程志斌 吳淑云 張紅兵 楊建發(fā) 李曉珍 蘇子峰

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南昆明 650201；2.陜西省銅川市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西銅川 727031；3.云南西南集團(tuán)，云南昆明 650224；4.大理學(xué)院農(nóng)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，云南大理 671003）

近年來已有很多動(dòng)物試驗(yàn)和文獻(xiàn)綜述顯示，枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis)是一種替代飼用抗生素使用的安全畜禽飼用微生態(tài)制劑，具有廣闊的商業(yè)價(jià)值和潛力(解廣勤等,2011；張博等,2011；張紅兵等，2011；卞國(guó)順等，2012；侯玉潔等，2012；楊光宇，2012；周映華等，2012a、b)。本課題組前期針對(duì)我國(guó)云南省肉雞養(yǎng)殖業(yè)相對(duì)落后的大量地面平養(yǎng)的實(shí)際情況（程志斌等，2011a；程志斌等，2012a、b；蘇子峰等，2012），開展了日糧添加枯草芽孢桿菌對(duì)不同飼養(yǎng)方式（地面平養(yǎng)或籠養(yǎng)）肉雞生長(zhǎng)性能影響的初步研究（廖國(guó)周等，2011），結(jié)果顯示，無論是地面平養(yǎng)還是籠養(yǎng)方式，枯草芽孢桿菌替代抗生素對(duì)改善肉雞的生長(zhǎng)性能具有良好效果。良好的生長(zhǎng)性能取決于畜禽對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的充分消化吸收與高效代謝利用（Cheng等，2006a；劉影等，2010；程志斌等，2011b、c、d）。已有報(bào)道證明，枯草芽孢桿菌能夠補(bǔ)充畜禽腸道多種內(nèi)源酶不足（解廣勤等，2011；黃璠等，2012；侯玉潔等，2012），綜合提高肉雞對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化與利用（張博等，2011；卞國(guó)順等，2012；楊光宇，2012）。然而，過去的試驗(yàn)結(jié)果和報(bào)道大多是在模擬肉雞現(xiàn)代化規(guī)模養(yǎng)殖的籠養(yǎng)生產(chǎn)條件下獲得。本課題組發(fā)現(xiàn)（廖國(guó)周等，2011），以地面平養(yǎng)為代表的肉雞傳統(tǒng)散養(yǎng)模式，與現(xiàn)代化規(guī)模養(yǎng)殖的籠養(yǎng)模式相比，肉雞的生產(chǎn)性能和健康狀況差異很大。在提倡環(huán)保養(yǎng)殖與安全飼料及飼料添加劑使用日益高漲的今天（程志斌等，2011e、f、g），以我們的前期工作為基礎(chǔ)，深入研究枯草芽孢桿菌改善肉雞、尤其是地面平養(yǎng)肉雞生長(zhǎng)性能的作用機(jī)理十分必要，這對(duì)指導(dǎo)當(dāng)前云南省地面平養(yǎng)肉雞的生產(chǎn)實(shí)際有重要意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。因此，本試驗(yàn)重點(diǎn)研究枯草芽孢桿菌飼料添加劑對(duì)地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞生長(zhǎng)性能、養(yǎng)分利用率及血液生化指標(biāo)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與分組

本試驗(yàn)選擇1日齡新出生的羅斯 308（ROSS 308）肉仔雞240只，按照飼養(yǎng)方式（地面平養(yǎng)或籠養(yǎng)）和枯草芽孢桿菌的添加不同，分成4個(gè)試驗(yàn)處理組，試驗(yàn)處理組設(shè)計(jì)見表1。每個(gè)處理組設(shè)6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只，公母各半。

表1 試驗(yàn)處理組設(shè)計(jì)

1.2 試驗(yàn)日糧

參考農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（NY/T 33—2004）》，并結(jié)合云南省肉雞養(yǎng)殖實(shí)際情況，配制1～21日齡肉仔雞試驗(yàn)飼料，基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平見表2。處理組1和處理組2肉仔雞日糧添加飼用抗生素金霉素，并遵守農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》；處理組3和處理組4肉仔雞日糧替代抗生素使用枯草芽孢桿菌飼料添加劑，添加量為5×1011cfu/kg全價(jià)日糧，枯草芽孢桿菌由云南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院提供。試驗(yàn)肉仔雞飼料中均不使用飼用植酸酶，試驗(yàn)飼料在65℃低溫加工成顆粒飼料，由云南西南集團(tuán)(云南西爾南飼料有限公司)生產(chǎn)。

表2 試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 飼養(yǎng)管理

籠養(yǎng)采用三層重疊式肉雞籠，水泥地面平養(yǎng)為每個(gè)重復(fù)一個(gè)小圈,放置食料桶和飲水桶。所有試驗(yàn)雞均飼養(yǎng)于同一有窗雞舍內(nèi),專人負(fù)責(zé)飼養(yǎng)與記錄。自然光照輔以人工照明,光照時(shí)間22 h。按常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫。試驗(yàn)在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)雞場(chǎng)進(jìn)行，從2012年5月3日開始，試驗(yàn)周期21 d。

1.4 測(cè)定指標(biāo)

1.4.1 生長(zhǎng)性能

測(cè)定試驗(yàn)肉仔雞出生重和末重、飼料消耗，統(tǒng)計(jì)死亡肉仔雞數(shù)量，計(jì)算肉仔雞平均日增重、平均日采食量、料重比（飼料轉(zhuǎn)化效率）等生長(zhǎng)性能指標(biāo)。

1.4.2 飼料養(yǎng)分利用率

采用Cr2O3指示劑法測(cè)定肉仔雞對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)養(yǎng)分的表觀代謝率，具體操作過程與分析測(cè)定方法參考丁雪梅等（2011）報(bào)道方法：試驗(yàn)肉仔雞15～21日齡進(jìn)行代謝試驗(yàn)，期間試驗(yàn)日糧添加0.4%的Cr2O3指示劑。預(yù)飼4 d，隨后3 d是正式試驗(yàn)期，每天定時(shí)收集部分排泄物，用于分析代謝能、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、鈣、磷的表觀利用率。

1.4.3 血液生化指標(biāo)

試驗(yàn)肉仔雞21日齡早晨空腹稱重后，每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)組隨機(jī)抽取2只健康肉仔雞(1公、1母)，心臟采血后制備血清。使用全自動(dòng)生化分析儀(Olympus Au 600型)測(cè)定相關(guān)血液生化指標(biāo)，分析測(cè)定在云南省動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室完成。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用雙因素（因素1：枯草芽孢桿菌；因素2：飼養(yǎng)方式）方差分析，分別比較枯草芽孢桿菌、飼養(yǎng)方式及其互作對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能、養(yǎng)分利用率及血清生化指標(biāo)的影響。同時(shí)，4個(gè)處理組間各測(cè)定指標(biāo)進(jìn)行多重比較分析。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯著性均表示為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 枯草芽孢桿菌對(duì)地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響（見表3）

表3 枯草芽孢桿菌對(duì)地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

表3結(jié)果顯示：枯草芽孢桿菌顯著影響（P＜0.05）肉仔雞平均日增重、料重比指標(biāo)。處理組4顯著優(yōu)于（P＜0.05）處理組1，處理組2和處理組3之間差異不顯著（P＞0.05）。末體重、平均日采食量指標(biāo)，所有處理組之間無顯著差異（P＞0.05）。

2.2 枯草芽孢桿菌對(duì)地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞飼料養(yǎng)分表觀代謝率的影響（見表4）

表4結(jié)果顯示：枯草芽孢桿菌顯著影響（P＜0.05）肉仔雞對(duì)飼料粗蛋白的表觀代謝率，飼養(yǎng)方式顯著（P＜0.05）影響代謝能的表觀利用率。2個(gè)指標(biāo)均顯示：處理組4肉仔雞顯著大于（P＜0.05）處理組1，處理組2和處理組3之間差異不顯著（P＞0.05）。

表4 枯草芽孢桿菌對(duì)地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞飼料養(yǎng)分表觀代謝率的影響（%）

2.3 枯草芽孢桿菌對(duì)地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響（見表5）

表5結(jié)果顯示：枯草芽孢桿菌、飼養(yǎng)方式及其互作顯著影響肉仔雞血清白蛋白、尿酸的濃度(P＜0.05)。肉仔雞血清白蛋白濃度指標(biāo)，處理組4和處理組2之間無顯著差異(P＞0.05)，且二者都顯著大于（P＜0.05）處理組1。血清尿酸濃度指標(biāo)，處理組4肉仔雞的尿酸濃度最低（P＜0.05），處理組 1最高（P＜0.05），處理組 2和處理組3之間差異不顯著（P＞0.05）?？莶菅挎邨U菌顯著（P＜0.05）影響肉仔雞的血糖濃度，處理組4血糖濃度顯著低于（P＜0.05）處理組1，處理組2和處理組3之間差異不顯著（P＞0.05）。

表5 枯草芽孢桿菌對(duì)地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 枯草芽孢桿菌對(duì)地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞生長(zhǎng)性能的影響

在所有處理組肉雞采食量無顯著差異基礎(chǔ)上，枯草芽孢桿菌顯著影響肉仔雞的平均日增重和料重比（見表3），其中以籠養(yǎng)方式并采食添加枯草芽孢桿菌日糧的處理組4肉仔雞生產(chǎn)性能最佳。這一結(jié)果與我們的前期試驗(yàn)（廖國(guó)周等，2011）結(jié)果一致，說明枯草芽孢桿菌替代抗生素對(duì)改善肉仔雞的生長(zhǎng)性能具有良好效果。

采用地面平養(yǎng)方式的處理組3肉雞雖然也采食添加枯草芽孢桿菌的飼料，但處理組3肉雞的料重比指標(biāo)與飼用抗生素組的處理組1和處理組2相比無顯著差異（P＜0.05），但數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示有一定的改善趨勢(shì)（0.05＜P＜0.1），且試驗(yàn)期處理組 3 肉仔雞的死亡率較低。這些結(jié)果與我們的前期試驗(yàn)（廖國(guó)周等，2011）報(bào)道一致，說明在傳統(tǒng)肉雞地面平養(yǎng)方式下，枯草芽孢桿菌具有替代飼用抗生素的潛能。

3.2 枯草芽孢桿菌對(duì)地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞飼料養(yǎng)分利用率的影響

肉雞良好的生長(zhǎng)性能取決于對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的充分消化、吸收與利用（Kalmendal等，2009；程志斌等，2011e、f、g），采用 Cr2O3指示劑法測(cè)定的飼料養(yǎng)分表觀代謝率能夠客觀地反映肉雞對(duì)日糧營(yíng)養(yǎng)的消化與利用狀況（丁雪梅等，2011）。本試驗(yàn)采用了“玉米-豆粕-魚粉”典型日糧（見表2），排除了基礎(chǔ)飼料原料對(duì)本試驗(yàn)的干擾。表4結(jié)果顯示：枯草芽孢桿菌顯著影響肉仔雞對(duì)飼料粗蛋白的利用率，處理組4肉仔雞的飼料粗蛋白利用率最高，顯著大于處理組1（P＜0.05）；處理組2和處理組3之間差異不顯著。這些結(jié)果綜合說明：枯草芽孢桿菌有利于提高肉仔雞對(duì)飼料蛋白的利用率，增加飼料蛋白質(zhì)的攝入量，從而提高肉仔雞生長(zhǎng)性能；且枯草芽孢桿菌在籠養(yǎng)肉仔雞上的使用效果明顯優(yōu)于地面平養(yǎng)肉仔雞。以上得到的結(jié)論也印證了過去關(guān)于枯草芽孢桿菌具有補(bǔ)充或維持動(dòng)物腸道多種消化酶，提高營(yíng)養(yǎng)利用率而改善畜禽生長(zhǎng)性能的機(jī)理（卞國(guó)順等，2012；黃璠等，2012；周映華等，2012a、b；楊光宇，2012）。

本次試驗(yàn)沒有發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌對(duì)飼料代謝能、粗脂肪、粗纖維、磷等養(yǎng)分利用率的改善效果，其原因可能與本次試驗(yàn)的日糧營(yíng)養(yǎng)水平一致以及低纖維、高消化率的優(yōu)質(zhì)基礎(chǔ)飼料原料（玉米、豆粕、魚粉）選擇有關(guān)。此外，飼養(yǎng)方式顯著影響肉仔雞飼料代謝能的表觀利用率（見表4），總體而言，籠養(yǎng)方式的處理組4和處理組2肉仔雞代謝能的表觀利用率數(shù)值大于地面平養(yǎng)的處理組1和處理組3的肉仔雞。顯然，這與肉雞生活空間不同、運(yùn)動(dòng)造成的能量消耗差異有關(guān)。當(dāng)然，我們也不排除地面平養(yǎng)肉雞由于疫病、應(yīng)激等因素造成的能量額外消耗，這可以從表3雞的死亡率初步判斷。為此，我們進(jìn)一步分析反映肉仔雞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝利用的主要血液生化指標(biāo)(見表5)。

3.3 枯草芽孢桿菌對(duì)地面平養(yǎng)和籠養(yǎng)肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響

血液生化指標(biāo)是反映畜禽體內(nèi)物質(zhì)代謝變化和某些組織器官機(jī)能狀態(tài)變化的指標(biāo)，可以作為機(jī)體營(yíng)養(yǎng)代謝利用、應(yīng)激、健康狀態(tài)的綜合表征（姚浪群等，2003；Cheng，2006b；Woyengo 等,2010；成廷水等,2010；李芳林等，2012）。血清總蛋白包括白蛋白與球蛋白，血清白蛋白由肝臟合成，是機(jī)體蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)需求的主要來源，用于修補(bǔ)組織器官和提供能量（姚浪群等，2003；Cheng，2006b；李芳林等，2012）。此外，血清白蛋白還具有維持血漿滲透壓及作為其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的載體等多種功能（姚浪群等，2003；Cheng，2006b；Woyengo等，2010）。因此，測(cè)定血清白蛋白的濃度可以作為畜禽蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)攝入和代謝利用的主要指標(biāo)之一（姚浪群等，2003；李芳林等，2012）。表5結(jié)果顯示：枯草芽孢桿菌顯著影響肉仔雞血清白蛋白濃度，處理組4肉仔雞血清白蛋白濃度為12.1 g/l,顯著高于處理組1（10.4 g/l），這與處理組4肉雞對(duì)飼料蛋白利用率大于處理組1的結(jié)果（見表4）相符。由此可見，籠養(yǎng)條件下，添加枯草芽孢桿菌的處理組4肉仔雞攝入了更多的蛋白質(zhì)，反映在血清白蛋白濃度適度較高，且主要用于生長(zhǎng)發(fā)育，促使處理組4肉仔雞獲得更好的生長(zhǎng)性能。

尿酸是禽類動(dòng)物體內(nèi)氨基酸及核苷酸等含氮化合物代謝的終產(chǎn)物,也是禽類動(dòng)物排出體內(nèi)多余氨,維持機(jī)體正常機(jī)能的重要方式之一(陳家祥等,2011)。日糧粗蛋白水平、日糧氨基酸平衡狀況、動(dòng)物的生理代謝、健康狀況等多種因素綜合影響禽類血清尿酸濃度(陳家祥等，2011)。一般認(rèn)為，較低血清尿酸濃度表征禽類對(duì)飼料蛋白質(zhì)和氨基酸的良好代謝利用，有利于禽類的生長(zhǎng)發(fā)育和健康(陳家祥等，2011)。本試驗(yàn)在日糧粗蛋白、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)水平和飼養(yǎng)管理相同的前提下，處理組4肉仔雞的血清尿酸濃度為38.6mg/l，較處理組1肉雞血清尿酸濃度52.5mg/l有了較大幅度地降低（見表5）；結(jié)合處理組4肉仔雞的飼料蛋白表觀代謝率最高結(jié)果（見表4），綜合說明：枯草芽孢桿菌不僅使肉仔雞提高對(duì)飼料蛋白的消化率，而且減少了氮（尿酸）排放而增加機(jī)體蛋白沉積，飼料蛋白的綜合利用率的提高促進(jìn)了肉雞生長(zhǎng)性能改善。此外，地面平養(yǎng)方式飼養(yǎng)的處理組3和處理組1肉仔雞血清尿酸濃度相比，采食添加了枯草芽孢桿菌日糧的處理組3肉仔雞顯著低于處理組1（見表5）。這一結(jié)果與處理組3肉仔雞的料重比、飼料蛋白表觀代謝率等指標(biāo)，具有優(yōu)于處理組1肉仔雞的趨勢(shì)相符。因此，綜合以上分析：無論是傳統(tǒng)的肉雞地面平養(yǎng)方式還是現(xiàn)代的規(guī)模化肉雞籠養(yǎng)方式，添加優(yōu)質(zhì)枯草芽孢桿菌飼用微生態(tài)制劑，可以有效替代飼用抗生素，改善肉仔雞生長(zhǎng)性能，其作用機(jī)理與提高飼料蛋白的消化和代謝利用率有關(guān)。

血清中葡萄糖、甘油三酯和總膽固醇綜合反映了畜禽對(duì)飼料蛋白、糖類、脂質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化及其在機(jī)體內(nèi)的代謝利用（李焰等，2007；陳家祥等，2011；李芳林等，2012），這些指標(biāo)易受到日糧營(yíng)養(yǎng)水平（尤其是氨基酸種類、含量）、飼料原料選擇（谷物、油脂等能量飼料）、血清激素水平（主要是甲狀腺素、胰島素、胰高血糖素、生長(zhǎng)激素、糖皮質(zhì)激素等）、肝臟脂質(zhì)相關(guān)代謝酶（脂肪酸合成酶、乙酰輔酶A羧化酶、激素敏感性甘油三酯脂酶、肝脂酶、脂蛋白脂酶等）、動(dòng)物日齡、健康狀況等多種因素影響（李焰等，2007；李芳林等，2012）。表5結(jié)果顯示：枯草芽孢桿菌顯著影響肉仔雞血糖濃度，處理組4肉仔雞血糖濃度為11.2 mmol/l，低于處理組1肉仔雞的12.9 mmol/l。我們推測(cè)，在日糧營(yíng)養(yǎng)水平一致和良好飼養(yǎng)管理?xiàng)l件下，由于枯草芽孢桿菌增加了飼料蛋白和氨基酸的攝入量，血液中較高濃度的蛋白和(或)氨基酸，激發(fā)了甲狀腺素和(或)胰島素分泌。經(jīng)典的動(dòng)物生理學(xué)和內(nèi)分泌學(xué)知識(shí)提示我們，這2種激素均有增加血清蛋白向機(jī)體組織沉積，以及適當(dāng)降低血糖濃度的作用，以符合機(jī)體組織正常對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及能量的代謝需求（姚浪群等，2003）。當(dāng)然，這一推測(cè)有待于進(jìn)一步試驗(yàn)分析相關(guān)指標(biāo)。

此外，本試驗(yàn)沒有發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌對(duì)肉仔雞血清甘油三酯及總膽固醇濃度的影響，這可能與肝臟脂質(zhì)相關(guān)代謝酶的活性有關(guān)。

4 小結(jié)

本試驗(yàn)證明，無論是傳統(tǒng)的肉雞地面平養(yǎng)方式還是現(xiàn)代的規(guī)模化肉雞籠養(yǎng)方式，添加微生態(tài)制劑枯草芽孢桿菌，可有效替代飼用抗生素，改善肉仔雞生長(zhǎng)性能，其作用機(jī)理主要是提高飼料蛋白質(zhì)的利用率。

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