李新梅，毛 煒，吳煥林，陳秋雄

隨著社會發(fā)展及生活方式的改變，動脈粥樣硬化性心臟病已嚴(yán)重威脅人類健康。早期的動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)為脂質(zhì)條紋，逐漸發(fā)展形成成熟的粥樣斑塊。粥樣斑塊的潰瘍、破裂是臨床心血管病事件發(fā)生的關(guān)鍵病理生理學(xué)基礎(chǔ)。急性心血管病事件主要取決于AS斑塊的不穩(wěn)定性，即易損性，而斑塊中的薄纖維帽與易損性緊密相關(guān)。因此，有關(guān)斑塊穩(wěn)定性的研究已成為近年來AS領(lǐng)域中的研究熱點。ApoE基因敲除小鼠 (Apolipoprotein E knockout mice，ApoE-/-mice)所致的高脂血癥和動脈粥樣硬化(AS)模型是緣于遺傳因素?fù)p傷，其病變特點更接近人類［l-2］。

本研究擬從形態(tài)學(xué)角度及對血脂的影響，探討鄧?yán)瞎谛哪z囊對ApoE小鼠動脈粥樣硬化斑塊及血脂的影響，以期為臨床應(yīng)用中藥防治高脂血癥和動脈粥樣硬化提供科學(xué)依據(jù)，為進(jìn)一步探討其作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 研究對象及分組 5周齡雄性ApoE小鼠30只(購于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部動物實驗中心)，飼以含脂肪21%(wt/wt)膽固醇0.15%的飼料，喂養(yǎng)13周后，將小鼠隨機(jī)分為2組:實驗組及對照組各15只。給以同樣高脂飼料喂養(yǎng)的同時，實驗組給以0.25 g冠心膠囊(拌于飼料，主要組成為黨參、田七、茯苓、法半夏、五爪龍、丹參、枳殼、陳皮等，廣東省中醫(yī)院院內(nèi)制劑，每粒含生藥4.5 g)，每日1次，連續(xù)喂13周。眼球取血后處死，無菌條件下取出心臟及主動脈。取主動脈根部，甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.2 檢測項目及觀察指標(biāo) (1)病理形態(tài)學(xué)觀察:組織常規(guī)脫水，石蠟包埋、石蠟連續(xù)切片，染色。普通光鏡觀察并進(jìn)行圖像分析，計算斑塊占管腔比例，觀察薄纖維帽的形成情況。切片用CIMAX病理分析軟件進(jìn)行形態(tài)測量分析。測量粥樣斑塊面積(PA)與管腔面積(LA)的比例(PA/LA)。(2)血脂水平變化:ApoE小鼠處死前，眼球取血，將血靜置。離心制備血清，-20℃冰箱保存。稀釋血清，氧化酶法測定血清TC、TG、HDL-C和LDL-C水平。

2 結(jié)果

兩組ApoE小鼠在實驗過程中均有死亡，開始給藥時給以灌胃治療，死亡小鼠較多，后拌于飼料中，無小鼠死亡。最后實驗組處死8只小鼠，分別行病理及血脂檢查，對照組處死14只小鼠，全部行血脂檢查，其中1例病理取材不理想，故成功提取病理標(biāo)本13例。

2.1 病理形態(tài)學(xué)觀察 染色顯示，對照組小鼠主動脈斑塊內(nèi)膽固醇酯及膽固醇結(jié)晶增多，纖維帽菲薄，表面有大量的泡沫細(xì)胞覆蓋，呈現(xiàn)易損斑塊特征。而實驗組亦可見到動脈粥樣硬化斑塊，但纖維帽較厚。同時，實驗組小鼠粥樣斑塊面積(PA)與管腔面積(LA)的比例明顯低于對照組(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組ApoE小鼠粥樣斑塊面積(PA)與管腔面積(LA)的比例

2.2 血脂水平變化 對兩組ApoE小鼠眼球取血，檢驗血脂各項指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。實驗組ApoE小鼠血脂水平與對照組小鼠比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)。見表2。

表2 兩組小鼠血脂水平情況(mmol/L)

3 討論

鄧?yán)瞎谛哪z囊由我國名中醫(yī)鄧鐵濤教授經(jīng)驗方—冠心方制成。鄧?yán)险J(rèn)為，冠心病為本虛標(biāo)實之證，其病機(jī)關(guān)鍵點為氣虛痰瘀。鄧?yán)线x用具有益氣除痰、行瘀通絡(luò)的藥物組成冠心方(黨參、田七、茯苓、法夏等)，在臨床運(yùn)用已30余年，具有很好的臨床療效，能顯著改善心絞痛癥狀，改善心電圖及血液流變學(xué)指標(biāo)［3］。近年來，筆者應(yīng)用由冠心方制成的鄧氏冠心膠囊治療心絞痛(廣東省中醫(yī)藥管理局課題)，發(fā)現(xiàn)其能改善心肌缺血，減少心絞痛的發(fā)作頻率及時間［4］，并能提高患者的生活質(zhì)量［5］。

吳衛(wèi)平等證明，丹參具有抗氧化功能，減少氧化低密度脂蛋白形成［6］。穿心蓮等有保護(hù)內(nèi)皮功能［7］。還有研究表明，活血化瘀的中藥可改善血液理化性質(zhì)，調(diào)整凝血系統(tǒng)功能，抑制血小板聚集，防治心肌缺血［8］。制首烏、桑寄生對血管平滑肌細(xì)胞增生有抑制作用［9］。文川等［10］研究發(fā)現(xiàn)，具有活血化瘀作用的芎芍膠囊可抑制平滑肌細(xì)胞增殖和表型轉(zhuǎn)變(影響平滑肌細(xì)胞增殖相關(guān)基因蛋白表達(dá)和細(xì)胞跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo))?，F(xiàn)代藥理研究表明，黃芪［11］、黨參能增強(qiáng)心肌收縮力，改善左心功能，增加心排血量，丹參［12-13］、三七等具有抑制血小板聚集、降低血液粘稠度以及擴(kuò)張冠狀動脈、減輕微血管阻力的作用。

目前，可制作動脈粥樣硬化動物模型的動物有豬、兔、鼠等，比較公認(rèn)的較穩(wěn)定的模型當(dāng)屬ApoE基因敲除小鼠模型。本項目采用嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶嶒炘O(shè)計，采用科學(xué)的動物模型，觀察對ApoE基因敲除小鼠動脈粥樣斑塊的影響，從而分析中醫(yī)藥穩(wěn)定斑塊的作用，具有先進(jìn)性及科學(xué)性。

本研究結(jié)果初步表明，鄧?yán)瞎谛哪z囊在減少動脈粥樣硬化斑塊形成、穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊方面有一定療效，為中醫(yī)藥在防治冠心病中的作用機(jī)制進(jìn)行了初步、有益的探討。其具體機(jī)理尚待進(jìn)一步探討和研究。

［1］李小鷹.心血管疾病分子生物學(xué)［M］.北京:人民軍醫(yī)出版社，2000:117-140.

［2］Breslow JL.Mouse models of atherosclerosis［J］.Science，1996，272:685-688.

［3］林曉忠，吳煥林，嚴(yán)夏.鄧鐵濤冠心方治療冠心病心絞痛80例［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21(8):1249-1250.

［4］李新梅，吳煥林，羅文杰.鄧氏冠心膠囊治療氣虛痰瘀型胸痹的臨床研究［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2005，3(4):300.

［5］李新梅.鄧氏冠心膠囊改善胸痹患者生活質(zhì)量的臨床研究［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2005，32(8):781.

［6］吳衛(wèi)平，匡培根，張小樹，等.丹參和鈣通道拮抗劑LDL氧化作用的對比研究［J］.北京醫(yī)學(xué)，1995，17(3):133-135.

［7］王宏偉，趙月華，向世勤.穿心蓮成分對動脈粥樣硬化家兔血清一氧化氮血清內(nèi)皮素和脂質(zhì)過氧化物的影響［J］.中國中西結(jié)合雜志，1997，17(9):547-549.

［8］陳海，袁莉，方玲，等.阿托伐他汀與銀杏葉制劑聯(lián)合應(yīng)用對頸動脈粥樣硬化斑塊與血脂的影響［J］.中國醫(yī)藥，2010，5(3):220-222.

［9］王南，朱宇，蔡海江.首烏組方對動脈平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1996，16(1):21-23.

［10］文川，徐浩，陳可冀，等.活血中藥對ApoE基因缺陷小鼠血脂及動脈粥樣硬化斑塊炎癥反應(yīng)的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，25(4):345-349.

［11］劉鑫.黃芪、參麥治療急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒致心臟損害的臨床分析［J］.中國醫(yī)藥，2007，2(7):407-408.

［12］程功，喬媛，姚曉偉，等.復(fù)方丹參注射液對阿司匹林抵抗影響的臨床研究［J］.中國醫(yī)藥，2010，5(9):819-820.

［13］王媛媛，于慶功，舒敏.丹參對大鼠重癥急性胰腺炎腸道微循環(huán)及炎性因子的實驗研究［J］.中國醫(yī)藥，2010，5(7):622-624.