

稱取100 g新鮮塊菌，洗凈、切成碎片，加2倍量水，勻漿，加乙醚在室溫下振搖提取3次，每次加乙醚500 mL。合并乙醚提取液，加無水硫酸鈉脫水，濾過，取濾液室溫下?lián)]去乙醚，得具有黑塊菌濃烈芳香氣味的黃棕色油狀液體，得率為0.19%(w/ w)。

2.2 測(cè)定條件

2.2.1 氣相色譜條件

DB-5MS毛細(xì)管色譜柱(30 m ×0.25 mm × 0.25 μm)，程序升溫:50～280℃，程序升溫10℃/min;柱流量1.0 mL/min;進(jìn)樣口溫度250℃;柱前壓54 kPa;進(jìn)樣量0.5 μL;分流比2∶1;載氣為高純氦氣。

2.2.2 質(zhì)譜條件

電離方式EI:電子能量70 eV;離子源溫度200℃，接口溫度230℃;倍增器電壓0.9 kV;溶劑延時(shí)4 min;質(zhì)量掃描范圍20～500 amu。

3 結(jié)果與分析

按照上述條件對(duì)塊菌乙醚提取樣品進(jìn)行分析，獲得其乙醚提取物成分的總離子流圖(圖1)。色譜峰相應(yīng)質(zhì)譜圖經(jīng)人工解析及NIST147譜庫(kù)檢索定性鑒定化學(xué)成分;采用面積歸一法計(jì)算出各成分的相對(duì)百分含量(圖1)。從塊菌乙醚提取物中共檢測(cè)到74個(gè)化學(xué)成分，鑒定了其中56個(gè)化合物，占化合物總數(shù)的75.68%，所鑒定的化合物含量占提取物總含量的87.37%。塊菌乙醚提取物的化學(xué)成分涵蓋了酸、醇、酯、醛、烴和苯衍生物等化合物。其中，脂肪酸類物質(zhì)13種(占總峰面積的59.98%，下同)，醇類物質(zhì)5種(占7.96%)，酯類物質(zhì)5種(占2.79%)，醛類物質(zhì)5種(占2.44%)，烷烴類物質(zhì)25種(占13.12%)，苯衍生物3種(占1.08%)。相對(duì)含量在2%以上的化合物依次為亞油酸(26.51%)、棕櫚酸(13.00%)、油酸(9.09% )、硬脂酸(6.94%)、菜子甾醇(4.93%)、環(huán)己醇(3.17%)、異丙基-8-(3-辛基-2-環(huán)氧乙烷)-辛酸酯(2.18%)、2-辛基環(huán)丙烯-1-庚醇(2.02%)等。

圖1 松露乙醚提取物的總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram of the ethyl ether extract from T.indicum

表1 松露乙醚提取物的化學(xué)成分分析Table 1 Components analysis of the ethyl ether extract from T.indicum

23 壬酸Nonanoic acid C9H18O2 94 0.15 24 3，4-二甲基癸烷3，4-Dimethylundecane C13H28 93 0.07 25 3-癸烯酸3-Decenoic acid C10H18O2 83 0.79 26 正癸酸n-Decanoic acid C10H20O2 82 0.96 27 5-甲基-2-苯基-2-己烯醛5-Methyl-2-phenyl-2-hexenal C13H16O 92 0.16 28 3，5-二叔丁基苯酚3，5-bis(1，1-Dimethylethyl)-Phenol C14H22O 83 0.16 29 月桂醛Dodecanal C12H24O 94 0.09 30 肉豆蔻酸Tetradecanoic acid C14H28O2 94 0.07 31 9-十六碳烯酸9-Hexadecenoic acid C16H30O2 94 0.29 32 棕櫚酸n-Hexadecanoic acid C16H32O2 95 13.00 33 十七烷酸乙酯Heptadecanoic acid，ethyl ester C19H38O2 90 0.31 34 十七烷酸Heptadecanoic acid C17H34O2 92 0.10 35 10-甲基-十九烷10-Methylnonadecane C20H42 90 0.08 36 亞油酸(Z，Z)-9，12-Octadecadienoic acid C18H32O2 96 26.51 37 油酸(Z)-9-Octadecenoic acid C18H34O2 93 9.09 38 硬脂酸Octadecanoic acid C18H36O2 96 6.94 39 (順，順，順)-7，10，13-二十碳三烯酸甲酯(E，E，E)-7，10，13-Eicosatrienoic acid，methyl ester C21H36O2 83 0.17 40 (順，順，順)-8，11，14-二十碳三烯酸(Z，Z，Z)-8，11，14-Eicosatrienoic acid C20H34O2 80 0.67 41 (順，順)-9，12-十八碳二烯酰氯(Z，Z)-9，12-Octadecadienoyl chloride C18H31C10 79 0.34 42 1-十八炔1-Octadecyne C18H34 82 0.81 43 六氫-4，4，7a-三甲基-2(3H)-苯并呋喃酮Hexahydro-4，4，7a-trimethyl-2(3H)-benzofuranone C21H18O2 81 0.85 44 9-二十炔9-Eicosyne C20H38 85 1.39 45 2-辛基環(huán)丙烯-1-庚醇2-Octylcyclopropene-1-heptanol C18H34O 82 2.02 46 二十四烷Tetracosane C24H50 96 1.33 47 9-酮基-10，12-十八碳二烯酸9-Oxo-10，12-octadecadienoic acid C18H30O3 84 1.18 48 異丙基-8-(3-辛基-2-環(huán)氧乙烷)-辛酸酯Isopropyl-8-(3-octyl-2-oxiranyl)-octanoate C21H40O3 79 2.18 49 二十五烷Pentacosane C25H52 90 0.78 50 鄰苯二甲酸二正辛酯Di-n-octyl phthalate C24H38O4 82 0.08 51 二十八烷Octacosane C28H58 96 0.24 52 1-氯代二十七烷1-Chloroheptacosane C27H55Cl 83 0.46 53 二十九烷Nonacosane C29H60 94 0.14 54 反式角鯊烯All-trans-Squalene C30H50 94 0.09 55 三十四烷Tetratriacontane C34H70 93 0.11 56 菜子甾醇Brassicasterol C28H46O 89 4.93

4 討論

分析結(jié)果表明:含有滇產(chǎn)黑塊菌香味物質(zhì)的乙醚提取物中的主成分是脂肪酸，包括不飽和脂肪酸亞油酸(26.51%)、油酸(9.09%)和飽和脂肪酸棕櫚酸(13.00%)、硬脂酸(6.94%)，主要不飽和脂肪酸(油酸和亞油酸)和飽和脂肪酸(棕櫚酸和硬脂酸)總量分別為35.60% 和19.94%。不飽和脂肪酸是人類必需的脂肪酸，具有多種有利于人體健康的生理活性。其中亞油酸具有抗癌、抗氧化、抑制脂肪積累、降低血清膽固醇等作用［6］。而油酸作為一價(jià)不飽和脂肪酸，代替膳食中的飽和脂肪酸，具有降低低密度脂蛋白膽固醇的效果［7］。棕櫚酸(十六烷酸、軟脂酸)和硬脂酸(十八烷酸)等高級(jí)飽和脂肪酸，是自然界中分布最廣的脂肪酸之一。棕櫚酸除了具有抗腫瘤、抗衰老的生物活性外［8，9］，還是合成化妝品成分棕櫚酸異丙酯、棕櫚酸異辛酯的基本原料。

本研究同時(shí)從滇產(chǎn)黑塊菌提取物中鑒定出了八碳化合物1-辛烯-3-醇(0.81%)。1-辛烯-3-醇俗稱蘑菇醇，帶有濃烈的鮮菇香味，是許多蕈菌中最典型的風(fēng)味物質(zhì)，也是自然界內(nèi)蕈菌的主要揮發(fā)性物質(zhì)之一［10］。Splivallo等［2］從中國(guó)產(chǎn)塊菌Tuber indicum的揮發(fā)油中曾鑒定出了1-辛烯-3-醇(27.47%)、2-辛烯醛(7.85%)、3-辛酮(3.92%)、2-辛烯-1-醇(3.14%)等多種八碳化合物。鑒定出的八碳化合物在含量和種類上與文獻(xiàn)報(bào)道的有明顯區(qū)別，原因在于分析對(duì)象為乙醚可溶的脂溶性成分，含有較多的非揮發(fā)性成分，與Splivallo等所分析的揮發(fā)油不同。據(jù)報(bào)道，1-辛烯-3-醇等八碳化合物在蕈菌中是由亞油酸或亞麻酸經(jīng)脂肪氧合酶等催化轉(zhuǎn)變而成的［11］，滇產(chǎn)黑塊菌乙醚提取物中油酸和亞油酸總和為35.6%，檢測(cè)出的八碳化合物種類和含量狀況可能與塊菌所處的生長(zhǎng)階段有關(guān)［2，12］。

本研究對(duì)黑松露乙醚提取物進(jìn)行了初步分析并發(fā)現(xiàn)了多種生物活性成分，說明滇產(chǎn)黑松露除了食用價(jià)值外，還可能有藥理作用。分析結(jié)果為滇產(chǎn)松露資源的深入研究開發(fā)提供了一定的科學(xué)依據(jù)，有望在藥物研究、食品和香精產(chǎn)業(yè)中得以推廣應(yīng)用。

致謝GC-M S由中國(guó)科學(xué)院廣州化學(xué)研究所的劉倩老師和梁慶優(yōu)老師測(cè)定，謹(jǐn)致謝忱!

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