王文瓊，熊建群，高曉波

荊州市中心醫(yī)院藥劑科，湖北荊州 400000

葛龍舒絡顆粒的制備工藝研究

王文瓊，熊建群，高曉波

荊州市中心醫(yī)院藥劑科，湖北荊州 400000

目的：研究葛龍舒絡顆粒的制備工藝。方法以干膏得率和葛根素含量作為評價指標，采用L9(34)正交試驗法優(yōu)選葛龍舒絡顆粒的提取工藝；以顆粒吸濕性、流動性和成型性為指標，對干法制粒的工藝進行研究。結(jié)果最佳提取工藝為：加12倍水，回流提取2次(2、1.5 h)；干壓法制備得到的顆粒吸濕性、流動性和成型性好。結(jié)論優(yōu)選得到的葛龍舒絡顆粒工藝穩(wěn)定可行，可應用于工業(yè)化生產(chǎn)。

葛龍舒絡顆粒；正交設計；制備工藝

腰椎間盤突出癥[1]是臨床常見病，是引起腰腿疼痛的主要疾病之一，屬于中醫(yī)“腰痛”、“痹癥”范疇。本病主要是由于腎虛、寒凝、濕滯、瘀血而致腰府筋脈痹阻，不通則痛。治療方法以補腎、散寒除濕、活血化瘀為主。

葛龍舒絡顆粒來源于臨床經(jīng)驗方，原方由葛根、地龍、川芎和獨活等藥物組成，具有消腫止痛、活血通絡之功效，臨床以湯劑治療腰椎間盤突出和骨質(zhì)增生療效顯著。為將本方開發(fā)成中藥成方制劑，本研究以中醫(yī)藥理論為指導，根據(jù)現(xiàn)代中藥化學、現(xiàn)代藥理研究成果及臨床使用特點，利用現(xiàn)代制劑技術(shù)對葛龍顆粒的提取、濃縮、干燥和成型工藝進行了研究，確定了葛龍舒絡顆粒的制備方法?，F(xiàn)將研究報道如下：

1 儀器與試藥

DZF-6050真空干燥箱（上海一恒科技有限公司）；METTLER XS205DU電子分析天平(METTLER XS205DU，瑞士)；TC-15套式恒溫器（海寧市新華醫(yī)療器械廠）；RE5298A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；Agilent 1200高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；DC-1500噴霧干燥機（上海達程公司）；GK-70型干式造粒機制粒（江蘇瑰寶制藥機械廠）。

葛根、地龍、川芎、獨活等藥材均購于湖北省藥材公司中藥飲片廠，經(jīng)荊州市中心醫(yī)院中藥師鄭迎輝鑒定符合《中國藥典》2005版藥材質(zhì)量標準；葛根素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號752-200108)；糊精、淀粉均為藥用規(guī)格；甲醇、正丁醇為色譜純試劑，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝的研究

根據(jù)前期藥理試驗結(jié)果，將本方川芎和獨活等藥材先行提取揮發(fā)油，葛根等其他藥材水提，水提液與川芎、獨活等提取揮發(fā)油后的水溶液合并，濃縮干燥后，加入揮發(fā)油制成顆粒，初步藥效作用顯示優(yōu)于諸藥合煎。故本顆粒采取分開提取的工藝路線。

2.1.1 揮發(fā)油提取工藝的篩選根據(jù)文獻資料[2-3]，川芎、獨活等藥材含有較多的揮發(fā)油，且揮發(fā)性成分具有良好的活血、抗炎等藥理作用，故應進行揮發(fā)油的提取。根據(jù)預試驗結(jié)果，本方中揮發(fā)油可用水蒸氣蒸餾法合并提取。水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油的主要影響因素為蒸餾時間，可按照《中國藥典》2005版一部附錄X D揮發(fā)油測定方法進行蒸餾提取。

2.1.2 吸水率的考察按比例稱取5倍處方量的藥材3份，分別加20倍量的水浸泡，每隔1 h測量一次藥材吸水量，直至藥材幾乎不再明顯吸水為止，濾過，量取濾液體積，計算藥材吸水率，求得藥材吸水率為200%。

2.1.3 加水量的考察按比例稱取5倍處方量的藥材5份，以收油量為考察指標，加不同量的水浸泡2 h，水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油8 h，結(jié)果見表1。

表1 加水量考察結(jié)果（n=3）

由表1可見，加水量為8倍時，提取的揮發(fā)油最多。

2.1.4 提油時間的考察按比例稱取5倍處方量的藥材5份，加入8倍量的水，浸泡2 h，提取揮發(fā)油，記錄不同時間的揮發(fā)油收油量，結(jié)果見表2。

從試驗結(jié)果可知，當提取時間達到6 h時，收油量達到總收油量的87%以上，為了節(jié)省能源，確定揮發(fā)油的提取時間為6 h。

2.1.5 揮發(fā)油提取驗證實驗根據(jù)因素篩選試驗中確定的各條件驗證3批，結(jié)果見表3。

表2 提取時間與提油量考察結(jié)果

表3 揮發(fā)油提取驗證試驗結(jié)果

由表3結(jié)果可知，驗證結(jié)果與實驗結(jié)果相近，說明該工藝基本穩(wěn)定可靠。

2.2 水提工藝研究

根據(jù)預實驗結(jié)果，選取浸泡時間(A)，加水倍量（B），提取時間（C），作為考察因素，各取3個水平，進行L9（34）正交試驗，篩選最佳工藝條件。以葛根素的提取率和干膏得率為考察指標，進行綜合評價，篩選最佳工藝。因素水平見表4，實驗方案見表5。

2.2.1 正交試驗樣品制備

按處方量的比例稱取葛根、地龍等藥材共9份，分別按照表5的正交試驗安排進行水煎煮提取，提取液濾過、濃縮、放冷，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 總固體物的測定

精密吸取各樣品濃縮液10ml，至已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，照干燥失重法(《中國藥典》2005年版一部附錄ⅨG)測定，計算干膏得率，公式如下：

2.2.3 葛根素含量測定[4]

2.2.3.1 色譜條件色譜柱為Phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水（25∶75）；檢測波長：250 nm；流速：1 m l/min；柱溫：30℃。

2.2.3.2 對照品溶液的制備精密稱取葛根素對照品10 mg置50 ml容量瓶中，加30%乙醇使溶解并稀釋至刻度，精密吸取5m l，置25 m l量瓶中，加30%乙醇至刻度，搖勻，即得（每1ml含葛根素43μg）。

2.2.3.3 供試品溶液的制備精密吸取樣品溶液5ml，置中性氧化鋁-D101大孔吸附樹脂柱（內(nèi)直10 mm，樹脂高12 cm，上加中性氧化鋁2.0 g）上，用50ml水洗脫除雜，再用50%的乙醇250ml洗脫，收集洗脫液，定容至250ml，搖勻，過0.45μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液，備用。

表4 因素水平表

表5 正交試驗安排及結(jié)果表

2.2.3.4 標準曲線的繪制精密量取葛根素對照品溶液（43μg/ml）2、4、8、12、16、20μl進樣，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積（Y）對進樣量（X）進行回歸，得回歸方程：Y=57 817.9X-136.48，r=0.999 8。結(jié)果表明：在0.128～1.280μg范圍內(nèi)，葛根素峰面積與進樣量呈良好的線性關(guān)系。

2.2.3.5 樣品含量測定精密吸取各正交試驗供試品溶液各10μl進樣，記錄色譜圖，根據(jù)供試品吸收度積分值與對照品積分值，外標兩點法計算，即得。

2.2.4 提取工藝優(yōu)化葛根作為方中君藥，葛根素為其有效成分之一，且其含量測定方法成熟，可以用HPLC法測定提取物中葛根素的含量，以此來評價工藝的優(yōu)劣，選擇其作為評價指標之一，權(quán)重系數(shù)定為0.5。而作為有效成分煎出間接控制的一個指標，藥效物質(zhì)提取的多少可以從得膏率的大小來判斷，權(quán)重系數(shù)定為0.5。利用SPSS12.0統(tǒng)計軟件對評分結(jié)果進行數(shù)據(jù)處理，由直觀分析和方差分析判斷各因素對提取效果的影響程度，篩選出在該試驗條件下的優(yōu)化提取參數(shù)。正交試驗結(jié)果和方差分析見表5、表6.

表6 方差分析結(jié)果表

由直觀分析可知，影響提取效果的因素順序為：加水量＞提取時間＞浸潤時間，由此得出的最佳工藝組合為A2B3C3。經(jīng)過方差分析，加水量和提取時間對提取結(jié)果具有顯著性影響，而浸泡時間對實驗結(jié)果均無顯著性影響。綜合考慮到縮短生產(chǎn)周期，降低生產(chǎn)成本等綜合因素，選擇A2B3C3作為水提取工藝參數(shù)，即浸泡1.0 h，提取2次，加水量為12倍，提取時間第一次為2.0 h，第二次為1.5 h。

2.2.5 驗證實驗為確定該工藝的優(yōu)劣和穩(wěn)定性，據(jù)所篩選的最佳條件，驗證三批，結(jié)果見表7。由表7可知，驗證試驗結(jié)果與正交試驗優(yōu)選結(jié)果吻合，說明正交試驗選出的工藝條件合理，工藝條件穩(wěn)定可行。

表7 工藝驗證實驗

2.3 濃縮干燥工藝的考察

中藥提取液在濃縮操作中通常要求高濃縮比，高濃縮效率，又不能損失有效成分。普通常壓濃縮加熱時間長，耗能大，現(xiàn)多不采用此法。本工藝結(jié)合現(xiàn)有設備條件，對提取液采用減壓濃縮。試驗結(jié)果表明，真空度控制在-0.05～-0.07MPa之間，可達良好的濃縮效果。

噴霧干燥技術(shù)是流化技術(shù)用于液體物料干燥的良好方法，由于其干燥效率高，對有效成分破壞少，輔料用量少，浸膏損失少，污染源少，浸膏粉可用于多種制劑的生產(chǎn)，提高了成品質(zhì)量，有利于規(guī)?；?、規(guī)范化生產(chǎn)，符合GMP要求等特點，近年來已經(jīng)廣泛的應用于中藥的生產(chǎn)中。本實驗在固定出風溫度為85℃的前提下，對影響噴霧干燥的主要因素料液相對密度、進風溫度和進料速度進行了考察。以粉末含水量和粉末性狀作為評價噴霧干燥效果指標，利用單因素試驗法選擇噴霧干燥工藝參數(shù)，試驗方案和結(jié)果見表8。

表8 葛根水提液噴霧干燥試驗結(jié)果

由實驗結(jié)果并綜合考慮噴干效率和節(jié)約工時，以料液相對密度1.10，進風溫度185℃，出風溫度85℃，進料速度350 r/min為宜。

2.4 成型工藝研究

2.4.1 輔料選擇

由于原處方臨床使用劑量較大，為了使制備的顆粒劑具備適宜服用體積，故不宜于加入過多輔料。干法制粒技術(shù)可以大大減少顆粒制備的輔料用量，成型率高，制備工藝簡單，因此成型工藝采用干法制粒。本文選用價廉易得的糊精和淀粉作為輔料，以干膏粉第一次通過干法制粒機所得合格顆粒的一次成型率為指標，對輔料的配比進行優(yōu)選，結(jié)果見表9。

表9 不同輔料對顆粒成型性的影響考察

結(jié)果顯示，加入5%和10%的糊精顆粒的一次成型率較高，分別達到31.2%和35.1%，為了減少輔料的用量，故選擇糊精用量為5%為宜。

2.4.2 顆粒制備

按上述優(yōu)選的結(jié)果，取噴干粉與5%糊精混合均勻，采用干壓顆粒機制粒，工藝參數(shù)為：室溫25℃，相對濕度為56%，轉(zhuǎn)速15 r/min，干壓送樣頻率為25 r/min，20目搓粒，主壓為4.0 MPa。干顆粒噴加川芎、獨活等藥材的揮發(fā)油，混勻，分裝，即得。

2.4.3 休止角的測定

為保證顆粒劑量裝量準確，要求填充藥粉有良好的流動性。試驗中采用測定休止角的方法來考察藥粉的流動性。取適量藥粉，用固定漏斗法測定休止角，結(jié)果見表10。由表可知，葛龍舒絡顆粒休止角小于40°，流動性可以滿足顆粒分裝的要求。

表10 葛龍舒絡顆粒休止角測定結(jié)果

2.4.4 臨界相對濕度的測定將上述顆粒干燥至恒重后，在已恒重的稱量瓶底部放入約2 mm的顆粒，準確稱量后置于所列的分別盛有7種不同濕度的干燥器，打開稱量瓶蓋，于25℃恒溫培養(yǎng)箱中保持96 h達到吸濕平衡后，精密稱重，計算吸濕百分率。以吸濕百分率數(shù)據(jù)為縱坐標，相對濕度數(shù)據(jù)為橫坐標作圖，繪出顆粒吸濕平衡曲線，通過作圖法求得臨界相對濕度，結(jié)果見表11和圖1。

臨界相對濕度是藥物吸濕與否的臨界值，根據(jù)它確定生產(chǎn)時的環(huán)境濕度，由實驗結(jié)果可知，制成顆粒的臨界相對濕度為60%，故在生產(chǎn)本制劑時，車間環(huán)境的相對濕度應控制在60%以下。

3 討論

葛根素是本方君藥葛根的主要有效成分，含量較高，且檢測方法簡便快速，故選其作為提取工藝考察的指標進行評價[5]。

表11 臨界相對濕度吸濕率結(jié)果

搖擺制粒、離心造粒和干壓制粒都是本工藝可以選擇的造粒方法，但是由于本方屬于中藥制劑，具有服用劑量大，易吸潮和黏性強等特點，采用干法造?？梢詼p少輔料用量，提高顆粒收率，節(jié)約能源等優(yōu)點，確立本工藝采用干法制粒。

干法制粒時由于中藥浸膏粉末黏性大，易吸潮，導致流動性差。故在本處方的浸膏粉末中加入5%的糊精作為稀釋劑，增加粉末的流動性，減少吸潮[6]。同時在生產(chǎn)過程中應嚴格控制生產(chǎn)車間濕度，并提高顆粒包裝的密封性來增加藥物在儲存過程中的穩(wěn)定性。中藥復方顆粒劑近年來發(fā)展很快，筆者參考文獻資料，在試驗基礎上綜合研究，科學地探討了處方組成，并全面研究了葛龍舒絡顆粒劑有關(guān)制劑學參數(shù)的意義與測定，成粒工藝的設備與條件，在此基礎上確定了最佳處方組成及制備工藝，具有很好的開發(fā)前景。

[1]鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導原則[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社, 2002:127.

[2]陳友鴻,莫尚志.川芎揮發(fā)油成分研究[J].中藥材,2004,27(8):580.

[3]楊木華，楊志文.獨活揮發(fā)油提取工藝的研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2009,20(6):582-583.

[4]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學工業(yè)出版社,2005:233-234

[5]李洪玉,戴詩文,壽旦,等.葛粉中葛根素的高效液相色譜分析[J].中國實用醫(yī)藥,2009,4(1):39-40.

[6]蔡偉慶.中藥顆粒劑輔料的研究進展[J].黑龍江醫(yī)藥,2008,5(15):88-90.

Study on the preparation technology of Gelong Shuluo Granula

WANGWenqiong,XIONG Jianqun,GAO Xiaobo
Departmentof Pharmacy,Jingzhou Center Hospital,Jingzhou 400000,China

Objective:To optimize the preparation process of Gelong Shuluo Granule.MethodsThe optimum extraction of Gelong Shuluo Granule was investigated by the L9(34)orthogonal experimentwith hydroscopicity,fluidity and formability as the indexes,the dry granulating process was evaluated.ResultsThe optimum extraction procedures were as follows: adding 12 timeswater,the refluing extraction was carried out for 2 times(2 hours,1.5 hours).And the hydroscopicity,fluidity and formability of the granulewere in accord withmanufacture requirements.ConclusionThe optimized extraction and formating processes are stable and feasible,and can be used in the production.

Gelong Shuluo Granule；Orthogonal design；Process technical

R944.2

A

1673-7210（2011）04（b）-056-04

2011-01-13）