黃化剛,李廷強,朱治強,王凱,楊肖娥
(環(huán)境修復(fù)與生態(tài)健康教育部重點實驗室,浙江大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院,浙江杭州310058)
現(xiàn)代農(nóng)業(yè)、交通運輸、礦山開采及制造工業(yè)等高強度的人類活動導(dǎo)致部分地區(qū)土壤中的重金屬累積。低品質(zhì)肥料、農(nóng)藥過度施用、污泥農(nóng)用及污水灌溉等農(nóng)事活動增加了我國農(nóng)業(yè)土壤中的鋅(Zn)、鎘(Cd)、汞(Hg)、砷(As)含量,部分地區(qū)已超出了土壤安全限定標準,嚴重威脅到食品安全生產(chǎn)和人類健康[1-2]。如何恢復(fù)這些污染土壤的生產(chǎn)能力是目前環(huán)境和農(nóng)業(yè)科學(xué)領(lǐng)域亟待解決的問題。
植物修復(fù)技術(shù)利用植物的生物泵及蒸騰壓功能,伴隨著吸收大量水分和養(yǎng)分的過程,提取和聚集土壤溶液中的重金屬元素,被認為是最經(jīng)濟、實用的土壤修復(fù)方式[3]。植物提取土壤中重金屬的量受超積累植物重金屬含量和生物量大小的影響[4]。但是,目前的大多數(shù)重金屬富集植物生長緩慢,生物量小,嚴重限制了超積累植物在實際植物提取過程中的應(yīng)用,導(dǎo)致清潔土壤所需要的時間一般是10~15年,甚至更長。
植物提取從本質(zhì)上講是一種農(nóng)業(yè)措施,其成功與否最終依賴于植物品種選擇,施肥及灌溉等農(nóng)藝管理措施的實施。因此,大量研究集中在利用各種化學(xué)方式獲得土壤的最佳優(yōu)化條件,提高重金屬的植物可利用性,增加植物的重金屬積累量[5]。研究最早且效果較好的為EDTA,EDDS,EGTA和DTPA等各種氨基羧酸類化合物[4-7]。然而,由于這類物質(zhì)對植物生長的限制,化合物本身的毒害和環(huán)境持久性,以及伴隨著重金屬和營養(yǎng)元素滲濾等風險,其在實際大田的應(yīng)用已受到越來越多的批判[8-9]。因此,尋找和研究新的環(huán)境友好型修復(fù)劑強化植物提取的工作很有必要。重金屬污染土壤通常表現(xiàn)為肥力缺乏、酸堿度不適宜等障礙因子,限制了植物生長。施肥是土壤-植物系統(tǒng)中不可缺少的因素,礦質(zhì)營養(yǎng)的交互作用關(guān)系到植物根系對元素的吸收、轉(zhuǎn)運及生理活性等方面,其已成為植物修復(fù)污染土壤過程中必要的強化手段之一。但與普通作物施肥不同的是,植物修復(fù)過程中的施肥除考慮養(yǎng)分功能之外,還需關(guān)注肥料對植物累積重金屬的影響。
國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)開展了部分肥料種類和形態(tài)對植物積累重金屬的研究,但其影響規(guī)律不盡一致[10-16]。多數(shù)的結(jié)果發(fā)現(xiàn),磷礦粉、鈣鎂磷肥等難溶性磷肥對土壤中重金屬有鈍化作用,磷肥施用降低了重金屬在土壤中的有效性,限制了植物的吸收[13-14,17]。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中磷肥種類較多,其化學(xué)性質(zhì)及生理特征各不相同,并非所有磷肥對植物修復(fù)效率都有負面影響。同時,已有報道主要針對單一污染物,而對復(fù)合污染條件下磷肥效應(yīng)研究較少,且大多數(shù)集中在營養(yǎng)液培養(yǎng),脫離了土壤環(huán)境。本研究以特異的超積累植物東南景天(Sedum alfredii)為材料[18],研究磷酸鹽施用對長期自然老化鋅/鎘復(fù)合污染土壤重金屬植物提取效率的影響。希望找到一種既增加植物吸收土壤重金屬,又能促進植物生長,提高其生物產(chǎn)量的磷肥種類,為植物修復(fù)技術(shù)的強化應(yīng)用提供依據(jù)。
盆栽試驗土壤為浙江富陽市污灌區(qū)的鋅、鎘復(fù)合污染水稻土。其基本理化性質(zhì)為:pH值7.8;砂粒、粉粒和粘粒含量分別為56%、38%和6%;有機質(zhì)含量47 mg/kg;速效氮、磷、鉀含量分別為68.1、6.7、72.3 mg/kg;總鋅、鎘含量分別為1678.6、6.4 mg/kg。土壤自然風干,磨細過2 mm尼龍網(wǎng)篩,充分混勻后備用。
供試磷肥為分析純的磷酸二氫鉀(KH2PO4)、磷酸二氫鈣[Ca(H2PO4)2]、磷酸二氫鈉(NaH2PO4)、磷酸二氫銨(NH4H2PO4),各設(shè)置施P2O522、88、352 mg/kg土3個濃度梯度,均以不施用磷肥種植植物的土壤作為對照,共13個處理,每個處理重復(fù)4次。各處理施用N(尿素)0.2 g/kg,K2O(K2SO4)0.2 g/kg作為基肥。稱好的肥料粉末溶于蒸餾水,均勻噴施于備用土壤中,磷肥和底肥充分混勻后裝入塑料盆中,每盆裝土1 kg,調(diào)節(jié)土壤吸水量至田間持水量的65%后,保鮮膜封閉盆缽口部,平衡1個月待用。
在土壤平衡的同時,進行東南景天育苗,Sedum alfredii取至浙江省衢州市的古老鉛鋅礦,為鋅、鎘超積累生態(tài)型[18]。將東南景天用自來水沖洗干凈,選擇生長良好、粗細基本一致帶頂芽3 cm長帶葉枝條,預(yù)培養(yǎng)2周長出根系后,換用改良后的Hoagland營養(yǎng)液。待根系生長旺盛,苗高6~8 cm,長出8片完整葉片時,選取長勢一致的苗移入處理盆中,每盆5株。根據(jù)盆中土壤水分狀況,每隔2~3 d澆入等量蒸餾水,使土壤含水量經(jīng)常保持在田間持水量的50%~60%左右。植物生長4個月后,采用刈割的形式收獲植物地上部。
植物地上部收獲后用自來水沖洗干凈,再用超純水漂洗3次,去除植物表面吸附的土壤及重金屬顆粒;吸水紙吸干水分后,75℃烘干至恒重,記錄地上部干物質(zhì)重。用瑪瑙球磨儀(Retsch RS100,Germany)將植物地上部磨細至<0.25 mm,用于重金屬及其他元素分析。植株鋅、鎘、鈣、鎂、鉀、磷、鐵、錳、銅含量采用1∶5(v/v)HClO4-HNO3消煮,ICP-OES(Thermo scientific ICAP 6000 series,USA)測定;碳、氮、硫含量用元素分析儀(Elementar vario MAX CNS,Germany)測定。
所有數(shù)據(jù)用Excel和SPSS軟件(version 13.0)進行統(tǒng)計分析,采用ANOVA檢驗各處理在95%水平的顯著性差異,用origin Pro 8.0作圖。
施用磷肥后,植物生長良好,無任何肥害和重金屬毒害現(xiàn)象,且在施P2O5352 mg/kg時,東南景天的長勢明顯優(yōu)于對照及低濃度磷肥處理(圖1)。地上部的干物質(zhì)重為2.3~4.4 g/pot,與不施磷肥的對照相比,不同磷肥種類處理下,地上部生物量均表現(xiàn)出隨著磷肥濃度的增加而升高。KH2PO4、Ca(H2PO4)2、NaH2PO4、NH4H2PO4對生物量的增產(chǎn)率分別為 46%、62%、54%和 78%,其中,NH4H2PO4的增產(chǎn)效果最明顯。
增施磷肥后,東南景天地上部鎘含量顯著降低(圖2)。22和88 mg/kg P2O5處理間鎘含量差異不顯著(除KH2PO4),但均顯著低于對照。352 mg/kg P2O5處理地上部鎘含量降到最低,約為35 mg/kg,KH2PO4、Ca(H2PO4)2、NaH2PO4、NH4H2PO4與對照相比分別下降了26%、41%、33%、39%。
圖1 不同磷肥處理下植物地上部生物量變化Fig.1 Effects of phosphate treatments on shoot dry weights of Sedum alfredii
東南景天地上部鋅含量為1965~3631 mg/kg,且隨著磷肥施用濃度的提高而增加。當P2O5施用量為352 mg/kg時,地上部鋅含量與對照相比差異達到顯著水平,KH2PO4、Ca(H2PO4)2、NaH2PO4、NH4H2PO4地上部鋅含量的增幅分別為85%、50%、46%和70%,其中以 KH2PO4和 NH4H2PO4對地上部鋅含量的影響最明顯。低濃度(P2O522 mg/kg)KH2PO4和NH4H2PO4處理,地上部鋅含量與對照無顯著差異;22和88 mg/kg Ca(H2PO4)2及NaH2PO4處理植物鋅含量與對照相比增量均不明顯。
不同外源磷肥種類及用量處理植物地上部各營養(yǎng)元素的變化規(guī)律不盡一致(圖3)。磷肥施入對植物地上部氮含量無顯著影響,僅在施 P2O5352 mg/kg時,KH2PO4和NaH2PO4處理顯著降低了地上部氮含量。地上部磷含量隨著磷肥施用量增加顯著升高,22 mg/kg KH2PO4和88 mg/kg NaH2PO4處理分別高出對照的35%和24%;在施P2O5352 mg/kg時,Ca(H2PO4)2和NH4H2PO4處理分別高出對照27%和21%。4種磷肥及不同用量處理對東南景天地上部鉀含量無顯著影響(除 P2O5用量為352 mg/kg的NaH2PO4處理顯著下降)。磷肥處理降低了植物地上部鈣含量,在施 P2O5352 mg/kg時,KH2PO4、NaH2PO4和NH4H2PO4加入后,鈣含量均顯著下降。植物地上部鎂含量下降,而NaH2PO4和NH4H2PO4僅在P2O5用量為352 mg/kg時表現(xiàn)明顯。除NH4H2PO4外,其他3種磷肥均顯著降低了地上部硫含量。
東南景天地上部錳含量隨磷肥用量增加而顯著降低,施P2O5352 mg/kg處理最為明顯,KH2PO4、Ca(H2PO4)2、NaH2PO4、NH4H2PO4分別比對照下降了33%、34%、23%和35%,不同肥料種類間無明顯差異。除高濃度Ca(H2PO4)2處理降低了植物鐵吸收外,其余3種磷肥處理對此均無顯著影響。KH2PO4和NaH2PO4處理后,東南景天地上部銅含量與對照相比無明顯變化,但 Ca(H2PO4)2和NH4H2PO4處理顯著降低了銅含量,且各處理濃度間無顯著差異(圖4)。
圖4 不同磷肥處理對東南景天地上部錳、鐵、銅含量的影響Fig.4 Effects of different phosphate treatments on micronutrient concentrations(Mn,F(xiàn)e and Cu)in shoots of Sedum alfredii
與對照相比,施磷肥后東南景天地上部碳含量有增加的趨勢,但KH2PO4和Ca(H2PO4)2處理增加量不明顯(圖5)。施P2O5352 mg/kg的NaH2PO4和88 mg/kg的NH4H2PO4處理,植物碳增加量與對照相比差異達顯著水平,兩者分別增加4.8%和4.5%。這說明增施磷肥能夠增加?xùn)|南景天對碳的固定。
圖5 不同磷肥處理下東南景天地上部總碳含量變化Fig.5 Total carbon concentrations in shoots of Sedum alfredii under different phosphate treatments
超積累植物的重金屬含量和干物質(zhì)重決定了土壤中重金屬的植物提取效率。經(jīng)過收獲一季東南景天,土壤中鋅的提取量最高達13.8 mg/pot,磷肥處理濃度越高,鋅積累量也越大(表1)。KH2PO4、Ca(H2PO4)2、NaH2PO4、NH4H2PO44種磷肥處理,植物鋅的積累量分別是不施磷肥對照的2.6、2.4、2.2和2.8倍,鎘的提取效率分別比對照增加了20%、4%、11%和37%,施P2O5352 mg/kg的 NH4H2PO4處理對植物提取土壤中鋅、鎘的促進作用最為明顯。
磷肥對植物積累重金屬的研究多為負面效應(yīng),即外源施入磷肥減少了植物對重金屬的吸收,蔬菜、谷類等常規(guī)作物過量磷將會導(dǎo)致作物鋅缺乏[19-20],其在農(nóng)產(chǎn)品安全生產(chǎn)中有實際的應(yīng)用價值。但也有研究認為,不同小麥栽培品種鋅含量隨著土壤磷肥施用量增加均升高[15],5 ~50 mg/L KH2PO4供應(yīng)印度芥菜地上部鋅含量從580 mg/kg增加到674 mg/kg,高濃度磷肥顯著增加了鋅的積累[12],這與本研究的結(jié)果較為一致。同時,NH4NO3處理也增加了印度芥菜對鋅的吸收,且氮肥處理后地上部鋅積累量增加了1倍,而磷肥處理僅增加了20%[12]。該研究中,NH4H2PO4施入后,東南景天生物量、地上部鋅含量均顯著高于其他處理,其原因在于磷酸鹽和銨根離子的共同作用,增施磷肥,配施一定量的氮素,能更有效地提高東南景天對鋅污染土壤的修復(fù)效率。水培條件下適當增磷(0.5~1.0 mmol/L)極顯著提高了東南景天地上部鋅含量和積累量,高磷(2.0 mmol/L)則降低其含量和積累量[16]。4種磷酸二氫鹽(特別是較高濃度P2O5352 mg/kg時)均顯著增加了地上部磷和鋅含量,這進一步證實了東南景天存在明顯的“增磷誘導(dǎo)鋅需求”現(xiàn)象,且這種現(xiàn)象是伴隨著體內(nèi)磷和鋅的同時增加。但也有研究表明,磷對鋅超積累植物Thlaspi caerulescens地上部生物量、鋅積累量并無顯著影響,甚至顯著減少了根長和根系干重[10]。根系非可溶態(tài)磷和鋅間存在正相關(guān),線性回歸斜率為0.3,接近于Zn3(PO4)2化合物中P/Zn的比值,根系鋅與無機磷酸鹽沉淀抑制了鋅向地上部運輸[10]。增磷能顯著地促進超積累植物東南景天對鋅的吸收及鋅由根系向地上部的運輸和積累,表明增磷能夠進一步滿足超積累植物東南景天地上部對鋅的高量需求,鋅并未在根系與磷發(fā)生明顯的沉淀。Ni等[11]在礦山污染土壤中添加NaH2PO4發(fā)現(xiàn),東南景天地上部鋅含量和生物量僅在P 31 mg/kg處理時達最大值,而本研究中也發(fā)現(xiàn)NaH2PO4處理東南景天地上部生物量和鋅含量均低于同濃度的其他肥料,但不同濃度處理鋅積累量均高于對照,這可能與肥料施用方式、土壤特性、植物生長周期和水肥管理等有關(guān),導(dǎo)致土壤中P/Zn交互機制不同。
表1 不同磷肥處理下東南景天地上部重金屬積累量Table 1 Zn and Cd extraction amounts from soil by shoots of Sedum alfredii under different phosphate treatments
石灰性褐土中磷鋅交互作用為協(xié)同效應(yīng),土壤磷含量提高可降低其對鋅離子的吸附容量和吸附能力,施磷明顯提高了土壤中鋅的有效性[21]。長期施用磷肥后,冬小麥根際土壤有效鋅含量顯著高于非根際土壤,但植株鋅含量顯著低于不施磷處理[20]。不同磷肥種類對植物積累重金屬影響的差異與磷酸鹽本身的性質(zhì)及其對土壤pH的影響有關(guān)。磷酸二氫鹽呈酸性,施入土壤后使土壤pH降低,消弱了土壤對鋅的吸附,提高了鋅有效性,能充分發(fā)揮磷與鋅之間的正效應(yīng)。磷酸氫二銨(DAP)施用降低了土壤pH值,但土壤重金屬有效態(tài)更多的轉(zhuǎn)化為殘余態(tài),油菜地上部 Zn/Cd 含量下降[17]。Basta 等[22]研究發(fā)現(xiàn)銨態(tài)氮肥施用能導(dǎo)致土壤酸化,2個月培養(yǎng)后DAP使土壤pH從7.1降低到6.5,且隨培養(yǎng)時間延長有持續(xù)降低趨勢,這進一步解釋了NH4H2PO4處理地上部鋅積累量最高的現(xiàn)象。磷酸二氫鹽施入,導(dǎo)致土壤pH值下降,增加了土壤中鋅的有效濃度,根系鋅吸收增多;再加之東南景天強大的轉(zhuǎn)運能力,使其地上部鋅含量顯著增加。
供試磷肥處理下,東南景天地上部鎘含量變化趨勢不同于鋅,總體趨勢是隨著磷肥用量增加,鎘含量下降。Dheri等[14]也得到同樣結(jié)果,施用磷肥降低了Spinacia oleracea地上部鎘含量,砂土的下降量大于粉壤土。植物鎘含量隨可溶性磷增加持續(xù)下降,可能是鎘與磷形成了復(fù)雜化合物,限制了植物對鎘的吸收[23]。本研究中,磷酸鹽吸附鎘使鎘沉淀為Cd(OH)2和Cd3(PO4)2[13],造成鎘在土壤中的原位固定。另外,鎘和鋅位于元素周期表中的同一主族,它們會相互競爭根系表面的離子交換位點或在植物體內(nèi)的轉(zhuǎn)運子,影響元素吸收,供試土壤中較高濃度的Zn2+限制了根對Cd2+的吸收。但高濃度磷肥時,由于生物量的顯著增加,磷肥增加了土壤鎘的植物提取效率。而 Yu和 Zhou研究發(fā)現(xiàn),Ca(H2PO4)2使土壤鎘有效性降低,顯著降低了紫茉莉地上部鎘積累量,磷肥處理降低了鎘的生物富集系數(shù),但是增加了其轉(zhuǎn)移系數(shù),植物體磷、鎘沉淀減少鎘毒害對植物的結(jié)構(gòu)損傷[24]。但也有研究發(fā)現(xiàn)田間條件增施磷酸二氫銨,亞麻籽的鎘含量和積累量均增加[25],這可能是由于磷酸鹽的加入改變了土壤pH值,影響了根際環(huán)境的離子強度[25-26]。
植物體的各種營養(yǎng)元素參與了多種重要的生理代謝過程。Wang等發(fā)現(xiàn)鋅脅迫顯著增加了油菜鋅含量,但是降低了磷、銅、鐵、錳、鎂含量,這可能是植物鋅毒害的一種癥狀[27]。磷肥施入降低了東南景天地上部大多數(shù)營養(yǎng)元素的含量,僅磷含量顯著增加。這不同于孫琴等[16]的研究,但與 Zhao等[10]研究一致,且地上部磷含量與Thlaspi caerulescens接近。表明東南景天體內(nèi)有很強的維持正常磷素水平的能力,這可能是其在高鋅條件下生長良好的原因之一。石灰性土壤上,增加鋅濃度降低了Pistachio葉片鐵、錳、銅含量,缺鋅處理其含量增加[28]。本研究得到的結(jié)果與此類似,磷肥加入顯著增加了東南景天對土壤鋅的積累,植物體內(nèi)高濃度鋅抑制了根部的微量元素向地上部轉(zhuǎn)運,造成間接影響;同時,土壤中過量磷酸鹽可能與鐵、錳、銅、鈣等元素結(jié)合形成難溶形態(tài),降低了其生物有效性,直接限制了植物吸收,小麥體內(nèi)銅下降與高磷濃度下土壤水提取態(tài)銅含量明顯降低有關(guān)[29]。磷肥極顯著的增加了東南景天地上部的干物質(zhì)重,生物量增加產(chǎn)生的“稀釋效應(yīng)”也可能是導(dǎo)致地上部大部分營養(yǎng)元素含量降低的原因。盡管地上部營養(yǎng)元素含量降低,但增施磷肥東南景天地上部大量元素和微量元素的積累量顯著高于對照,這進一步從元素平衡角度解釋了磷肥能增加?xùn)|南景天地上部鋅的積累。磷組成了植物體內(nèi)核酸、輔酶Ⅰ(NAD)、輔酶Ⅱ(NADP)等許多重要化合物,這些化合物在光合作用、碳水化合物與蛋白質(zhì)合成等生理過程中起著極其重要的作用[30]。施磷肥提高了紫花苜蓿根茬組織中非結(jié)構(gòu)性碳水化合物的貯存量和利用效率,為刈割后的早期再生提供充足的養(yǎng)分,從而加快紫花苜蓿的再生[31]。本研究中,磷肥處理東南景天地上部碳含量均高于對照,這有利于刈割后地上部的快速生長,同時,增加了環(huán)境中有機碳的生物固定量,減少了CO2等溫室氣體排放,有利于低碳農(nóng)業(yè)發(fā)展,具有良好的生態(tài)環(huán)境效應(yīng)。
外源添加含不同陽離子(K+、Ca2+、Na+、NH4+)的H2PO4-均促進了東南景天生長,P2O5施用量352 mg/kg時顯著增加了地上部生物量。植物地上部磷、鋅含量隨著磷濃度的增加而顯著升高,東南景天體內(nèi)存在著明顯的磷、鋅共積累效應(yīng)。磷肥施用后植物地上部大量和微量元素總積累量顯著增加,這有利于地上部對重金屬的持續(xù)累積。施用磷肥增加了東南景天對環(huán)境中碳的固定,具有明顯的生態(tài)效應(yīng)。4種磷肥均顯著增加了東南景天地上部對鋅和鎘的提取量,其中,KH2PO4和NH4H2PO42種磷肥在P2O5施用量為352 mg/kg時增加效果最為明顯,大大提高了植物修復(fù)效率。但在實際的大田應(yīng)用中,2種肥料的具體施用量需要進一步研究。
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