孫建斌 劉四平 付艷群

孫建斌,劉四平,付艷群

湖北省武漢市第三醫(yī)院檢驗科,武漢430060

感染是燒傷患者最主要的死亡原因之一 ,早期、及時、準(zhǔn)確地診斷感染有利于降低細(xì)菌耐藥性,減小治療難度,降低死亡率。臨床確診感染的金標(biāo)準(zhǔn)是細(xì)菌培養(yǎng),但其存在檢出周期長和陽性率較低等問題,給臨床治療帶來了不便。白細(xì)胞(WBC)是機(jī)體主要的免疫防御細(xì)胞,當(dāng)機(jī)體發(fā)生不同程度細(xì)菌感染時,WBC總數(shù)和各亞群在數(shù)量、體積、胞漿及胞漿顆粒等方面會發(fā)生相應(yīng)的變化。感染嚴(yán)重者,WBC總數(shù)上升,中性粒細(xì)胞出現(xiàn)中毒性改變,如體積大小不均,胞質(zhì)中出現(xiàn)大小不等、分布不均的顆粒,并可有空泡、杜勒小體的形成,細(xì)胞核出現(xiàn)核左移現(xiàn)象,同時淋巴細(xì)胞及單核細(xì)胞也發(fā)生變化[1]。

VCS技術(shù)可對WBC在接近自然狀態(tài)下進(jìn)行分析,除了檢測常規(guī)血細(xì)胞參數(shù)外,還能提供體積(Volume,V)、傳導(dǎo)率(Conductivity,C)、激光散射率(Scatter,S)即VCS等新型參數(shù),以反映WBC形態(tài)學(xué)變化。目前已在細(xì)菌感染[2,3]、瘧疾[4,5]、病毒感染[6]、白血病診斷等領(lǐng)域得到應(yīng)用。但在其它臨床疾病如燒傷中的應(yīng)用還未見報道。本研究對燒傷后感染患者白細(xì)胞VCS參數(shù)進(jìn)行檢測,分析其變化規(guī)律,以期為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 對象

1.1.1 燒傷感染組:來自本院2010年1～3月經(jīng)臨床確診燒傷后感染病例76例,男47例,女29例,年齡14～85歲,平均年齡44歲。燒傷后感染依據(jù)《燒傷治療學(xué)》[7]進(jìn)行診斷。均排除外科手術(shù)、移植、血液病、腫瘤等疾病患者。以WBC計數(shù)10×109/L為臨界值,將其分為WBC＜10×109/L組(A組)和WBC≥10×109/L組(B組)。以中性粒細(xì)胞百分率85%為臨界值,將其分為＜85%組(C組)和≥85%組(D組)。

1.1.2 燒傷未感染組:亦為本院2010年1～3月燒傷未感染病例81例,男51例,女30例,年齡17～76歲,平均年齡37歲。病例均排除外科手術(shù)、移植、血液病、腫瘤等疾病患者。

1.1.3 健康對照組:健康體檢者51例,男26名,女25名,年齡23～62歲,平均年齡38歲。WBC計數(shù)和分類結(jié)果在正常參考范圍內(nèi),排除感染性及器質(zhì)性病變,無肝功能異常,HBsAg陰性。

1.2 儀器和試劑

美國貝克曼-庫爾特公司LH 750血細(xì)胞分析儀及原裝配套試劑、定標(biāo)液、質(zhì)控液、VCS乳膠校準(zhǔn)液。按儀器說明書進(jìn)行校準(zhǔn)、質(zhì)量控制、保養(yǎng)及維護(hù)。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集和檢測:采集燒傷感染組患者發(fā)病初期(2天內(nèi),未用抗生素)、燒傷未感染及健康對照者外周血2ml,使用EDTA-K2抗凝真空管采血。在2h內(nèi)進(jìn)行檢測。

1.3.2 檢測指標(biāo):WBC計數(shù)、中性粒細(xì)胞平均體積(NEV)、中性粒細(xì)胞體積分布寬度(NDW)、中性粒細(xì)胞平均傳導(dǎo)率(NEC)、中性粒細(xì)胞平均散射值(NES);淋巴細(xì)胞平均體積(LYV)、淋巴細(xì)胞體積分布寬度(LDW)、淋巴細(xì)胞平均傳導(dǎo)率(LYC)、淋巴細(xì)胞平均散射值(LYS)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS10.0統(tǒng)計學(xué)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。檢測數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD(q)檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組VCS相關(guān)參數(shù)檢測結(jié)果

與健康對照組比較,燒傷未感染組除 LYV和LDW外,其它指標(biāo)均有不同程度的變化,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);燒傷感染組VCS各檢測指標(biāo)較健康對照組升高或降低明顯,差異具有極顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.01);兩燒傷組之間,燒傷感染組除WBC和LYC外,其它各VCS指標(biāo)較燒傷未感染組升高或降低明顯,差異具有極顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.01),見表1。

2.2 燒傷感染患者不同WBC計數(shù)組VCS檢測指標(biāo)比較

結(jié)果顯示,與健康對照組比較,A組(除WBC外)和B組患者VCS各指標(biāo)水平均明顯升高或降低,差異有極顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.01);B組患者除NES、LYV、LDW檢測結(jié)果與A組比較無統(tǒng)計學(xué)差異,其它VCS各指標(biāo)水平均明顯升高或降低,差異有極顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.01),結(jié)果見表2。

2.3 燒傷感染患者不同水平中性粒細(xì)胞組VCS檢測指標(biāo)比較

與健康對照組比較,C組和D組(LYC除外)患者VCS各指標(biāo)水平均有不同程度升高或降低,差異有顯著或極顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);與C組比較,D組患者的 WBC、NEV、NDW、NEC、LYC、LYS水平有不同程度升高或降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01),結(jié)果見表3。

表1 各組VCS檢測結(jié)果比較(±s)

表1 各組VCS檢測結(jié)果比較(±s)

注 :與健康對照組比較,1)P＜0.05,2)P＜0.01;與燒傷未感染組比較,3)P＜0.01

組 別 n WBC(×109/L) NEV(fl) NDW NEC NES LYV LDW LYC LYS健康對照組 51 6.22±1.21 138.26±3.76 18.21±1.28 149.45±3.78 142.65±4.96 83.53±2.92 13.88±1.34 115.90±3.51 55.47±3.36燒傷未感染組 81 12.18±5.762) 148.76±2.832) 22.02±2.392) 141.31±6.442) 136.94±7.502) 84.58±8.55 14.45±1.62 113.59±5.491) 66.88±8.472)燒傷感染組 76 13.24±6.592)161.11±6.592)3)24.52±2.362)3)137.87±6.412)3)132.99±8.422)3)88.13±7.422)3)15.98±1.962)3)112.04±5.272)70.42±10.402)3)F值 28.37 365.94 129.84 60.02 26.24 7.78 27.49 9.10 50.66

表2 WBC計數(shù)與VCS參數(shù)的關(guān)系(±s)

表2 WBC計數(shù)與VCS參數(shù)的關(guān)系(±s)

注:與健康對照組比較,1)P＜0.01;與A組比較,2)P＜0.01

組 別 n WBC(×109/L) NEV(fl) NDW NEC NES LYV LDW LYC LYS健康對照組 51 6.22±1.21 138.26±3.76 18.21±1.28 149.45±3.78 142.65±4.96 83.53±2.92 13.88±1.34 115.90±3.51 55.47±3.36 A組 25 7.03±1.81 153.98±6.471) 22.69±1.451) 135.14±7.421) 132.27±5.561) 89.35±7.501) 15.78±1.741) 109.97±6.181) 66.76±14.021)B組 51 16.29±5.891)2)161.18±6.711)2)25.40±2.221)2)139.21±5.451)2)133.34±9.551) 87.53±7.381) 16.08±2.071)113.06±4.491)2)72.21±7.611)2)F值 99.08 249.22 216.99 76.09 26.83 9.45 21.93 14.85 54.10

表3 中性粒細(xì)胞百分率與VCS參數(shù)的關(guān)系(±s)

表3 中性粒細(xì)胞百分率與VCS參數(shù)的關(guān)系(±s)

注:與健康對照組比較,1)P＜0.01,2)P＜0.05;與 C組比較,3)P＜0.01,4)P＜0.05

組 別 n WBC(×109/L) NEV(fl) NDW NEC NES LYV LDW LYC LYS健康對照組 51 6.22±1.21 138.26±3.76 18.21±1.28 149.45±3.78 142.65±4.96 83.53±2.92 13.88±1.34 115.90±3.51 55.47±3.36 C組 54 11.29±5.351) 156.96±6.421) 23.84±2.071) 136.98±6.511) 133.61±5.551) 88.37±7.411) 15.92±1.901) 111.21±5.221) 69.18±11.191)D組 22 18.03±6.991)3)161.48±7.121)3)26.15±2.291)3)140.04±5.751)4)131.46±13.121) 87.54±7.582) 16.13±2.151) 114.09±4.924) 73.47±7.491)4)F值 52.47 249.67 192.28 72.03 27.95 8.98 22.15 14.06 52.57

3 討 論

VCS技術(shù)是在血細(xì)胞未經(jīng)任何處理,在與體內(nèi)形態(tài)完全相同的自然狀態(tài)下進(jìn)行檢測得出的結(jié)果。以電阻抗原理檢測細(xì)胞的體積(V)NEV、NDW、LYV、LDW等參數(shù);運用高頻電磁探針測量電導(dǎo)率(C)檢測NEC、LYC參數(shù),通過檢測細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的比例及細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)成分來鑒別細(xì)胞,辨別體積完全相同而性質(zhì)不同的兩個細(xì)胞群;運用激光散射(S)測量細(xì)胞的顆粒特性而得到NES、LYS參數(shù),依靠光散射具有對細(xì)胞顆粒的構(gòu)型和顆粒質(zhì)量的鑒別能力而區(qū)分粒細(xì)胞。

白細(xì)胞是機(jī)體的主要防御細(xì)胞,急性感染(尤其急性化膿性感染)時出現(xiàn)病理性增多,如感染較為局限且輕微,白細(xì)胞總數(shù)仍可正常,但可見中性粒細(xì)胞百分率增高;中度感染時白細(xì)胞總數(shù)常大于10×109/L,并伴有輕度核象左移;嚴(yán)重感染時白細(xì)胞總數(shù)常明顯增高,可達(dá)20×109/L以上,中性粒細(xì)胞百分率也明顯增高,并伴有明顯的核象左移,出現(xiàn)中毒顆粒、空泡、大小不均等病理性改變[8]。

本文結(jié)果表明,燒傷感染時NEV比正常對照組有顯著增加(P＜0.01),說明NEV的增高可反映有感染存在。NEC隨感染而下降,這是由于核左移,細(xì)胞向不成熟發(fā)展,漿核比變小所致。NES反映的是中性粒細(xì)胞胞漿內(nèi)顆粒的大小和密度,本研究發(fā)現(xiàn),NES隨感染而下降,與呂美艷等[9]報道的NES值隨感染的加重而增高不一致,但與常玉榮等[10]報告的結(jié)果基本一致,其原因可能是:燒傷感染多表現(xiàn)重度感染,其中性粒細(xì)胞胞漿內(nèi)結(jié)構(gòu)復(fù)雜性增強(qiáng),出現(xiàn)中毒顆粒、空泡等,使光散射降低。而一般輕、中度感染主要表現(xiàn)為核左移、細(xì)胞體積增大,而出現(xiàn)中毒顆粒、空泡的比例較低。本文結(jié)果表明,LYV、LYS隨感染而增加,而 LYC隨感染而下降,此與中性粒細(xì)胞的VCS變化趨勢不一致,這可能和淋巴細(xì)胞與中性粒細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)不同有關(guān)。

燒傷感染時,一些病例的WBC計數(shù)、中性粒細(xì)胞百分率并不增高,但是WBC的形態(tài)已經(jīng)發(fā)生了變化。本文中燒傷感染組WBC＜10×109/L、中性粒細(xì)胞百分率＜85%時,NEV、NDW 結(jié)果高于健康對照組,表明NEV和NDW在指示感染方面比WBC、中性粒細(xì)胞百分率更敏感,且NEV、NDW、LDW、LYS等參數(shù)隨著WBC計數(shù)和中性粒細(xì)胞百分率的升高而增高。

各類白細(xì)胞VCS參數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差大小反映各參數(shù)的離散程度,在散點圖上表現(xiàn)為各類細(xì)胞分布的面積。其中NDW、LDW分別反映中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞體積大小的離散程度。本文結(jié)果顯示燒傷感染組NDW、LDW大于健康對照組。發(fā)生感染時,外周血中性粒細(xì)胞出現(xiàn)核左移、桿狀核增多、吞噬細(xì)菌、空泡變性、中毒顆粒等,引起中性粒細(xì)胞的體積增大和大小不一,表現(xiàn)為NEV、NDW參數(shù)的增加。處于不同狀態(tài)的中性粒細(xì)胞在外周血中同時出現(xiàn)也是導(dǎo)致細(xì)胞體積不均一的重要原因。當(dāng)發(fā)生感染時,外周血中性粒細(xì)胞作為主要吞噬細(xì)胞被激活,游走于感染組織之間。隨著活性中性粒細(xì)胞的大量消耗,骨髓在細(xì)胞因子刺激下釋放大量不成熟中性粒細(xì)胞包括活性中性粒細(xì)胞、不成熟中性粒細(xì)胞以及靜止中性粒細(xì)胞等處于不同應(yīng)激狀態(tài)的中性粒細(xì)胞,導(dǎo)致中性粒細(xì)胞在感染發(fā)生時體積增大和大小不均一。淋巴細(xì)胞在發(fā)生感染時同樣被激活而參與機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫,不同狀態(tài)的淋巴細(xì)胞同時存在也導(dǎo)致淋巴細(xì)胞體積大小的離散程度增加[11～15]。

總之,VCS參數(shù)能反映燒傷患者細(xì)菌感染時WBC的形態(tài)變化,且其檢測與WBC分類計數(shù)同時進(jìn)行,勿需預(yù)處理和額外試劑,操作簡單快速,還可早于WBC分類計數(shù)出現(xiàn)異常之前提示感染,因而可用作燒傷感染的實驗室檢測指標(biāo)。

1 王鴻利主編.實驗診斷學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社,2005:66～80.

2 Chaves F,Tiemo B,Xu D.Quantitative determination of neutrophil VCS parameters by the Coulter automated hematology analyzer:new and reliable indicators for acute bacterial infection.Am J Clin Pathol,2005,124(3):440～444.

3 Chaves F,Tiemo B,Xu D.Neutrop hil volume distribution width:a new automated hematologic parameter for acute infection.A rch Pathol Lab Med,2006,130(3):378～380.

4 Briggs C,Da Costa A,Freeman L,et al.Development of anautomated malaria diseriminant factor using VCS technology.Am J Clin Pathol,2006,126(5):691～698.

5 Fourcade C,Casbas MJ,Belaouni H,et al.Automated detection of malaria by means of the haematology analy ser Coulter GEN.S.Clin Lab Haematol,2004,26(5):367～372.

6 Silva M,Fourcade C,Fartoukh C,et a1.Lymphocy te volume and conductivity indices of the haematology analyser Coulter GEN.S in lymphoproliferative disorders and viral diseases.Clin Lab Haematol,2006,28(1):1～8.

7 第三軍醫(yī)大學(xué)燒傷防治研究協(xié)作組.燒傷治療學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社,1977:164～165.

8 熊立凡主編.臨床檢驗基礎(chǔ).北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:36～49.

9 呂美艷,王明山,楊麗紅,等.細(xì)菌感染性疾病患者白細(xì)胞VCS參數(shù)的變化及臨床意義.檢驗醫(yī)學(xué),2007,22(5):578～580.

10 常玉榮,石 峻.血細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察對血液系統(tǒng)疾病診斷的意義.檢驗醫(yī)學(xué),2007,22(1):78～80.

11 王劍超,馬春芳,呂國才,等.中性粒細(xì)胞 VCS參數(shù)在急性細(xì)菌感染篩查中的初步應(yīng)用.中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志,2009,32(2):179～183.

12 王 佳,符布清,汪小蓉,等.中性粒細(xì)胞體積分布寬度—一種新的急性細(xì)菌感染使用臨床指標(biāo).檢驗醫(yī)學(xué),2009,24(3):208～210.

13 施新顏,沈 強(qiáng),阮森林.中性粒細(xì)胞體積分布寬度在診斷急性細(xì)菌性感染中的應(yīng)用.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2008,18(12):1 796～1 797.

14 金艷慧,王明山,楊麗紅,等.中性粒細(xì)胞體積與漿核復(fù)雜性在感染和應(yīng)激性疾病中的變化及意義.中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志,2009,32(3):326～330.

15 梁湘輝,白志敏,劉文恩.中性粒細(xì)胞VCS參數(shù)在菌血癥中的應(yīng)用研究.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2010,25(1):98～101.