周浩 黃鑫 吳秀蘭 蔣波 吳俗

蘇氨酸是一種重要的營養(yǎng)強(qiáng)化劑，有恢復(fù)人體疲勞，促進(jìn)生長發(fā)育，保護(hù)細(xì)胞膜，促進(jìn)磷脂合成和脂肪酸氧化，抗脂肪肝藥用效能，是復(fù)合氨基酸輸液中的一種，同時(shí)又是制造高效低過敏的抗生素單酰胺菌素的原料，蘇氨酸中常見雜質(zhì)為脯氨酸，中國藥典2010版中使用TLC法[1]，對雜質(zhì)脯氨酸進(jìn)行限量，但無法定量，本文建立蘇氨酸中脯氨酸的定量方法，經(jīng)驗(yàn)證，專屬性好，靈敏度高，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高。

1 儀器與試藥

WATERS e2695泵;Alltech蒸發(fā)光散射檢測器2000ES;蘇氨酸(正大天晴，批號(hào):1001011、1001012、1001021);脯氨酸對照品(AR，進(jìn)口分裝，批號(hào)100328，惠興生化試劑)。

2 方法與結(jié)果

2.1 專用溶劑 25%乙腈水溶液

2.2 供試品溶液 取蘇氨酸50 mg，精密稱定，置10 ml量瓶中，加專用溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 對照品溶液 取脯氨酸對照品適量，精密稱定，加專用溶劑溶解并稀釋并制成每1 ml分別含10、20、30、40和50 μg的溶液，即得。

2.4 色譜條件 色譜柱Sepax HP-Silica(250 mm×4.6 mm，5 μm)，40℃;流動(dòng)相水-異丙醇-正己烷-冰醋酸-三乙胺(200∶750∶50∶6∶0.6)，1.0 ml/min，蒸發(fā)光檢測器(載氣 2 L/min，漂移管 95℃)。

2.5 專屬性 配制含蘇氨酸5 mg/ml和脯氨酸20 μg/ml的混合溶液，進(jìn)樣，結(jié)果脯氨酸和蘇氨酸有效分離，專用溶劑無干擾(見圖1)。

圖1 混合溶液色譜圖(下)和專用溶劑色譜圖(上)

2.6 線性關(guān)系 精密量取各對照品溶液20 μl，分別檢測，結(jié)果脯氨酸濃度在10～50 μg/ml范圍內(nèi)的濃度對數(shù)值(X)與峰響應(yīng)值對數(shù)值(Y)呈顯著線性關(guān)系，線性方程 Y=1.5224X+7.2756，r=0.9981。

2.7 系統(tǒng)精密度 精密量取對照品溶液(20 μg/ml)20 μl，連續(xù)測定6次，結(jié)果RSD=1.8%，表明系統(tǒng)精密度良好。

2.8 定量限及檢測限 取對照品溶液(10 μg/ml)，逐級(jí)稀釋，分別測定，當(dāng)信噪比約10∶1和3∶1時(shí)，分別計(jì)算定量限和檢測限，結(jié)果脯氨酸的定量限為5 μg/ml，檢測限為2 μg/ml。

2.9 方法重復(fù)性 取樣品(批號(hào):201001021)，制備5份供試品溶液，分別測定，結(jié)果RSD=1.2%，表明重復(fù)性良好。

2.10 回收率 取樣品(1001011批)約25 mg，精密稱定，加入對照品溶液(50 μg/ml)2.0 ml，置10 ml量瓶中，溶解并稀釋至刻度，共制備6份，分別測定，結(jié)果平均回收率99.2%，RSD=2.2%，表明回收率良好。

2.11 樣品測定 取蘇氨酸(批號(hào)為1001011、1021012和1001021)，分別測定，結(jié)果3批中脯氨酸含量分別為0.40%、0.20%和0.00%。

3 討論

3.1 氨基酸類一般無明顯紫外吸收，檢測難度大，目前常見的測定方法有三種[2、3、4]，陽離子交換后柱后衍生、反相色譜分離柱前衍生和氨基酸直接分析儀，成本高，操作繁瑣，衍生物不穩(wěn)定。本法無需衍生，同時(shí)解決了無紫外吸收缺點(diǎn)，有一定的應(yīng)用價(jià)值，并且采用了正相柱反相系統(tǒng)，有一定的新穎性。

3.2 根據(jù)兩成分的分離情況，也可以考慮用此色譜條件開發(fā)脯氨酸中蘇氨酸的定量方法。

3.3 蘇氨酸也是常見藥用輔料，可以用此進(jìn)一步開發(fā)制劑中輔料蘇氨酸的含量測定方法。

[1]國家藥典委員會(huì).ChP(中國藥典).2010版.VolⅡ(二部).中國醫(yī)藥科技出版社，2010:323.

[2]丁永勝，牟世芬.氨基酸的分析方法及其應(yīng)用進(jìn)展.色譜，2004，(03).

[3]趙晶晶，李宏梁.茚三酮柱后衍生法測定軟香酥糕點(diǎn)中氨基酸含量及其營養(yǎng)評價(jià)食品科學(xué)，2011(09).

[4]尚素芬.PITC柱前衍生反相色譜法和OPA柱后衍生離子交換色譜法測定氨基酸含量的比較.河北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，1996(02).