厲博文，張 東，楊 嵐，王滿元，朱曉新

1中國中醫(yī)科學院中藥研究所，北京100700;2首都醫(yī)科大學中醫(yī)藥學院，北京100069

紫萁貫眾為紫萁科(Osmundaceae)紫萁屬植物紫萁(Osmunda japonica Thunb.)帶葉柄殘基的根莖，味苦，性微寒，具有清熱解毒、驅(qū)蟲、止血的功效。收載于1977年和2010年版《中國藥典》一部。紫萁貫眾作為中藥貫眾的主流商品品種之一，主產(chǎn)于河南、甘肅、山東、貴州、安徽、江蘇、浙江、湖北、湖南、江西、四川、云南等省，在國內(nèi)很多地區(qū)廣泛應用。文獻報道紫萁全植物中含有黃酮類、內(nèi)酯類、二萜類、甾酮類、多糖、鞣質(zhì)等化學成分［1-6］，但針對紫萁貫眾化學成分的研究較少報道?，F(xiàn)代藥理研究顯示，紫萁貫眾具有抗病毒、驅(qū)蟲、止血、抗菌等作用［7，8］。為探明紫萁貫眾的活性物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究對紫萁貫眾進行了化學成分研究，從中分離得到6個化合物，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)鑒定為1，7，9，11-四羥基-3-甲基-5，6-二氫-萘駢蒽醌(1，7，9，11-tetrahydroxy-3-methyl-5，6-dihydrobenzo［a］tetracene-8，13-dione，1)，(E)-3，4-二羥基苯亞甲基丙酮((E)-3，4-dihydroxybenzalacetone，2)，原兒茶酸(protocatechuic acid，3)，β-谷甾醇(β-sitosterol，4)，β-胡蘿卜苷(βdaucosterol，5)，二十六烷酸(hexacosoic acid，6)。化合物1、2、3和6為首次從紫萁屬植物中分離得到，其中化合物1為首次從植物界中得到。

1 儀器與材料

熔點用DDR-8109型顯微熔點測定儀測定。紫外光譜用普析通用T6 UV-VIS分光光度計測定。紅外光譜用Shimadzu IR Prestige-21型紅外光譜儀測定(KBr)。核磁共振譜用VARIAN INOVA-500核磁共振儀和BRUKER AVANCE-Ⅲ400核磁共振儀測定。ESI-MS用 Agilent 1200-6130 SQ型質(zhì)譜儀測定，HRESI-MS用BRUKER micrOTOF-Q質(zhì)譜儀測定。常規(guī)分離用溶劑均為北京化工廠產(chǎn)分析純或化學純產(chǎn)品，水為蒸餾水。柱色譜、薄層層析用硅膠為青島海洋化工廠產(chǎn)品。Sephadex LH-20為Pharma-cia公司生產(chǎn)。

樣品來源:紫萁貫眾根莖采自湖南省沅陵縣，由中國中醫(yī)科學院中藥研究所馮雪峰研究員鑒定為紫萁科植物紫萁Osmunda japonica Thunb.的干燥帶葉柄殘基的根莖，標本保存于中國中醫(yī)科學院中藥研究所。

2 提取與分離

干燥的紫萁貫眾藥材(22.5 kg)，粉碎，用4倍量95%乙醇回流提取3次，每次2 h，濾過，合并濾液;減壓回收溶劑得95%乙醇浸膏(150 2 g)，加水混懸，用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯部分(262 g)、兩相不溶部分(117.8 g)和水部分。乙酸乙酯部分經(jīng)常壓硅膠柱層析，以石油醚-丙酮(9∶1-4∶6)梯度洗脫。8∶2洗脫部分經(jīng)常壓硅膠柱和凝膠柱層析，乙酸乙酯重結(jié)晶，得到紅色片狀結(jié)晶為化合物1(20 mg);7∶3洗脫部分經(jīng)常壓硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，得到8∶2和7∶3洗脫部分，分別經(jīng)過氯仿和丙酮重結(jié)晶，得到黃色結(jié)晶為化合物2(30 mg)和白色針狀結(jié)晶化合物6(26 mg);9∶1洗脫部分，經(jīng)氯仿重結(jié)晶，得到白色針狀結(jié)晶為化合物4 (35 mg);6∶4洗脫部分經(jīng)常壓硅膠柱柱層析，以氯仿-乙酸乙酯梯度洗脫，9∶1洗脫部分得到白色粉末狀固體為化合物5(30 mg);1∶1和4∶6部分經(jīng)常壓硅膠柱反復柱層析，以氯仿-甲醇和石油醚-丙酮梯度洗脫，再經(jīng)凝膠柱LH-20分離，甲醇洗脫，用氯仿-甲醇重結(jié)晶，得到無色針狀結(jié)晶化合物3(12 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 紅色結(jié)晶，mp.286～288℃，F(xiàn)eigl反應陽性，提示為醌類化合物。HR-ESI-MS m/z 387.0863［M －H］-，確定分子式為 C23H16O6。UV (MeOH)λmax(log ε)308，464 nm。IR(KBr)νmax3412 cm-1(OH)，1618，1604 cm-1(C=O)。13C NMR譜中δ189.5和δ181.5為蒽醌的羰基信號;δ107.7～δ165.7有18個芳香碳信號，結(jié)合分子式，推測除蒽醌母核外，還有1個苯基;另有1個甲基δ20.9，2個亞甲基δ28.1和δ20.4碳信號。1H-1H COSY譜中可見2個亞甲基質(zhì)子的相關(guān)信號δ2.70(2H，m)/ δ2.80(2H，m)，同時在HMBC譜顯示δ2.70質(zhì)子信號與δ115.7(C-4)和116.4(C-14b)碳信號相關(guān)，δ2.80質(zhì)子信號與δ157.9(C-7)和141.2(C-4a)碳信號相關(guān)，確認其與蒽醌和苯基相連。1H NMR譜顯示有1個甲基δ2.23和4個羥基質(zhì)子信號δ10.13 (1H，s)，δ12.52(1H，s)，δ12.14(1H，s)，δ11.35 (1H，s)。綜合以上數(shù)據(jù)分析，經(jīng)與文獻化合物［9］對照，確定該化合物為1，7，9，11-四羥基-3-甲基-5，6-二氫-萘駢蒽醌(1，7，9，11-tetrahydroxy-3-methyl-5，6-dihydrobenzo［a］tetracene-8，13-dione)。通過1H-1H COSY，HSQC和HMBC譜分析(Fig.1)進一步確證了結(jié)構(gòu)，并首次歸屬了該化合物的碳譜數(shù)據(jù)(Table 1)。經(jīng)文獻檢索確認化合物1為從植物界中首次得到。

圖1 化合物1的主要HMBC相關(guān)Fig.1 Key HMBC correlation of compound 1

表1 化合物1的核磁數(shù)據(jù)Table 1 NMR data of compound 1(DMSO-d6，500 MHz for δH，125 MHz for δC)

14b 116.4(s) 15 2.23(3H，s) 20.9(q) 1-OH 10.13(1H，s) 7-OH 12.52(1H，s) 9-OH 12.14(1H，s) 11-OH 11.35(1H，s)

化合物2 橙黃色晶體，mp.176～178℃，ESIMS m/z 179［M+H］+;1H NMR(500 MHz，CD3OD) δ:2.26(3H，s，H-1)，6.5(1H，d，J=16.0 Hz，H-3)，7.47(1H，d，J=16.0 Hz，H-4)，7.02(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.74(1H，d，J=8.0 Hz，H-9)，6.94(1H，dd，J=8.0，2.0 Hz，H-10)。13C NMR(125 MHz，CD3OD)δ:27.0(C-1)，201.5(C-2)，123.5(C-3)，146.8(C-4)，127.8(C-5)，115.3(C-6)，146.9(C-7)，150.0(C-8)，116.0(C-9)，124.8(C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的4-(3，4-dihydroxyphenyl)-(E)-3-buten-2-one)［10］數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物 2為4-(3'，4'-dihydroxyphenyl)-(E)-3-buten-2-one［(E)-3，4-二羥基苯亞甲基丙酮，(E)-3，4-dihydroxybenzalacetone］。

化合物3 無色針狀結(jié)晶。ESI-MS 153［MH］-;1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ:6.89(1H，d，J =8.4 Hz，H-5)，7.52(1H，d，J=2.0 Hz，H-2)，7.46 (1H，dd，J=8.4 Hz，2，H-6)。13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ:115.6(C-2)，117.4(C-5)，123.1(C-1)，123.6(C-6)，145.4(C-3)，150.6(C-4)，167.4(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的原兒茶酸［11］數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物3為原兒茶酸。

化合物4 無色針狀結(jié)晶，mp.135～136℃，Liebermann-Burchard反應陽性。與β-谷甾醇標準品薄層對照，Rf值一致，確定該化合物為β-谷甾醇。

化合物5 白色顆粒狀固體粉末，mp.286～289℃，Liebermann-Burchard反應陽性。與β-胡蘿卜苷標準品薄層對照，Rf值一致，確定該化合物為β-胡蘿卜苷。

化合物6 白色針狀結(jié)晶，mp.78～80℃。ESIMS m/z 395［M-H］-;1H NMR(400 MHz，CDCl3) δ:2.35(2H，t，J=7.2 Hz，H-2)，1.63(2H，m，H-3)，1.25(44H，brs，H-4～25)，0.88(3H，J=6.4 Hz，H-26)。13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ:178.8(C-1)，33.8(C-2)，31.9(C-3)，29.1-29.7(C-4～23)，24.7(C-24)，22.7(C-25)，14.1(C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的二十六烷酸［12］數(shù)據(jù)一致，故鑒定化合物6為二十六烷酸。

4 討論

1984年Nancy N.Gerber［13］從弗拉克氏菌代謝產(chǎn)物中分離得到化合物 G-2N，并確定結(jié)構(gòu)為2-methyl-4，7，9，12-tetrahydroxy-5，6-dihydrobenzo［a］naphthacene-8，13-dione。1989年 Rodney W.Rickards［9］將G-2N的結(jié)構(gòu)修正為1，7，9，11-tetrahydroxy-3-methyl-5，6-dihydrobenzo［a］tetracene-8，13-dione?；衔?結(jié)構(gòu)與修正后的化合物G-2N相同，本文首次用二維核磁波譜技術(shù)確定了化合物1的結(jié)構(gòu)，并歸屬了其碳譜數(shù)據(jù)。經(jīng)文獻檢索未見植物界中存在此類具有萘駢蒽醌結(jié)構(gòu)化合物的報道。

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