趙夢(mèng)明，馬會(huì)強(qiáng)，劉大勇，賈 智

(天津醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院牙體牙髓科，天津 300070)

齲病是在多種因素作用下，牙體硬組織發(fā)生的一種慢性進(jìn)行性破壞的感染性疾病，是目前發(fā)病率最高的口腔疾病之一。牙體硬組織的新陳代謝很弱，釉質(zhì)內(nèi)沒有任何基于細(xì)胞活動(dòng)的修復(fù)功能，一旦遭到破壞，必須用人工材料進(jìn)行修復(fù)。目前臨床上在進(jìn)行充填治療時(shí)主要選用光固化復(fù)合樹脂。盡管樹脂材料在不斷改進(jìn)，材料的硬度、色澤等都已經(jīng)取得了很大的進(jìn)步，但是由于固化收縮引起的微滲漏一直沒有得到很好的改善［1－2］，進(jìn)而引起修復(fù)體破壞、牙釉質(zhì)微裂、微滲漏、繼發(fā)齲、術(shù)后敏感等并發(fā)癥［3－5］。影響微滲漏的因素有很多［6－8］，主要有樹脂種類、粘結(jié)劑類型以及光固化方式、時(shí)間、角度等。復(fù)合樹脂的固化模式有:弱光引導(dǎo)、間歇光照和高強(qiáng)度光照等3種。弱光引導(dǎo)法是先用低強(qiáng)度光引發(fā)聚合反應(yīng)，再用高強(qiáng)度光照射固化;間歇光照技術(shù)采用恒定光強(qiáng)，短暫光照之后短暫停歇，循環(huán)數(shù)次完成固化。本實(shí)驗(yàn)擬采用激光共聚焦顯微鏡觀察比較上述3種不同固化模式下，固化后的復(fù)合樹脂與牙體組織之間形成的微滲漏差別。

1 材料和方法

1.1 主要材料和儀器

Adper single Bond 2全酸蝕系統(tǒng)、FiltekTMZ350復(fù)合樹脂(3M公司，美國(guó));LED光固化燈(belmont治療椅自帶，日本);Isomet低速切片機(jī)(Bueh ler，美國(guó));激光掃描共聚焦顯微鏡(LEICA TCS SP5型，德國(guó));羅丹明B(Rhodamine－B，Sigma公司，美國(guó))。

1.2 方法

自天津醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院外科門診拔除的離體牙中選取牙體完整，無(wú)齲損、無(wú)裂紋的恒牙30個(gè)，刮除牙面軟組織及結(jié)石后，用高速渦輪機(jī)在每個(gè)牙的頰面正中制備箱狀洞型(頰舌徑、近遠(yuǎn)中徑均為4 mm，洞深為2 mm)，要求底平，壁直，點(diǎn)線角圓鈍。窩洞制備完成后的所有標(biāo)本沖洗干燥后隨機(jī)分為A、B、C 3組:A組弱光引導(dǎo)固化;B組間歇光照固化;C高強(qiáng)度光照固化。分別用Z350復(fù)合樹脂分層充填，固化，常規(guī)拋光。然后用光固化樹脂封閉根尖孔，并在距離充填體邊緣1mm之外的所有牙面均勻涂布兩層指甲油，待其完全干燥后，置于1 g/L羅丹明B熒光染液中37℃水溶條件下浸泡。24 h后取出所有標(biāo)本蒸餾水沖洗10 s，分別用帶有金剛砂片的Isom et低速切片機(jī)通過充填體中央將牙齒自頰舌方向沿長(zhǎng)軸剖開。檢測(cè)面用粗、細(xì)砂紙依次打磨平整后，分別在100% 相對(duì)濕度下用激光共聚焦檢測(cè)，氬激光掃描(點(diǎn)面掃描2×4，激發(fā)波長(zhǎng)546 nm，發(fā)射波長(zhǎng)600 nm)。同時(shí)使用LEICA TCS SP5分析軟件對(duì)圖像進(jìn)行測(cè)量并按以下微滲漏分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)［9］記分:0=無(wú)染料滲入;1=染料沿著洞壁滲入，深度＜1/3壁;2=染料沿著洞壁滲入，深度＜2/3壁;3=染料沿著洞壁滲入，深度2/3壁至平齊洞底，但未累及髓壁;4=染料滲入累及髓壁。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)量資料()用單因素方差分析，兩兩比較用t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

肉眼觀3組標(biāo)本均可見羅丹明染料浸入(圖1)。激光共聚焦顯微鏡(CLSM)下可見牙體充填標(biāo)本的微滲漏呈現(xiàn)清晰的熒光染色圖像，3組標(biāo)本均有染料滲入(圖2)。

無(wú)論在微滲漏分級(jí)還是深度方面，A、B、C 3組間相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)(表1～2)。

圖1 肉眼觀3組染料浸入深度

圖2 激光共聚焦顯微鏡下染料浸入深度(Ⅰ為牙體組織，Ⅱ?yàn)閺?fù)合樹脂)

表1 3組標(biāo)本微滲漏級(jí)別比較 (個(gè))

表2 3組標(biāo)本微滲漏深度比較(μm，)

表2 3組標(biāo)本微滲漏深度比較(μm，)

3組相比 P＞0.05

組別 微滲漏深度A 1 948.20 ±48.62 B 1 941.90 ±65.80 1 951.60 ±65.48 C

3 討論

光固化復(fù)合樹脂材料具有美觀性、高粘結(jié)性、良好的生物安全性以及與牙體組織有相似的強(qiáng)度等優(yōu)點(diǎn)，是時(shí)下最常用的牙體修復(fù)材料。但樹脂修復(fù)后因樹脂材料與牙體組織之間的微滲漏一直沒有得到完美解決［1－2］。微滲漏會(huì)使窩洞壁與復(fù)合樹脂之間產(chǎn)生細(xì)菌、液體的通道，從而引起術(shù)后敏感、充填體著色、繼發(fā)齲，進(jìn)一步發(fā)展會(huì)引起充填體破壞脫落，導(dǎo)致牙髓組織感染，引起牙髓炎、根尖周炎等［3－5］。因此，樹脂修復(fù)時(shí)如何減少甚至消除微滲漏一直是口腔臨床醫(yī)生和材料學(xué)家關(guān)注的熱點(diǎn)。

影響樹脂修復(fù)體微滲漏的因素有很多種，包括樹脂的材料性能、醫(yī)師技術(shù)水平、充填方式、窩洞壁表面玷污層的存在、洞型與洞斜面的制備、粘結(jié)劑的選擇、牙面酸蝕的程度、光固化燈的種類、光固化的方式、光固化時(shí)間及長(zhǎng)期咀嚼壓力致充填體形變等［6－8］。本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)關(guān)注光照方式對(duì)光固化復(fù)合樹脂聚合收縮后產(chǎn)生微滲漏的影響。關(guān)于不同光照方式對(duì)微滲漏的影響一直以來(lái)存在兩種不同的看法，一方提出弱光引導(dǎo)和間歇光照可提高光固化復(fù)合樹脂的邊緣密閉性，而另有學(xué)者則認(rèn)為弱光引導(dǎo)和間歇光照對(duì)光固化復(fù)合樹脂固化后的邊緣密閉性無(wú)明顯影響。有鑒于此，本實(shí)驗(yàn)通過激光共聚焦顯微鏡觀察比較3種光固化方式對(duì)樹脂修復(fù)體邊緣微滲漏的影響，以期為臨床提供參考。

微滲漏的檢測(cè)方法有很多種［10－13］，其中染料滲漏研究是牙體微滲漏檢測(cè)中的重要方法之一［14－15］，根據(jù)染料擴(kuò)散的方式分為順向法和逆向法。本實(shí)驗(yàn)中采用順向法，即將離體受試牙浸入特定濃度的染液中，一定時(shí)間后取出，激光掃描共聚焦顯微鏡并測(cè)量染料沿窩洞壁滲透的深度［16］，以評(píng)價(jià)充填材料與牙體組織的密合性。

激光掃描共聚焦顯微鏡，是上世紀(jì)中期發(fā)展起來(lái)并得到廣泛應(yīng)用的高新技術(shù)，它突破了光學(xué)顯微鏡不能對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)部進(jìn)行定位檢測(cè)的限制，彌補(bǔ)了電鏡在宏觀和動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)研究等方面的不足，且又克服了其在操作和制樣等方面的缺點(diǎn)。激光掃描共聚焦顯微鏡分析法是利用激光共聚焦顯微成像原理發(fā)展而成的新技術(shù)，具有靈敏度高及可觀察空間結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，可應(yīng)用于細(xì)胞標(biāo)記及非破壞性、非侵襲性的組織器官活體檢測(cè)等。

激光掃描共聚焦顯微鏡相對(duì)光學(xué)顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)主要體現(xiàn)以下幾個(gè)方面［14－16］:① CLSM 的圖像是以電信號(hào)的形式記錄下來(lái)的，所以可采用各種模擬的和數(shù)字的電子技術(shù)進(jìn)行圖像處理;②CLSM利用共聚焦系統(tǒng)有效地排除了焦點(diǎn)以外的光信號(hào)干擾，提高了分辨率，顯著改善了視野的廣度和深度，使無(wú)損傷的光學(xué)切片成為可能，達(dá)到了最佳三維空間定位;③由于CLSM能隨時(shí)采集和記錄檢測(cè)信號(hào)，為生命科學(xué)開拓了一條觀察活細(xì)胞結(jié)構(gòu)及特定分子、離子生物學(xué)變化的新途徑;④除具有成像功能外，CLSM還具有圖像處理功能和細(xì)胞生物學(xué)功能，前者包括光學(xué)切片、三維圖像重建、細(xì)胞物理和生物學(xué)測(cè)定、熒光定量、定位分析以及Ca2+、pH及其他活細(xì)胞內(nèi)離子的實(shí)時(shí)定量測(cè)定;后者包括粘附細(xì)胞的分選、激光細(xì)胞顯微外科及光陷阱技術(shù)、熒光漂白后恢復(fù)(FRAP)技術(shù)，細(xì)胞間通訊的研究，細(xì)胞膜流動(dòng)性測(cè)定以及光活化技術(shù)。

本結(jié)果顯示，3種光固化模式對(duì)復(fù)合樹脂固化后的微滲漏無(wú)明顯影響，與有些實(shí)驗(yàn)報(bào)道認(rèn)為弱光引導(dǎo)和間歇光照可改善樹脂的邊緣密閉性的結(jié)果不同，其原因可能是采用了不同的光固化復(fù)合樹脂材料，因?yàn)槲B漏主要是樹脂光固化時(shí)由聚合收縮應(yīng)力、粘結(jié)力、樹脂流動(dòng)能力在聚合過程中相互作用而致，材料本身的性能是引起聚合收縮、影響邊緣密閉性進(jìn)而引起微滲漏的至關(guān)重要的因素，如果采用聚合收縮大、性能較差的復(fù)合樹脂材料，固化時(shí)不同光照方式可能會(huì)產(chǎn)生較大的影響。

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