葉遠(yuǎn)玲 章渭方

[摘要] 目的 通過檢測肺心病急性加重期患者在應(yīng)用參麥注射液治療前、后血小板PAC-1（血小板激活復(fù)合物-1）和CD62p（p-選擇素）表達(dá)水平的變化，觀察參麥注射液的臨床療效，并探討其在肺心病急性加重期治療過程中可能的新的作用機(jī)制。 方法 將入選的60例肺心病患者隨機(jī)分為治療組和對照組，兩組均作常規(guī)治療，治療組在此基礎(chǔ)上加用參麥注射液。并分別于治療前、后采靜脈血，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測比較兩組全血活化血小板標(biāo)記物PAC-1和CD62p水平的變化。同時觀察兩組患者的臨床療效及治療前后血液流變學(xué)的變化。 結(jié)果 治療組加用參麥注射液治療后患者血小板PAC-1和CD62p的陽性百分率分別從（72.63±5.62）%和（52.81±7.42）%下降為（58.42±5.49）%和（42.19±5.46）%，差異具有高度的統(tǒng)計學(xué)意義；而對照組未見上述變化。同時對臨床療效觀察發(fā)現(xiàn)治療組和對照組的總有效率分別為80.0%和63.3%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；且治療組對血液流變學(xué)的影響明顯優(yōu)于對照組（P＜0.05）。 結(jié)論 參麥注射液可顯著提高肺心病急性加重期患者的臨床療效，其作用機(jī)制可能與抑制肺心病患者外周血小板表面PAC-1和CD62p表達(dá)，降低血小板活性有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 參麥注射液；肺心病；PAC-1；CD62p

[中圖分類號] R541.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2012）01-056-03

Influence of Shenmai injections on expression of PAC-1 and CD62p in patients with acute serious chronic pulmonary heart disease

YE Yuanling1 ZHANG Weifang2

1.Department of Emergency, Hangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine (TCM), Hangzhou 310006, China; 2.Surgical Intensive Care Vnit, the First Affiliated Hospital of Zhejiang University，Hangzhou 310006, China

[Abstract] Objective By detecting the difference of expression level on PAC-1 and CD62p before and after the treatment of Shenmai injections in the patients with acute serious chronic pulmonary heart disease，the clinical therapeutic effect and possible role of the Shenmai injections in the treatment of the chronic pulmonary heart disease are studied and analyzed. Methods All of 60 patients with acute serious chronic pulmonary heart disease were randomly divided into treatment group and control group. Conventional treatment was taken for both of them，while the treatment group had additional application of Shenmai injections. By collecting venous blood samples before and after the treatment，positive rates of PAC-1 and CD62p were measured using the flow cytometry， and the difference of them were compared between two groups. Meanwhile, the clinical therapeutic effect of two groups and the difference of the blood rheology before and after the treatment were also observed. Results The positive expression rate of PAC-1 and CD62p of the patients in treatment group declined from (72.63±5.62)% and(52.81±7.42)% to(58.42±5.49)% and(42.19±5.46)%， with significant statistical differences; while the control group had no above changes. The total effective rate of the treatment group and control group were found as 80.0% and 63.3% separately，with significant differences (P＜0.05), and the influence of the blood rheology in treatment group was significantly higher in the control group (P＜0.05). Conclusion The Shenmai injections can significantly improve the clinical therapeutic effect of the patients with acute serious chronic pulmonary heart disease，the mechanism of action can be in relation with reducing the expression of PAC-1 and CD62p，and inhibiting the platelet activity.

[Key words] Shenmai Injections; Chronic pulmonary heart disease; PAC-1; CD62p

隨著醫(yī)學(xué)科技的飛速發(fā)展，近些年來人們對血小板活化在炎癥、血栓性疾病的發(fā)生發(fā)展過程中的重大作用已有共識，COPD是我國的常見病、多發(fā)病，肺心病作為其主要并發(fā)癥，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，是其死亡率升高的主要原因，故血小板活化功能亢進(jìn)與肺心病的關(guān)系日益受到醫(yī)療工作者的重視。近年來，對肺心病死亡患者進(jìn)行的尸檢報告中表明，約有89.8％的病例發(fā)現(xiàn)了肺細(xì)小動脈原位血栓[1]。有研究報道[2]，在感染、缺氧、氧自由基、組胺等因素刺激下，肺心病患者的血小板明顯活化后，PAC-1和CD62p表達(dá)水平顯著增加，患者微小血栓形成，加重了肺動脈高壓，從而使病情惡化。而本研究則主要針對參麥注射液在肺心病急性加重期患者治療中的較好療效，比較了患者用藥前、后血小板PAC-1和CD62p表達(dá)水平的變化，以期探討參麥注射液在肺心病急性加重期治療中過程中可能的新的作用機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

根據(jù)1977年全國第二次肺心病專業(yè)會議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選取2009年3月～2011年3月我院收治的肺心病急性發(fā)作期患者60例。將其隨機(jī)分為治療組和對照組各30例，治療組中男18例，女12例，年齡41～82歲，平均（56.2±5.3）歲，病程5～10年；對照組男19例，女11例，年齡40～83歲，平均（56.5±6.2）歲，病程4～12年。兩組觀察者在性別、年齡、病程分布方面差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。所有參與研究的患者均無糖尿病、血液系統(tǒng)疾病，排除肝腎功能不全及短期內(nèi)腦梗死情況，近期均無包括阿司匹林、波立維、潘生丁、華法林、肝素等影響血小板功能及凝血功能的藥物使用史。

1.2 治療方法

兩組患者均常規(guī)給予吸氧，化痰、解痙、平喘、通暢氣道，有效抗生素控制感染，適當(dāng)強(qiáng)心、利尿，并維持水、電解質(zhì)及酸堿平衡，營養(yǎng)支持等綜合治療。治療組在上述基礎(chǔ)上加用參麥注射液（由正大青春寶藥業(yè)有限公司生產(chǎn)， 批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z33020021，每1 mL相當(dāng)于生藥人參、麥冬各0.1 g）30 mL溶于5%葡萄糖250 mL中靜脈滴注，每日1次，連續(xù)應(yīng)用14 d為一療程。

1.3 流式細(xì)胞儀檢測方法

1.3.1 試劑和儀器異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的單克隆抗體PAC-1 FITC，藻紅蛋白（PE）標(biāo)記的單克隆抗體CD62p-PE，對照劑鼠抗人IgG1-FITC、IgM-PE均購于Beckman-Coulter公司。流式細(xì)胞儀采用美國BD公司的FAGS Calibur型流式細(xì)胞儀，并采用CellQuest獲取和分析信息。

1.3.2 樣本采集和制備①分別在治療前及治療一個療程后，取EDTA抗凝血5 μL分別加入對照管和檢測管管底，再加入100 μL PBS；②取IgG1-FITC和IgM-PE各10 μL加入對照管，取PAC-1 FITC和CD62P-PE各10 μL加入到檢測管，混勻后室溫避光保存15 min；③加入2～3 mL PBS（1.0%PFA）終止反應(yīng)；④24 h內(nèi)上機(jī)分析。

1.4 療效判定標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)《現(xiàn)代內(nèi)科治療學(xué)》中肺心病急性發(fā)作期療效綜合判定標(biāo)準(zhǔn)[3]：顯效：臨床癥狀顯著減輕，肺部啰音消失或顯著減少（肺底偶爾聞及少量細(xì)水泡音），紫紺明顯減輕，水腫消失或明顯減輕，心率降至100次/min以下，心功能改善2級以上，尿量每天較前增加600 mL以上，體重減輕4%，未梢循環(huán)好轉(zhuǎn)；有效：上述指標(biāo)部分減輕或有好轉(zhuǎn)；無效：上述各項(xiàng)指標(biāo)均無好轉(zhuǎn)。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS15.0統(tǒng)計程序，計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；計量資料以（χ±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對血小板PAC-1和CD62p表達(dá)水平的影響

各組血小板PAC-1和CD62P表達(dá)的陽性率見表1。從表1中可見，加用參麥注射液治療后，肺心病患者血小板PAC-1和CD62p的陽性率較治療前顯著下降（P＜0.05），而常規(guī)治療組治療前后各項(xiàng)指標(biāo)雖有下降，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 治療效果

2.2.1 臨床療效觀察臨床療效觀察發(fā)現(xiàn)治療組和對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

2.2.2 對血液流變學(xué)的影響如表3所示，治療組對血液流變學(xué)的影響明顯優(yōu)于對照組。治療組治療前后比較，各項(xiàng)指標(biāo)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而對照組治療前后比較，各項(xiàng)指標(biāo)雖有下降，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

目前普遍認(rèn)為，血小板只有活化了才能實(shí)現(xiàn)黏附、釋放、變形、聚集等功能，并粘附于內(nèi)皮細(xì)胞形成聚集物，導(dǎo)致高凝狀態(tài)，從而引起血栓形成。血小板活化通過多條途徑導(dǎo)致COPD患者肺循環(huán)高凝狀態(tài)和肺小動脈原位血栓形成，參與肺心病的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸過程中。血小板活化釋放大量炎癥介質(zhì)，多種分子標(biāo)志物的表達(dá)顯著增加，其中PAC-1和CD62p是最具特異性血小板活化標(biāo)志物。PAC-1（血小板激活復(fù)合物-1）是現(xiàn)階段最新的特異性激活GPⅡb/GPⅢa的單克隆抗體，只能與活化血小板上的GPⅡb/GPⅢa結(jié)合，其能促進(jìn)血小板與內(nèi)皮細(xì)胞間的黏附以及血小板的相互聚集，是GPⅡb/Ⅲa激活的特異性標(biāo)志，是反映血小板活化的早期標(biāo)志物。CD62p是血管黏附分子家族中的一員，是反映血小板晚期的活化狀態(tài)分子標(biāo)志物[4]。當(dāng)血小板和血管內(nèi)皮細(xì)胞受到各種因素刺激后，血小板α顆粒和中等以上大血管內(nèi)皮細(xì)胞中的Weiber-Palade小體質(zhì)膜迅速與其他組織細(xì)胞膜相融合，主要儲存于α顆粒及Weiber-Palade小體內(nèi)的CD62p被釋放后在細(xì)胞表面迅速而持久的表達(dá)[5]，因?yàn)槠渲荒茉诿擃w粒的活化血小板表面表達(dá)的特性，其表達(dá)水平在未活化和活化的血小板之間差別顯著，故特異性好，是活化血小板最常用的分子標(biāo)志物之一。同時CD62p還具有介導(dǎo)活化血小板與中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的黏附功能，進(jìn)一步增強(qiáng)血小板功能。研究表明，肺心病患者在微生物感染、缺氧狀態(tài)下，血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、細(xì)菌內(nèi)毒素、氧自由基、5-羥色胺、組胺、腫瘤壞死因子等炎癥介質(zhì)等刺激下，血小板明顯活化，促使PAC-1、CD62p表達(dá)顯著增加，促進(jìn)肺心病患者微小血栓形成，加重高凝狀態(tài)及肺動脈高壓，使病情進(jìn)一步惡化。

參麥注射液是我國的傳統(tǒng)中藥制劑，由人參、麥冬二味中藥制成。兩藥合用具有協(xié)同效應(yīng)，藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)參麥注射液可增強(qiáng)心肌收縮力，擴(kuò)張血管，減輕外周血管阻力，降低心臟前后負(fù)荷，增加組織器官的血供，提高動脈血氧分壓，改善組織器官的缺血缺氧狀態(tài)。此外，參麥注射液還具有調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞免疫及體液免疫功能，能提高肺心病患者抗感染的能力[6]，減輕氣道炎癥，有利于肺部感染的控制。因此在前期大量的研究中已證實(shí)了參麥注射液在肺心病治療中的臨床療效[7-8]。而本實(shí)驗(yàn)則重點(diǎn)關(guān)注了參麥注射液對于肺心病患者血小板活化及血液流變學(xué)的影響，實(shí)驗(yàn)分析了肺心病患者應(yīng)用參麥注射液治療前、后血小板表面PAC-1和CD62p表達(dá)變化，結(jié)果顯示用參麥注射液治療后肺心病患者外周血小板表面PAC-1和CD62p的表達(dá)，較對照組有顯著的下降，血小板活性明顯下降，且治療組對血液流變學(xué)的影響也明顯優(yōu)于對照組。提示在肺心病患者治療過程中，在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上，加用參麥注射液能夠有效改善肺心病的臨床癥狀，其作用機(jī)制除了參麥注射液可明顯增強(qiáng)心肌收縮力，減輕心臟前后負(fù)荷，提高心輸出量相關(guān)外，還可能與其能夠抑制血小板表面PAC-1和CD62p蛋白的表達(dá)，進(jìn)而抑制血小板的活化和聚集、抑制凝血系統(tǒng)，從而改善微循環(huán)，降低血液黏稠度，阻礙肺心病患者微小血栓形成有關(guān)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]王辰，杜敏捷，曹大德，等. 慢性肺原性心臟病急性發(fā)作期肺細(xì)小動脈血栓形成的病理觀察[J]． 中華醫(yī)學(xué)雜志，1997，77（2）：123-125.

[2]卞京文，黃茂，馬莉，等． PAC-1、CD62p檢測在慢性阻塞性肺疾病患者防治中的應(yīng)用價值[J]. 實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2010，14（17X）：29-32.

[3]宋善俊. 現(xiàn)代內(nèi)科治療學(xué)[M]. 北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1999：537.

[4]Metzelaar MJ，Heijnen HF，Sixma JJ，et al. Identification of a 33-Kd protein associated with the alpha-granule membrane（GMP-33） that is expressed on the surface of activated platelets[J]. Blood，1992，79（2）：372-379．

[5]Barkalow FJ，Barkalow KL，Mayadas TN．Dimerization of P-selectin in platelets and endothelial cells[J]. Blood，2000，96（9）：3070-3077.

[6]袁興華. 參脈注射液和黃芪注射液聯(lián)用治療肺心病急性加重期療效觀察[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，5（19）：87-88．

[7]肖春. 參麥注射液治療肺心病30例療效觀察[J]． 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（5）：611-612.

[8]廖積岳. 參麥注射液佐治慢性肺心病急性發(fā)作的療效觀察[J]. 中國高等醫(yī)學(xué)教育，2011，2：146.

（收稿日期：2011-10-17）