張小燕 ，陸俊賢 ，唐夢君 ，施祖灝 ，葛慶聯(lián) ，蒲俊華 ，高玉時(shí)

（1.農(nóng)業(yè)部家禽品質(zhì)監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心，江蘇揚(yáng)州 225003；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽科學(xué)研究所，江蘇揚(yáng)州 225003）

三鹿奶粉事件后，我國各乳制品企業(yè)生產(chǎn)的奶粉、液態(tài)奶、雞蛋中檢出三聚氰胺，以及在以奶粉和雞蛋為原料的食品中檢測出了三聚氰胺，引起人們對三聚氰胺的恐慌和廣泛的關(guān)注，使這個化合物成為食品公共安全的焦點(diǎn)。

三聚氰胺作為一個化工原料，用途廣泛，可用于塑料、涂料、粘合劑和食品包裝材料等生產(chǎn)中[1-2]。但三聚氰胺不是食品原料，也不是食品添加劑，禁止人為添加到飼料和食品當(dāng)中。以往多數(shù)研究表明，三聚氰胺毒性輕微[3-5]，但動物食入的三聚氰胺在畜產(chǎn)品中存在殘留的可能性[6-8]，也就是說三聚氰胺被畜禽食入后可能會轉(zhuǎn)移到肉、蛋、奶中。但其對動物體的毒性機(jī)制及其在動物產(chǎn)品中的殘留率受到多種因素的影響，如飼料中三聚氰胺含量、動物種類、日糧類型、環(huán)境、動物的生理狀況等因素的影響。

目前，國內(nèi)外對三聚氰胺的研究主要集中在毒性和檢測方法方面，關(guān)于三聚氰胺在家禽組織內(nèi)的殘留和消除規(guī)律研究較少，本研究以黃羽肉雞為試驗(yàn)動物，通過在日糧中添加不同劑量的三聚氰胺探討其在不同組織內(nèi)的殘留和消除規(guī)律，為肉雞的安全生產(chǎn)提供試驗(yàn)依據(jù)，對保障禽產(chǎn)品安全具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物與分組

試驗(yàn)選用1日齡黃羽肉雞400只，隨機(jī)分成4組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)20只雞，公母各半，進(jìn)行為期42 d的生長試驗(yàn)。試驗(yàn)日糧以玉米-豆粕，參照NRC（1994）標(biāo)準(zhǔn)和地方雞飼糧配制。組1飼喂基礎(chǔ)日糧，組2、3、4分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.25%、0.5%、3.0%的三聚氰胺?；A(chǔ)日糧配方見表1。

表1 試驗(yàn)雞的日糧組成

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在國家生產(chǎn)性能測定站進(jìn)行，試驗(yàn)雞采用籠養(yǎng)，自由采食、飲水，日常管理與免疫程序按常規(guī)進(jìn)行，試驗(yàn)期為42 d。

1.3 樣品采集與處理

殘留試驗(yàn)的第7、14、21、28、35、42天，所有處理組每個重復(fù)隨機(jī)選擇2只雞宰殺，取左側(cè)胸肌、肝臟、腎臟，分別將各組織用勻漿機(jī)均質(zhì)后放入玻璃稱量瓶-20 ℃保存，待測各組織中的三聚氰胺含量。

試驗(yàn)第43天，所有處理組改喂基礎(chǔ)日糧，在改喂基礎(chǔ)日糧的第1、2、3、4和5天，對添加組分別采集胸肌肉、肝臟和腎臟，處理方法同上。

1.4 組織中三聚氰胺的檢測方法

1.4.1 主要儀器 高效液相色譜系統(tǒng)（Alliance e2695），配置自動進(jìn)樣裝置和紫外檢測器，美國Waters公司；全自動固相萃取儀（GX-274 ASPEC），吉爾森公司；高速冷凍離心機(jī)（HITACHI CR22G），日立公司；干熱式氮吹儀（N-EVAP），美國Organomation公司 ；超純水機(jī)（Milli-Q Academic），美國 Millipore公司；超聲波清洗機(jī)，寧波新芝；PCX陽離子交換固相萃取柱，Agela公司。

1.4.2 藥品與試劑 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品：99.8%，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；甲醇、乙腈均為色譜純，美國Merck公司；三氯乙酸、乙酸鉛、磷酸、磷酸二氫鉀等為國產(chǎn)分析純。

1.4.3 樣品處理 稱?。?.0±0.05）g勻漿后的樣品，置離心管中，依次加入1%的三氯乙酸溶液18 mL和乙酸鉛溶液2 mL，10 000 r/min均質(zhì)1 min，超聲提取20 min，12 000 r/min 離心5 min。取上清液待用。PCX柱活化：分別用3 mL甲醇，3 mL水活化PCX柱， 準(zhǔn)確移取5 mL離心后的上清液分次上柱。再用3 mL水和3 mL甲醇洗滌PCX柱，用5%氨化甲醇溶液3 mL洗脫，收集洗脫液。洗脫液于氮吹儀上50 ℃吹干，加甲醇1 mL，振蕩溶解，搖勻，過0.45 μm濾膜，高效液相色譜儀測定。

1.4.4 色譜條件 色譜柱：Phenomenex SCX柱，250 mm×4.6 mm ，5 μm ；流速 1.5 mL/min ；柱溫為室溫；流動相為乙腈：磷酸鹽緩沖液（35/65，V/V）；進(jìn)樣量 20 μL。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS軟件（16 .0）進(jìn)行單因素方差分析，多重比較采用One-Way ANOVA法。計(jì)算結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 三聚氰胺在黃羽肉雞不同組織中的殘留規(guī)律

圖1A列出了各處理組胸肌中三聚氰胺含量的變化趨勢。由圖1A可以看出，0.25%和0.5%添加組在飼喂前2周胸肌中三聚氰胺殘留量緩慢上升，后趨于穩(wěn)定，飼喂第6周殘留量達(dá)到最高；3%添加組飼喂前2周胸肌中三聚氰胺殘留持續(xù)上升，后趨于穩(wěn)定并有一定的波動，第5周含量達(dá)到峰值。

圖1B列出了各處理組雞肝臟中三聚氰胺含量的變化趨勢。由圖1B可看出，0.25%和0.5%添加組肝臟中三聚氰胺殘留量分別于飼喂前2周持續(xù)增加，隨后有一定波動，直到殘留試驗(yàn)結(jié)束含量達(dá)最高；3%添加組肝臟中三聚氰胺含量在前2周持續(xù)增加，在第2周達(dá)峰值，后有所波動。

圖1C列出了各處理組雞腎臟中三聚氰胺含量的變化趨勢。由圖1C可看出，0.25%添加 組腎臟中三聚氰胺含量于前1、2周持續(xù)增加，隨后保持穩(wěn)定至殘留試驗(yàn)結(jié)束；0.5%和3%添加組腎臟中三聚氰胺含量于前3周緩慢增加，后有下降并趨于穩(wěn)定，第3周達(dá)峰值。

表2給出了不同劑量三聚氰胺日糧飼喂42 d后黃羽肉雞各組織中三聚氰胺平均含量，由表2可知，各處理組雞胸肌、肝臟、腎臟中三聚氰胺含量均顯著高于對照組，各處理組之間三聚氰胺含量差異顯著；各組織之間腎臟中三聚氰胺含量較高，且顯著高于肝臟及胸肌中含量。

表2 日糧三聚氰胺不同劑量添加水平對黃羽肉雞不同組織中三聚氰胺殘留量的影響

2.2 三聚氰胺在黃羽肉雞不同組織中的消除規(guī)律

飼喂基礎(chǔ)日糧后胸肌中三聚氰胺含量隨時(shí)間變化趨勢見圖2A，從圖中可以看出，各處理組雞胸肌中三聚氰胺含量逐漸降低，并于第3、4天達(dá)到基本穩(wěn)定，在較低的范圍內(nèi)波動，但在胸肌組織中三聚氰胺并沒有完全消除。

飼喂基礎(chǔ)日糧后肝臟中三聚氰胺含量隨時(shí)間變化趨勢見圖2B，從圖中可以看出，0.25%和0.5%添加組雞肝臟中三聚氰胺含量逐漸降低，至消除試驗(yàn)結(jié)束，3%添加組雞肝臟中三聚氰胺含量第1天降低緩慢，后逐漸降低至消除試驗(yàn)結(jié)束。

飼喂基礎(chǔ)日糧后腎臟中三聚氰胺含量隨時(shí)間變化趨勢見圖2C，從圖中可以看出各處理組雞腎臟中三聚氰胺含量逐漸降低，并于第3、4天達(dá)到基本穩(wěn)定，在較低的范圍內(nèi)波動，但在腎臟組織中三聚氰胺并沒有完全消除。

3 討論

3.1 三聚氰胺在肉雞組織中的殘留規(guī)律

武書庚等[9]研究發(fā)現(xiàn)，動物采食含三聚氰胺的飼料后，三聚氰胺會在胸肌中沉積，不同劑量的三聚氰胺在胸肌中沉積達(dá)到穩(wěn)定需要的時(shí)間不同，且呈現(xiàn)劑量效應(yīng)。三聚氰胺在日糧中的含量越高，胸肌中三聚氰胺的含量越大，沉積達(dá)到穩(wěn)定所需時(shí)間越短。國內(nèi)有研究發(fā)現(xiàn)，三聚氰胺在豬體內(nèi)殘留量在飼喂5 d后達(dá)到最大值，而后主要以原形藥物形式從尿液中排出，而其在血液中的濃度在達(dá)到峰值以后呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢[10]。燕磊等人報(bào)道，當(dāng)飼糧中三聚氰胺含量≥100 mg/kg，肉鴨組織中三聚氰胺殘留量隨日糧中三聚氰胺含量的升高而線性升高[11]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加三聚氰胺可在黃羽肉雞體內(nèi)胸肌、肝臟、腎臟等組織中檢測到殘留，表明進(jìn)入體內(nèi)的三聚氰胺分布廣泛，且各組織中三聚氰胺殘留量均隨飼糧中三聚氰胺濃度升高而升高，各處理組之間的殘留量差異顯著；且3%處理組三聚氰胺殘留量上升速率較其它兩組更快，達(dá)到峰值的時(shí)間較短，這可能是因?yàn)閯游锊墒车娜占Z中三聚氰胺含量越高，三聚氰胺通過動物的吸收進(jìn)入血液最終被轉(zhuǎn)移到組織中的含量也相應(yīng)增加，并且三聚氰胺含量越大，在組織中的運(yùn)輸速度越快，因此殘留達(dá)到穩(wěn)定所需時(shí)間也就越短。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)從添加同一濃度三聚氰胺處理組來看，不同組織中三聚氰胺的殘留濃度不一致，腎臟的殘留最高，其次為肝臟和胸肌?？赡茉蚴侨矍璋吩跈C(jī)體內(nèi)的代謝屬于不活潑代謝，泌尿系統(tǒng)是機(jī)體代謝和排出三聚氰胺的主要途徑，腎臟是三聚氰胺排泄的主要場所，三聚氰胺易在腎臟蓄積，與燕磊，L，M.B.等報(bào)道一致[11-12]。MAST等[8]試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大鼠單次口服三聚氰胺后組織殘留最高部位為膀胱，其次為輸尿管、肝臟、腎臟，其中肝臟與腎臟濃度差別不大，分別為1.8和1.3μg/kg。余曉華在飼料中添加1 000 mg/kg三聚氰胺飼喂肉雞29天后發(fā)現(xiàn)，腎臟、肝臟和肌肉殘留濃度分別為3.05，2.54，2.46 mg/kg[13]。本試驗(yàn)0.25%處理組第六周胸肌、肝臟和腎臟中三聚氰胺殘留量分別為27.54、29.25、31.42 mg/kg，其殘留量較高，原因可能是飼糧中三聚氰胺添加劑量比較高，而其它組織如血液等中的三聚氰胺殘留量有待進(jìn)一步研究。

3.2 三聚氰胺在肉雞組織中的消除規(guī)律

有研究發(fā)現(xiàn)，停藥后三聚氰胺在豬體內(nèi)可食組織中的殘留量呈現(xiàn)下降趨勢，并在低濃度飼喂情況下，在停藥后基本可以清除完全，殘留量極少[10]。另外三聚氰在雞體內(nèi)也是富集快代謝快，雞體內(nèi)胸肌、肝臟、腎臟等組織中三聚氰胺在停藥5 d后代謝較快[13]。在肉鴨和肉雞上的研究分別發(fā)現(xiàn)，飼喂添加不同濃度的三聚氰胺日糧42 d后，轉(zhuǎn)為飼喂不含三聚氰胺的飼料7 d，胸肌、肝臟和腎臟均未檢出三聚氰胺[11-12]。本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，隨著消除時(shí)間的增加，各組織中三聚氰胺含量均逐漸降低；各處理組在停喂含三聚氰胺飼料5 d后各組織中三聚氰胺含量趨于穩(wěn)定，但還沒有完全消除；而從圖2中可看出，3%處理組其三聚氰胺消除速率較0.25%和0.5%處理組快。

三聚氰胺在肝臟內(nèi)消除較緩慢，且波動較大，原因可能是肝臟不能對三聚氰胺進(jìn)行代謝[6]，各組織中緩慢釋放后造成一定時(shí)間內(nèi)血液中仍有三聚氰胺存在，使得肝臟中三聚氰胺殘留消除速率較慢。隨消除時(shí)間的增加，腎臟中三聚氰胺殘留量逐漸降低，與肝臟和胸肌相比，停喂5 d后腎臟中三聚氰胺含量較高，進(jìn)一步說明腎臟是三聚氰胺最主要的排泄場所。

總之，三聚氰胺在體內(nèi)消除是個緩慢過程，當(dāng)改喂基礎(chǔ)飼料后，由于三聚氰胺在動物體內(nèi)仍有殘留，三聚氰胺會通過組織釋放、血漿運(yùn)輸、腎臟排泄、動物產(chǎn)品等途徑被緩慢排出體外。本試驗(yàn)只研究了停喂5 d內(nèi)三種組織的消除規(guī)律，其它組織及各組織中三聚氰胺完全消除所需要的時(shí)間還需進(jìn)一步研究。

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