符曉蘇 張志宇 孫 奕

目前已知烯醇化酶有 5 種形式組成 αα，ββ，γγ，αβ，αγ五種同功酶［1］。γγ型烯醇化酶特異地存在神經(jīng)元細(xì)胞或神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞，稱之為神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)。對于NSE的生物學(xué)特性及其臨床應(yīng)用，尤其對神經(jīng)元的腫瘤和肺小細(xì)胞癌的臨床診斷價值，已積累了大量的文獻(xiàn)資料［2］。本實驗用全自動生化儀酶偶聯(lián)速率法測定血清中的烯醇化酶活性。探討中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病與ENO活性的相關(guān)性。

1.材料與方法

1.1 材料 73例經(jīng)臨床確診的腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病住院病例中，腦出血15例，腦梗死25例，顱內(nèi)腫瘤5例，中樞神經(jīng)感染12例，癲癇16例。男性47例，女性26例，年齡(52～72)歲，平均年齡62±5.60歲。健康組：370名體檢正常的健康者，其中男性197名，女性173名，年齡(56～75)歲，平均年齡65±8.90歲。標(biāo)本來源于體檢中心。

1.2 方法 用日本OLYMPUS5400全自動生化分析儀酶偶聯(lián)速率法測定烯醇化酶活性。

1.2.1 緩沖液 40mmoL/L三乙醇胺，PH7.6。取三乙醇胺(含量≥78%，密度1.123～1.133，分子量149.19)6.8ml溶解于1000ml蒸餾水，pH校正至7.6。

1.2.2 底物緩沖液(R1) 稱取氯化鉀、硫酸鎂、乙二胺四乙酸二鈉、二磷酸腺苷、還原型輔酶溶于40mmol/L三乙醇胺緩沖液中，溶解后校正pH7.6，加丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶，置4℃冰箱保存。(R2)2-磷酸甘油酸溶液：2-磷酸甘油酸稱量后蒸餾水溶解后，置4℃冰箱保存。(試劑R1和試劑R2成分組合配方專利申請?zhí)?010102426284)。

1.2.3 用真空管抽取空腹靜脈血3ml，待血液凝固后離心分離血清待測，當(dāng)天完成檢測。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，數(shù)據(jù)以(±s)表示，比較結(jié)果用t檢驗。

2.結(jié)果

2.1 臨床73例腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病ENO活性結(jié)果15.52±5.27U/L，健康對照組ENO活性結(jié)果5.91±1.90U/L，見表1。

表1 腦挫傷及神經(jīng)系統(tǒng)疾病與健康對照組ENO活性結(jié)果(±s)

表1 腦挫傷及神經(jīng)系統(tǒng)疾病與健康對照組ENO活性結(jié)果(±s)

注：與健康對照組比*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

組 別 例數(shù) ENO(U/L)健康對照 370 5.91±1.90腦出血 15 14.951 ±5.94＊＊腦梗死 25 15.63 ±5.88＊＊顱內(nèi)腫瘤 5 16.13±5.60*中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染 12 11.98±2.75＊＊癲癇 16 16.54±4.03＊＊

2.2 如果以大于健康組2S(9.7U/L)為陽性，結(jié)果見表2。

表2 73例腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病陽性結(jié)果(±s)

表2 73例腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病陽性結(jié)果(±s)

組別 例數(shù) 陽性例數(shù)腦出血 15 11腦梗死 25 21顱內(nèi)腫瘤 5 3中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染 12 8癲癇16 14

3.討論

1965年科學(xué)家首次發(fā)現(xiàn)了一種大量存在腦組織中酸性可溶性蛋白質(zhì)稱為14-3-2蛋白［3］。后來人們發(fā)現(xiàn)該蛋白特異性地位于神經(jīng)元中，并有烯醇化酶(enolase，ENO)活性。烯醇化酶廣泛分布于人體各種組織細(xì)胞中是糖酵解過程中的關(guān)鍵酶，在正常情況下腦脊液和血清中只含有微量烯醇化酶，但在腦血管意外、腦創(chuàng)傷、腦腫瘤等疾病時NSE會增加，在此情況下血清ENO也會明顯升高。當(dāng)缺氧、缺血或中毒情況下細(xì)胞內(nèi)的酶釋放出來，并迅速進(jìn)入細(xì)胞間隙，進(jìn)而進(jìn)入外周循環(huán)，血腦屏障受損程度越高釋放入血的烯醇化酶越多，血清含量越高，這就為檢測血中的烯醇化酶提供了依據(jù)［2，4，5］。烯醇化酶在糖代謝過程中催化2-磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變成2-磷酸烯醇式丙酮酸，在丙酮酸激酶的作用下生成丙酮酸，與還原型輔酶、乳酸脫氫酶作用生成乳酸。根據(jù)反應(yīng)原理用酶偶聯(lián)速率法檢測烯醇化酶活性。目前國內(nèi)外實驗方法的研究報道很多，有用放免、電泳、酶標(biāo)記及發(fā)光技術(shù)測定ENO的同工酶NSE［6～8］，本實驗特點是測定血清中 ENO 活性，方法簡便快速，特別在對腦神經(jīng)是否有損傷具有過篩作用。

本研究結(jié)果顯示73例腦中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者血清中烯醇化酶活性與健康組比較顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。ENO活性明顯升高其原因可能是在腦出血、腦梗死的情況下腦組織軟化、壞死、周圍組織水腫、神經(jīng)元細(xì)胞膜完整性破壞，大量的烯醇化酶由神經(jīng)細(xì)胞、血細(xì)胞內(nèi)漏出，導(dǎo)致血清中ENO明顯升高，其中16例患者癥狀輕ENO活性升高不明顯。這與腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞、腦血管受損程度有關(guān)，結(jié)果顯示疾病與烯醇化酶活性呈正相關(guān)。據(jù)報道［9，10］NSE與腦梗死、腦出血臨床關(guān)系密切。我們實驗檢測的是烯醇化酶活性，NSE是烯醇化酶的同功酶，實驗病例結(jié)果說明烯醇化酶活性與NSE的關(guān)系呈正相關(guān)。為神經(jīng)系統(tǒng)疾病診療提供參考同樣有一定意義。ENO活性與疾病的進(jìn)展及愈后的關(guān)系我們將作進(jìn)一步的實驗探討。

1 Fouge rousse F，Edom-vovand F，Me rkulova T，et al.The muaclespecific is an early marker of humam myogencsis［J］.muscle Res Cell，2001，22(6)：534-544.

2 Meric E，Ganduz A.Theprognostie in head trauma valueofneuronspecficenolase patients［J］.Fmergmed，2008，34：20.

3 王中原，陳光輝.神經(jīng)元特異性烯醇化酶與腦損傷［J］.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報，2000，13(4)：250-253.

4 Tracy MR，Hedges SB.Evolutionary history of the enolase genefamily［J］.Gene，2000，259(1-2)：129-38.

5 屈洪艷，彭翔，蔡潤.顱腦損傷患者血清NSE的含量變化及臨床意義［J］.國臨床神經(jīng)外科雜志，2007，12(12)：734-735.

6 季鳳華，周輝，袁伯穩(wěn)，等.神經(jīng)元特異性烯醇化酶在小兒癲癇發(fā)作中的診斷價值［J］.江蘇醫(yī)學(xué)，2008，349(12)：1249-1250.

7 于雪凡，林世和，孫瑞紅.神經(jīng)元特異性烯醇化酶對Creutzfeldt-Jakob病的早期診斷價值［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2008，18(14)：2016-2018.

8 崔俐，林世和，趙節(jié)緒，等.神經(jīng)元特異性烯醇化酶及C-100蛋白對Creutzfeldt-Jakob病診斷價值的研究［J］.臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，2003，16(4)：193-195.

9 王義剛，邢永前，鄭華，等.神經(jīng)元特異性烯醇化酶與急性腦梗死［J］.臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，2001，4(2)：74-75.

10 陳小江，邢永前，鄭華，等.腦出血急性期血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶與神經(jīng)功能缺損的研究［J］.現(xiàn)代康復(fù)雜志，2000，4(11)：1666-1337.