王魯建，劉冰陽(yáng)，柏樹令

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)1.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院解剖教研室；2.第9 3期臨床醫(yī)學(xué)7年制，沈陽(yáng) 1 1 0 0 0 1）

運(yùn)動(dòng)神經(jīng)終板具有再生能力，因此，在手外傷實(shí)施斷指再植術(shù)和皮膚燒燙傷實(shí)施皮瓣移植術(shù)手術(shù)成功后，運(yùn)動(dòng)功能可基本恢復(fù)正常，但人手的感覺(jué)障礙卻仍普遍存在。由于感覺(jué)神經(jīng)再生問(wèn)題未得到很好的解決，因此，對(duì)人手皮膚感覺(jué)神經(jīng)分布特點(diǎn)的基礎(chǔ)研究顯得尤為重要。本研究擬采用SP免疫組化方法檢測(cè)存在于施萬(wàn)細(xì)胞質(zhì)中的S-100蛋白和構(gòu)成髓鞘主要成分的髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）在人手指皮膚環(huán)層小體（pacinian corpuscle，PC）上的表達(dá)，旨在為解決手指損傷后的感覺(jué)障礙提供形態(tài)學(xué)資料。

1 材料與方法

1.1 材料

取死后1~3 h、不同年齡段的人手皮膚及皮下組織（共32例）。放入10%甲醛溶液中固定后，切割成0.5 cm×0.5 cm大小的組織塊。常規(guī)石蠟包埋，做垂直和水平的連續(xù)切片，切片厚度為5~7 μm，60℃烤片2 h。

1.2 方法

切片經(jīng)常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫苯，水化后，采用即用型鼠源性單克隆抗體S-100蛋白、即用型兔源性單克隆抗體MBP、即用型超敏SP（鼠）免疫組化試劑盒、廣譜超敏SP免疫組化試劑盒及DAB顯色劑（均為福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司提供），進(jìn)行SP免疫組化染色。采用購(gòu)自福州邁新公司的陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照。采用PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照，其它步驟按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定

光鏡下細(xì)胞質(zhì)中存在棕黃色顆粒為陽(yáng)性染色。在S-100和MBP 2種抗體的染色切片中，施萬(wàn)細(xì)胞呈棕黃色，由于切面不同，可呈現(xiàn)圓形、橢圓形或波紋狀等各種形態(tài)。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野（×100），計(jì)數(shù)全部環(huán)層小體的個(gè)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理。由于本資料數(shù)據(jù)為單位面積內(nèi)檢測(cè)個(gè)數(shù)，懷疑不服從正態(tài)分布。資料經(jīng)χ2檢驗(yàn)后得知服從泊松分布，同時(shí)考慮到年齡的混雜影響，故在比較不同部位平均數(shù)量的差別時(shí)先對(duì)原始數(shù)據(jù)作平方根變換，然后采用了年齡與部位的雙因素方差分析。在考察數(shù)量隨年齡的變化趨勢(shì)時(shí)，利用單因素方差分析進(jìn)行了各年齡段之間的比較及趨勢(shì)分析。

2 結(jié)果

2.1 人末節(jié)指骨表面皮膚（指紋區(qū)）及皮神經(jīng)的形態(tài)分布特點(diǎn)

真皮乳頭層與表皮底面凹陷嵌合，其內(nèi)有豐富的神經(jīng)末梢和血管網(wǎng)，神經(jīng)多在小血管附近，數(shù)量多而直徑較細(xì)，通常由數(shù)個(gè)施萬(wàn)細(xì)胞聚集在一起。手指的屈側(cè)面有許多細(xì)嵴（表皮嵴）和淺溝，呈平行排列，并構(gòu)成特殊的圖樣。每條表皮嵴的深部包被著2條非同源的真皮乳頭嵴。表皮嵴的正中部恰與非同源真皮乳頭嵴間溝相對(duì)應(yīng)。在表皮嵴的中線上，汗腺按一定的距離開口于表面。

皮神經(jīng)在網(wǎng)織層廣泛分支形成網(wǎng)織層神經(jīng)叢，分布到真皮結(jié)締組織及其中的汗腺、皮脂腺和小血管周圍。在神經(jīng)束橫斷面上可見數(shù)個(gè)施萬(wàn)細(xì)胞聚集在一起呈圓形或橢圓形，神經(jīng)束與血管伴行。在汗腺周邊有施萬(wàn)細(xì)胞環(huán)繞排列，在其附近有神經(jīng)叢伴行。

2.2 人手皮膚的環(huán)層小體的形態(tài)與分布特點(diǎn)

免疫組化結(jié)果顯示，人手的皮下組織內(nèi)普遍存在環(huán)層小體，小體呈圓形、卵圓形，常集合成小群。小體外周由幾十層結(jié)締組織扁平細(xì)胞疏松排列，形成同心板層的被囊。進(jìn)入被囊的神經(jīng)纖維構(gòu)成了圓柱體—內(nèi)棍（圖1）。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，同一個(gè)體中環(huán)層小體在指紋區(qū)、魚際區(qū)、手背、掌指關(guān)節(jié)區(qū)等不同部位單位面積內(nèi)的平均數(shù)量分布不同，魚際區(qū)、掌指關(guān)節(jié)區(qū)的平均數(shù)量偏高。環(huán)層小體在不同個(gè)體間的相同部位上的分布情況與年齡無(wú)關(guān)（表1）。

圖1 環(huán)層小體中S-1 0 0蛋白的陽(yáng)性表達(dá) S P法×2 0 0F i g.1 E x p r e s s i o no f S-1 0 0p r o t e i ni np a c i n i a nc o r p u s c l e s S P×2 0 0

表1 不同年齡段環(huán)層小體在不同部位的分布（x±s）T a b.1 P a c i n i a n c o r p u s c l e d i s t r i b u t i o n i n d i f f e r e n t p a r t s o f t h e b o d y a t d i f f e r e n t a g e s（x±s）

3 討論

3.1 S-100蛋白和MBP免疫過(guò)氧化物酶染色標(biāo)記施萬(wàn)細(xì)胞具有特異性

在周圍神經(jīng)組織內(nèi)，施萬(wàn)細(xì)胞與神經(jīng)纖維關(guān)系最密切。施萬(wàn)細(xì)胞是一種神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。S-100蛋白存在于施萬(wàn)細(xì)胞質(zhì)中，是神經(jīng)系統(tǒng)中一種特殊的蛋白質(zhì)，周圍神經(jīng)的髓鞘與這種細(xì)胞有關(guān)。MBP是構(gòu)成髓鞘的2種特殊的蛋白質(zhì)之一，約占髓鞘蛋白總量的1/3，它可能與髓鞘的主致密線形成有關(guān)。主要用于標(biāo)記少突膠質(zhì)細(xì)胞和施萬(wàn)細(xì)胞。

3.2 人末節(jié)指骨表面皮膚（指紋區(qū)）及皮神經(jīng)的形態(tài)分布特點(diǎn)

人手指皮膚的真皮乳頭層伸出許多乳頭，與表皮底面凹陷嵌合，在2者的交界面上形成真皮—表皮連接。乳頭頂部呈圓形，并可再分出幾個(gè)小乳頭。在薄皮膚，特別是機(jī)械性刺激較少而感覺(jué)不敏銳的部位，乳頭較少并較小。在手掌的厚皮膚中，乳頭大而多，并伴同表皮表面的嵴和溝形成彎曲而平行的嵴。在每個(gè)表皮嵴下面有2行縱向的乳頭，位于嵴中線的兩側(cè)，而汗腺則由中線處進(jìn)入表皮。乳頭中有毛細(xì)血管袢，尤其是無(wú)毛的厚皮膚中，乳頭中常有觸覺(jué)小體［1，2］。厚皮膚具有摩擦嵴，能耐受機(jī)械性的摩擦，便于運(yùn)動(dòng)和手工操作，需要更大的結(jié)構(gòu)強(qiáng)度，需要眾多的汗腺以散熱，并有豐富的感覺(jué)末梢。

3.3 人手皮膚的環(huán)層小體的形態(tài)分布特點(diǎn)

環(huán)層小體常集合成小群分布于皮膚的真皮下層、皮下層、骨膜和關(guān)節(jié)囊等處，以手掌、指、腸系膜處最常見，感受壓覺(jué)和振動(dòng)覺(jué)。小體外周有幾十層結(jié)締組織扁平細(xì)胞疏松排列，形成同心板層的被囊。1條粗的纖維進(jìn)入被囊失去髓鞘，分出幾個(gè)平行支，其終末被扁平細(xì)胞的片狀胞質(zhì)板緊密環(huán)抱，形成光鏡下所見的中央無(wú)結(jié)構(gòu)的圓柱體，稱內(nèi)棍［3，4］。環(huán)層小體內(nèi)有1條或數(shù)條小血管和可能屬于血管運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的無(wú)髓神經(jīng)纖維［5］。

本研究發(fā)現(xiàn)，同1個(gè)體各個(gè)手指上環(huán)層小體的平均數(shù)量不同，我們認(rèn)為這是由于各個(gè)手指的大小不同所導(dǎo)致。另外，同1個(gè)體手中的環(huán)層小體在指紋區(qū)、掌指關(guān)節(jié)區(qū)、魚際區(qū)、手背等不同部位單位面積內(nèi)的平均數(shù)量分布也不同，掌指關(guān)節(jié)區(qū)、魚際區(qū)的平均數(shù)量偏高，這與人手工作、生活的習(xí)慣相符合。環(huán)層小體在不同個(gè)體間的相同部位上的分布情況與年齡無(wú)關(guān)。

［1］Odland GF.Biochemistry and physiology of the skin［M］.New York：Oxford University Press，1983：3-63.

［2］Brammer AJ，Sutinen P，Das S，et al.Quantitative test for sensory hand symptoms based on mechanoreceptor-specific vibrotactile thresholds［J］.J Acoust Soc Am，2010，127（2）：1146-1155.

［3］Guha AR，McMurtrie A，Singh R.The Pacinian corpuscle：a method of locating the digital nerve［J］.J Hand Surg Eur Vol，2009，34（5）：696-697.

［4］García-Suárez O，Montan｀o JA，Esteban I，et al.Myelin basic proteinpositive nerve fibres in human Meissner corpuscles ［J］.J Anat，2009，214（6）：888-893.

［5］VegaJA，García-SuárezO，Montan｀o JA，etal.TheMeissner and Pacinian sensory corpuscles revisited new data from the last decade［J］.Microsc Res Tech，2009，72（4）：299-309.