周 蕾 于東紅魏 軍 俞 嵐 歐玉榮 王愛蓮 承澤農(nóng)

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科;蚌埠醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室;安徽省感染與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,蚌埠 233003)

胃癌組織中幽門螺桿菌L型感染及骨橋蛋白檢測的意義

周 蕾 于東紅＊魏 軍 俞 嵐 歐玉榮 王愛蓮 承澤農(nóng)

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科;蚌埠醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室;安徽省感染與免疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,蚌埠 233003)

目的 通過檢測胃癌組織中幽門螺桿菌L(HP-L)型感染以及OPN的表達(dá)情況,探討 Hp-L型感染對(duì)胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移生物學(xué)行為的影響及可能機(jī)制。方法 ①應(yīng)用革蘭染色及免疫組化(SP)法檢測120例胃癌組織中的 Hp-L型感染情況;②應(yīng)用免疫組化(SP)法檢測胃癌組織中的OPN的表達(dá)。分析Hp-L型感染與OPN表達(dá)的關(guān)系以及和臨床病理因素之間的關(guān)系。結(jié)果 ①120例胃癌組織中有88例革蘭染色檢出 Hp-L型,其陽性率為73.3%(88/120);免疫組化 Hp-L型抗原表達(dá)陽性率為70.8%(85/120),革蘭染色 Hp-L型檢出和 Hp-L型抗原表達(dá)同時(shí)陽性的病例有82例(兩者同時(shí)陽性者為 Hp-L型陽性),其陽性率為68.3%(82/120)。②胃癌組織中 Hp-L型陽性組的OPN表達(dá)陽性率分別為70.73%(58/82),高于 Hp-L型陰性組表達(dá)率,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.005)。經(jīng)四格表資料χ2檢驗(yàn),胃癌組中 Hp-L型陽性與OPN陽性表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.27,P<0.001)。③胃癌中 Hp-L型陽性與腫瘤的大小、癌細(xì)胞的血管侵襲、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(P<0.001-P<0.05)。結(jié)論 Hp-L型感染是引起胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移的重要因素之一,促進(jìn)胃癌的發(fā)展,其機(jī)制可能與胃癌細(xì)胞的OPN表達(dá)量增加有關(guān)。

幽門螺桿菌L型; 胃癌; 侵襲; 轉(zhuǎn)移; 骨橋蛋白; 免疫組織化學(xué)

大量研究表明幽門螺桿菌(Hp)及其L型感染與胃癌的發(fā)生密切相關(guān),而對(duì)于 Hp及其L型感染與胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系得研究甚少。骨橋蛋白(osteopontin,OPN)是近年來發(fā)現(xiàn)的與惡性腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的一種蛋白。本實(shí)驗(yàn)主要探討Hp-L型感染對(duì)OPN表達(dá)的影響以及它們在胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用,從而為胃癌的診斷治療提供新思路。

材料和方法

1.材料 隨機(jī)挑選我科2006-2007年確診為胃癌的手術(shù)存檔蠟塊120例。所有蠟塊經(jīng)重新切片復(fù)查,每例連續(xù)切片數(shù)張,4μm厚進(jìn)行革蘭染色及免疫組化染色。免疫組化主要試劑:OPN鼠抗人單克隆濃縮型抗體(sc 21742)購自于Santa Cruz生物科技公司(工作濃度為1∶100)。Hp-L多克隆抗體,由蚌埠醫(yī)學(xué)院微生物教研室?guī)椭谱鳌?/p>

2.革蘭染色檢測胃癌組織中 Hp-L型感染情況,油鏡(10×100)觀察并計(jì)數(shù),每例隨機(jī)觀察10-15個(gè)視野,取平均數(shù),Hp-L型和 Hp平均數(shù)≥20為陽性,<20或未查見 Hp-L型和 Hp為陰性,Hp-L型形態(tài)多樣,大小不等,有巨型體、圓球體、短棒狀等,革蘭陰性呈紅色,陽性呈紫色;Hp則呈螺旋形、“S”形或海鷗形。

3.免疫組織化學(xué)染色 檢測OPN表達(dá),陽性染色見于腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi),呈棕黃色顆粒;切片中細(xì)胞陽性數(shù)≤10%為(-),細(xì)胞陽性數(shù)>10%為(+)。Hp-L型抗原免疫組化的陽性標(biāo)準(zhǔn)為:在癌巢或間質(zhì)中見到棕黃色顆粒為Hp-L型抗原表達(dá)陽性。

4.判斷標(biāo)準(zhǔn)革蘭染色 Hp-L型檢出和免疫組化Hp-L型抗原表達(dá)同時(shí)陽性者定為 Hp-L型感染陽性。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用四格表資料χ2檢驗(yàn)分析。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.胃癌組織 Hp-L型感染陽性率、形態(tài)及在組織中的分布 胃癌組織中有88例革蘭染色檢出L型,檢出陽性率為73.33%(88/120),免疫組化 Hp-L型抗原表達(dá)陽性85例(見附圖1,2),其陽性率為70.83%(85/120),革蘭染色L型檢出和 Hp-L型抗原表達(dá)同時(shí)陽性的病例有 82例,占 68.33%(82/120)(兩者同時(shí)陽性被定為 Hp-L型感染陽性)。革蘭染色切片發(fā)現(xiàn) Hp-L型可散在分布于癌性腺腔、癌巢和間質(zhì)中,亦可聚集于其中,同時(shí)可見 Hp-L型黏附于胃癌細(xì)胞表面或位于癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)(圖1)。

2.胃癌組織 Hp-L型感染、OPN表達(dá)與臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系 從表1可見,胃癌中 Hp-L型陽性、OPN陽性與腫瘤大小、癌細(xì)胞的血管侵犯、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),腫瘤直徑大于3cm者多于小于3cm者;侵及漿膜者多于未侵及漿膜者;累及血管者多于未累及者;發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者多于無轉(zhuǎn)移者,以上各組經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.005-P<0.05)。

表1 Hp-L型感染、OPN陽性與胃癌臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系Table 1 The relationship among clinic pathological index of gastric carcinoma and Hp-L infection、OPN

3.Hp-L型感染與腫瘤組織中OPN表達(dá)之間的關(guān)系 由表2可見,Hp-L型感染陽性組中OPN陽性(圖3)例數(shù)高于 Hp-L型感染陰性組。兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.005)。Hp-L型感染與OPN陽性表達(dá)率均有相關(guān)關(guān)系(r=0.27)。

表2 胃癌組織 Hp-L型感染與OPN表達(dá)的關(guān)系Table 2 The relationship between OPN expression and Hp-L infection

討 論

胃癌是我國十大惡性腫瘤之一,其發(fā)病率及死亡率均居前三位。大量的研究顯示幽門螺桿菌(Hp)感染是胃癌發(fā)病的重要原因[1,2]。隨著人們對(duì)Hp研究的深入,發(fā)現(xiàn) Hp在不利于其生長繁殖的環(huán)境中易發(fā)生細(xì)胞壁缺失而形成 Hp-L型。Hp-L型具有多樣性,可呈球形、卵圓形、膨大的桿狀或細(xì)絲狀等。Hp-L型對(duì)環(huán)境抵抗力強(qiáng),對(duì)抗生素等具有較強(qiáng)的抵抗力[3,4],是 Hp適應(yīng)外界不良條件的一種自我保護(hù)形式。由于 Hp-L型細(xì)胞壁缺陷,表面的電荷改變、抗原性降低等,使 Hp-L型對(duì)宿主細(xì)胞黏附性明顯強(qiáng)于 Hp,故容易侵入宿主細(xì)胞定植,并在其內(nèi)生長繁殖,因此能逃避機(jī)體免疫攻擊和藥物作用,在宿主細(xì)胞內(nèi)長期潛藏,造成宿主細(xì)胞的慢性損傷,一旦條件適宜,Hp-L型還可恢復(fù)成原菌(即Hp)。因此 Hp-L型比 Hp更具有潛伏性、侵襲性和難消除性。Hp-L型與多種惡性腫瘤尤其是胃癌的發(fā)生密切相關(guān)[5,6]。我們實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,Hp-L型陽性組中腫瘤直徑>3cm、浸潤到漿膜層、有血管侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯增多,數(shù)據(jù)經(jīng)四格表資料χ2檢驗(yàn)分析 P<0.05,Hp-L型陽性組和陰性組臨床病理指標(biāo)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明,Hp-L型感染可促進(jìn)胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。

骨橋蛋白(osteopontin,OPN)是近年來發(fā)現(xiàn)的與惡性腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的一種蛋白。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和侵襲是一個(gè)多因素多步驟的過程,而OPN所具有的一些功能正是這些腫瘤事件中所需要的。OPN的可能作用機(jī)制主要有以下幾個(gè)各方面:①OPN含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列,該序列與細(xì)胞黏附密切相關(guān),可與腫瘤細(xì)胞表面的整合素受體相結(jié)合,激活一系列細(xì)胞內(nèi)信號(hào),促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移[7];②與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、血管通透因子(VPF)協(xié)同作用,促進(jìn)腫瘤生長,加快腫瘤遷移[8];③通過腫瘤細(xì)胞表面的CD44,尤其是CD44v6介導(dǎo)細(xì)胞黏附與遷移[9];④以自分泌形式促進(jìn)自身生長,并與自身細(xì)胞表面受體結(jié)合,導(dǎo)致細(xì)胞移動(dòng)能力增強(qiáng),蛋白溶解酶分泌增加,引起基質(zhì)降解[10];⑤抑制激活的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮(NO),提高腫瘤細(xì)胞存活能力[11]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)OPN表達(dá)陽性者腫瘤直徑>3cm、浸潤到肌層和漿膜層、有血管侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯增多,說明OPN的表達(dá)可促進(jìn)胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。

我們對(duì) Hp-L型感染和OPN表達(dá)的關(guān)系進(jìn)行研究和分析,發(fā)現(xiàn) Hp-L型陽性組中OPN表達(dá)陽性的例數(shù)較Hp-L型陰性組中OPN和表達(dá)陽性的例數(shù)明顯增多,數(shù)據(jù)采用卡方檢驗(yàn)分析 P<0.05,兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明 Hp-L型感染可促進(jìn)胃癌組織中OPN的表達(dá)。

綜上所述,Hp-L型感染可導(dǎo)致胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng),其機(jī)制之一可能是增加胃癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白OPN的表達(dá)。

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圖 版 說 明

圖1 胃癌癌巢內(nèi)的 Hp-L型,箭頭處為 Hp-L型位于癌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)(革蘭染色 ×1000)

圖2 胃癌中 Hp-L型抗原表達(dá)陽性(SP法×400)

圖3 胃癌細(xì)胞OPN蛋白表達(dá)陽性(SP法×400)

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1 Hp-L form of stomach carcinoma. Gram’s staining ×1000

Fig.2 Hp-L form positive picture of stomach carcinoma. SP method×400

Fig.3 The expression of OPN in the gasric carcinoma cells.SP method×400

Effect of helicobacter pylori L-form infection and expression of osteopontin on gastric carcinoma and its significance

Zhou lei,Yu Donghong＊,Wei Jun,Yu Lan,Ou Yurong,Wang Ailian,Cheng Zenong

(The f irst A f f iliated Hospital of Bengbu Medical College,Department ofPathology,Bengbu Medical College,A nhui Key L aboratory of Inf ection and Immunology,Bengbu233003China)

Objective To detect the helicobacter pylori L-form(Hp-L)infection and the expression of Osteopontin(OPN)in gastric carcinoma tissues,and to discuss the probable machanism between Hp-L infection and the progression of gastric carcinoma.Methods Gram’s staining and immunohistochemical staining(SP method)were used to detect Hp-L in 120 gastric carcinoma cases.Immunohistochemical staining was also used to evaluate the expression of OPN.Results Hp-L was found in 88 and 85 cases of 120 gastric carcinoma tissues by Gram’s and immunohistochemical staining,respectively. 82(68.3%)cases were Hp-L positive by both Gram’s and immunohistochemical staining. In the Hp-L positive group,58(58/82,70.73%)cases were OPN positive,while in the Hp-L negative group,16 cases were OPN positive,which had relationships to the size,invasion and metastasis of the tumor.Conclusion The infection of Hp-L plays an important role in the progression of gastric carcinoma.The increase in the intracellular levels of OPN may be one of the mechanisms.

Helicobacter pylori L-form; Gastric carcinoma; Invasion; Metastasis; OPN;Immunohistochemistry

R 735.34

A

10.3870/zgzzhx.2011.01.008

2010-04-25

2010-08-10

安徽省高校青年教師資助計(jì)劃 (2008jq1105)安徽高校省級(jí)自然科學(xué)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(K J2007A098)蚌埠市2007年度第一批科技項(xiàng)目(11)

周蕾 ,男(1974年),漢族,碩士研究生,講師。

＊通訊作者(To whom correspondence should be addressed)