張家松 ，李卓佳 ，陳義平 ，文國樑 ，羅 亮 ，王奕玲 ，冷加華 ，曹煜成

（1. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所，廣東廣州510300；2. 中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島266032）

WSSV自從1993年在日本首次報(bào)道以來，該病已經(jīng)成為危害世界對蝦養(yǎng)殖業(yè)最為嚴(yán)重的一種病毒性疾病。WSSV對養(yǎng)殖對蝦是一種易傳染、高致死性的病毒，養(yǎng)殖條件下可使感染對蝦在3~10天內(nèi)死亡，死亡率高達(dá)80~100%。感染對蝦的主要癥狀是活力差、少食，瀕死者體色變紅，頭胸甲往往出現(xiàn)直徑0.5 mm~2 mm左右的白色斑點(diǎn)。IHHNV可引起凡納濱對蝦出現(xiàn)慢性“矮小殘缺綜合癥”，患病對蝦生長緩慢，表皮畸形，經(jīng)濟(jì)損失可達(dá)50%。臨床上這2種病原混合感染現(xiàn)象很常見，并且感染了WSSV和IHHNV的對蝦可終身帶毒，通過垂直傳播把病毒傳給下一代和水平傳播傳給其他種群[1]。

本次調(diào)查，對廣東沿海地區(qū)不同類型養(yǎng)殖池塘和養(yǎng)殖技術(shù)條件下的對蝦進(jìn)行采樣檢測，以了解養(yǎng)殖模式和養(yǎng)殖技術(shù)對WSSV和IHHNV流行感染狀況的影響，希望為疾病的防治提供新的思路。

1 材料和方法

1.1 采樣

2010年4月至12月間，隨機(jī)選取廣東沿海地區(qū)高位池精養(yǎng)、土池半精養(yǎng)和灘涂混養(yǎng)三種養(yǎng)殖模式中的17口池塘進(jìn)行了采樣，其中7口池塘在春夏和冬季的不同養(yǎng)殖季節(jié)進(jìn)行了采樣。每個(gè)池塘采樣15尾，每5尾合并為一個(gè)樣。

1.2 DNA提取

樣品DNA提取按照海洋動物基因組提取試劑盒（天根生化科技（北京）有限公司）說明書進(jìn)行，DNA樣品-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 WSSV感染的分子方法診斷

PCR采用楊衛(wèi)帆[2]設(shè)計(jì)的套式PCR引物，可以同時(shí)檢測WSSV和IHHNV，外引物擴(kuò)增片段分別為988 bp和860 bp，內(nèi)引物擴(kuò)增片段分別為461 bp和344 bp。一步PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為陰性的樣品，再采用兩步PCR檢測。

2 結(jié)果和討論

不同養(yǎng)殖模式下凡納濱對蝦攜帶WSSV和IHHNV的檢測結(jié)果如表1。

高位池精養(yǎng)池塘對蝦樣本采自廣東省的汕尾市（1~3號池塘和6、7號池塘）和電白縣（4、5號池塘）。春夏季節(jié)高位池養(yǎng)殖情況良好，檢測均為WSSV兩步PCR陽性，其中2號和4號池塘IHHNV檢測一步PCR陽性，偶爾出現(xiàn)對蝦死亡現(xiàn)象。但是到了2010年秋冬季節(jié)，由于寒流來的早和突然，眾多養(yǎng)殖戶突擊加蓋塑料膜，未按操作程序工作，直接將塑料膜覆蓋養(yǎng)殖池，導(dǎo)致冬棚內(nèi)室溫和水溫急升，水溫從21~23℃驟升至26~28℃，達(dá)到WSSV復(fù)制增殖的最佳溫度，致使眾多養(yǎng)殖池塘暴發(fā)WSS（1~3號、7號池塘）。而按照操作程序工作，逐步加蓋塑料膜的池塘，使得室溫和水溫逐步上升的冬棚池塘則沒有發(fā)生WSS（4、5、6號池塘）。秋冬季節(jié)各池塘對蝦IHHNV檢測均為兩步PCR陽性，攜帶病毒量低。

表1 2010年4~12月對廣東省不同養(yǎng)殖模式下凡納濱對蝦攜帶WSSV和IHHNV的檢測結(jié)果

土池養(yǎng)殖對蝦樣本采自廣東省電白縣（8、9、12、13號池塘）、珠海市（10、11號池塘）、汕尾市（14、15號池塘）。春夏季，采用水質(zhì)生態(tài)調(diào)控技術(shù)的土池，雖然對蝦樣本W(wǎng)SSV和IHHNV攜帶率100%，但是均為兩步PCR陽性，攜帶病毒量低，未出現(xiàn)對蝦死亡。但是到了冬季，也是因?yàn)楹鱽淼脑?，加蓋塑料膜時(shí)未按照程序進(jìn)行，導(dǎo)致冬棚內(nèi)室溫和水溫急升，致使眾多養(yǎng)殖池塘暴發(fā)WSS（8~10號池塘）。未采用水質(zhì)生態(tài)調(diào)控技術(shù)的土池所采對蝦，檢測均為一步PCR陽性，且有池塘出現(xiàn)因WSSV感染的死蝦（12~15號池塘）。土池各池塘不同季節(jié)對蝦IHHNV的檢測結(jié)果均為兩步PCR陽性。

灘涂混養(yǎng)池塘（16和17號池塘）對蝦樣本采自廣東省汕尾市，為凡納濱對蝦和卵形鯧鲹、鋸緣青蟹混養(yǎng)池塘，兩個(gè)池塘面積分別是14.7 hm2和24.7 hm2，每天隨潮差換水，日換水量在20%以上，對蝦放苗量為30萬尾/ hm2。由于對蝦放養(yǎng)密度低，加之卵形鯧鲹、鋸緣青蟹對病弱對蝦的捕食，使得對蝦自相殘食現(xiàn)象減少，因此對蝦病毒傳播少，雖然WSSV和IHHNV病毒攜帶率高為100%，但攜帶病毒量均較低，為兩步PCR陽性，且未見發(fā)病。

綜上所述，從2010年度廣東省沿海地區(qū)抽樣檢測結(jié)果可以看出：①養(yǎng)殖池塘對蝦攜帶病毒的問題仍然比較普遍，這為養(yǎng)殖管理帶來了潛在的危險(xiǎn)，養(yǎng)殖過程中各種不良因素極易導(dǎo)致病毒大量繁殖復(fù)制，致使病害發(fā)生。②越冬暖棚養(yǎng)殖操作仍需進(jìn)一步規(guī)范，不當(dāng)?shù)牟僮魍鶗o對蝦帶來應(yīng)激，導(dǎo)致病害發(fā)生。③WSSV感染程度要大于IHHNV，并造成WSS暴發(fā)。④水質(zhì)生態(tài)調(diào)控技術(shù)具有營造良好水質(zhì)，維持環(huán)境穩(wěn)定的功能，對控制對蝦病毒性疾病的暴發(fā)具有良好的作用，值得推廣使用[3-6]。⑤混養(yǎng)模式對對蝦病毒性疾病控制也有良好的作用，通過合理搭配養(yǎng)殖品種，利用池塘食物鏈中各生物的生態(tài)位特性，及時(shí)清理養(yǎng)殖系統(tǒng)中的病弱養(yǎng)殖生物，從而達(dá)到控制病害的水平傳播[6-8]。

[1] 閆冬春，魏福強(qiáng).水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病毒傳播途徑的研究現(xiàn)狀[J].水利漁業(yè)，2006，26（1）：110-112.

[2] 楊衛(wèi)帆.海南南美白對蝦（Penaeus Vannamei）病毒病病原分析及其分子檢測技術(shù)的建立[D]. 華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006

[3] 彭錦新，王侃 劉葒 等. 深圳東部地區(qū)水生動物養(yǎng)殖病害情況報(bào)告[J]. 中國動物檢疫 1999，16（6）： 14-15.

[4] 張家松 李卓佳 文國樑 等. 廣東和福建地區(qū)不同養(yǎng)殖模式下凡納濱對蝦成蝦攜帶WSSV的調(diào)查[J]. 中國動物檢疫，2010，27（11）：40-41.

[5] 彭聰聰，李卓佳，曹煜成，等.蝦池浮游微藻與養(yǎng)殖水環(huán)境調(diào)控的研究概況[J]. 南方水產(chǎn)，2010，6（5）：74-80.