丁莉 周蕾

[摘要] 目的 探討免疫治療不明原因習慣性流產(chǎn)（URSA）對封閉抗體（BA）表達的影響及臨床意義。 方法 設110例URSA患者為治療組，選擇健康對照組90例及妊娠對照組80例，檢測和比較三組BA、IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg，采用免疫治療BA陰性URSA患者。 結(jié)果 治療前治療組BA陽性率、IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg顯著低于健康對照組、妊娠對照組（P＜0.05）；治療后治療組BA陽性率顯著高于治療前（P＜0.01）；IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg與健康對照組無顯著差異（P＞0.05）；治療組96例BA陽性者中94例（97.92%）成功妊娠，顯著高于BA陰性患者（P＜0.01）。 結(jié)論 URSA與免疫因素有關，通過免疫治療能夠有效提高URSA患者BA陽性率及妊娠成功率。

[關鍵詞] 不明原因習慣性流產(chǎn)；封閉抗體；免疫治療

[中圖分類號] R714.21[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）02-0027-02

Significance and effect of immunotherapy on blocking antibody expression in unexplained recurrent spontaneous abortion

DING LiZHOU Lei

Department of Obstetrics and Gynecology, People's Hospital of Beilun District in Ningbo City in Zhejiang Province, Ningbo 315806, China

[Abstract] Objective To investigate the significance and effect of immunotherapy on blocking antibody (BA) expression in unexplained recurrent spontaneous abortion (URSA). Methods Study group (A) had 110 cases of URSA, healthy group (B) had 90 healthy women, and pregnant group (C) had 80 healthy pregnant women. The BA, IL-6, IL-10, CD4+CD25+highTreg of 3 groups were detected and compared. The cases of BA negative URSA were treated by immunotherapy. Results Before immunotherapy, the BA, IL-6, IL-10, CD4+CD25+highTreg of A group were significantly lower than B and C (P＜0.05). After 3 courses, the BA of A were significantly higher than before treatment (P＜0.01), IL-6, IL-10, CD4+CD25+highTreg of A group were similar to B (P＞0.05), but were higher than before treatment (P＜0.05). There were 96 cases of BA positive in A after treatment,94 cases (97.92%) were successful pregnancy, and the pregnancy success rate was significantly higher than the cases of BA negative (P＜0.01). Conclusion URSA is related to immune factors. Immunotherapy could improve the BA positive rate and the pregnancy success rate of women with URSA.

[Key words] Unexplained recurrent spontaneous abortion; Blocking antibody; Immunotherapy

復發(fā)性自然流產(chǎn)病因復雜，其中40%~60%是不明原因習慣性流產(chǎn)（unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA）。目前認為URSA與免疫因素相關，封閉抗體（blocking antibody，BA）是維持正常妊娠的關鍵，約80%的URSA患者存在BA缺乏[1]。本研究通過觀察URSA患者BA表達及血清學指標，并采用主動免疫的方式進行治療，觀察URSA患者妊娠結(jié)局，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2009年1月～2010年9月我院收治的URSA的患者110例為治療組，年齡24～41歲，平均年齡（31.45±5.28）歲；選擇同期體檢健康非妊娠婦女90例為健康對照組，既往均有1次妊娠史，年齡23～40歲，平均年齡（29.67±6.39）歲；選擇同期我院收治正常早孕要求人工流產(chǎn)婦女80例為妊娠對照組，孕周8～12周，年齡22～38歲，平均年齡（27.95±5.97）歲，本次妊娠無先兆流產(chǎn)征象。三組均無自然流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)史，排除染色體、生殖器解剖結(jié)構(gòu)、內(nèi)分泌異常，感染等，排除自身免疫性疾病，一般資料差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具可比性。

1.2 研究方法

治療組及健康對照組、妊娠對照組于治療前后清晨空腹抽取肘靜脈血5mL，別用采酶聯(lián)免疫吸附法測定BA、IL-6、IL-10；FACSCalibur流式細胞儀檢測CD4+CD25+highTreg。BA、IL-6、IL-10試劑盒由美國Biosource公司生產(chǎn)，CD4+、CD25+指標熒光抗體由美國Becton Dickinson公司生產(chǎn)。

1.3 治療方法

在無菌條件下將配偶肘靜脈血30 mL提取、洗滌淋巴細胞并濃縮為（20～40）×106/mL。將1 mL配偶淋巴細胞懸液于患者手臂分6～10點接種，2～3周接種1次，4次為1個療程。每個療程后檢測BA，陽性者鼓勵其于6個月內(nèi)受孕，確定受孕后維持治療至孕20周，陰性者進行下一療程治療，3個療程后BA陰性患者指導受孕。

1.4 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件包進行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計數(shù)資料以均數(shù)±標準差（χ±s）表示，采用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 三組BA檢測結(jié)果比較

治療前治療組BA陽性率顯著低于健康對照組、妊娠對照組（χ2=7.865，7.213，P＜0.01），兩對照組間差異無統(tǒng)計學意義（χ2=1.658，P＞0.05）；治療3個療程后，治療組BA陽性率較治療前顯著升高（χ2=6.974，P＜0.01）。見表1。

2.2 三組IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg檢測情況

治療組治療前外周血IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg顯著低于健康對照組（t=4.738，4.138，3.785，P＜0.05）和妊娠對照組（t=4.865，4.485，4.012，P＜0.01）；兩對照組間有顯著差異（t=3.146，3.067，3.023，P＜0.05）；治療后治療組IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg與健康對照組無顯著差異（t=1.325，1.267， 1.089，P＞0.05），而低于妊娠對照組（t=3.246，3.107，3.086，P＜0.05），高于治療前（t=4.868，4.368，4.142，P＜0.01），見表2。

2.3 妊娠結(jié)果情況

3個療程后治療組96例BA為陽性，均在6個月內(nèi)受孕，其中94例（97.92%）成功妊娠，2例發(fā)生早期流產(chǎn)；14例陰性均受孕，2例（14.29%）成功妊娠，12例發(fā)生早期流產(chǎn)。兩組妊娠成功率間差異有高度統(tǒng)計學意義（χ2=25.894，P＜0.01）。

3 討論

母體產(chǎn)生的BA能阻斷機體內(nèi)對胚胎的主動免疫作用，保護胚胎免受排斥，成功存活并生長發(fā)育。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)URSA患者BA陽性率僅為20.91%，顯著低于同期健康對照組及妊娠對照組，說明BA缺乏與URSA的發(fā)生存在相關性。針對URSA婦女BA的缺乏，通過提純濃縮后的配偶淋巴細胞，主要是T淋巴細胞，以皮下接種的方式激活患者體內(nèi)體液免疫功能，對T淋巴細胞產(chǎn)生抗體?；颊咴俅问茉泻螅贵w能識別來自配偶的抗原并與之結(jié)合產(chǎn)生封閉作用，從而起到保護胚胎的作用。本研究進行3個療程的免疫治療后有96例患者BA為陽性，陽性率為87.27%，顯著高于治療前，說明免疫治療能有效提高患者體內(nèi)BA水平。同時陽性患者妊娠成功率達97.92%顯著高于陰性組，證明BA避免因免疫排斥反應造成的早期胚胎的死亡及流產(chǎn)；對BA陰性的URSA患者進行主動免疫治療可以有效的提高患者的妊娠成功率。

研究認為輔助T淋巴細胞Th1/Th2的調(diào)節(jié)紊亂與URSA的發(fā)生存在相關性[2]。Th1型細胞對T淋巴細胞主導的細胞免疫有激活的作用，Th2型細胞主要介導體液免疫反應，釋放IL-6、IL-10等細胞因子。BA的封閉作用屬于體液免疫反應，正常妊娠時Th1/Th2向Th2偏移，Th1處于抑制狀態(tài)，體液免疫作用激活具有保護胚胎的作用。CD4+CD25+highTreg淋巴細胞對調(diào)節(jié)Th1/Th2向Th2偏移有重要作用[3]，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，URSA患者CD4+CD25+highTreg顯著低于對照組，與文獻報道的研究結(jié)果相似[4]，說明URSA患者體內(nèi)CD4+CD25+high Treg缺乏，提示在URSA患者受孕后CD4+CD25+highTreg對Th1/Th2的調(diào)節(jié)作用減弱，體液免疫狀態(tài)較低。結(jié)果中URSA患者IL-6、IL-10顯著低于對照組，進一步說明體液免疫被抑制，免疫治療后IL-6、IL-10、CD4+CD25+highTreg的水平均接近健康對照組，提示免疫治療可能通過上調(diào)體液免疫水平起到保護胚胎的作用，而CD4+CD25+highTreg上調(diào)與免疫治療之間的關系仍需進一步研究證明。

本研究認為URSA的發(fā)病原因與免疫反應調(diào)節(jié)失衡有關，體液免疫的抑制導致細胞免疫的激活，對胚胎產(chǎn)生免疫傷害導致多次妊娠失敗。通過檢測BA陽性率可以篩查免疫相關因素的URSA患者，通過免疫治療能夠有效提高BA陽性率及妊娠成功率。

[參考文獻]

[1]丁克文，宋燕，劉娟，等. 反復自然流產(chǎn)患者經(jīng)配偶淋巴細胞免疫治療后外周封閉抗體水平變化[J]. 中國免疫學雜志，2009，25（2）：157-158.

[2]彭婀娜. 不明原因復發(fā)性流產(chǎn)主動免疫治療前后封閉抗體的變化及其意義[J]. 實用婦產(chǎn)科雜志，2010，26（10）：773-775.

[3]夏革清，王澤華，吳超英. Th1/Th2型細胞因子在不明原因早期自然流產(chǎn)絨毛和蛻膜組織中的表達[J]. 實用醫(yī)學雜志，2009，25（17）：2852-2854.

[4]高勇，宋月，安萬新，等. 外周血Th17及CD4+CD25+FoxP3+調(diào)節(jié)性T細胞失衡與不明原因反復自然流產(chǎn)的相關性研究[J]. 國際檢驗醫(yī)學雜志，2011，32（10）：1036-1038.

（收稿日期：2011-09-29）