徐 虹

小兒肺熱平膠囊主要由平貝母、黃連、柴胡、黃芩、射干等藥味組方，具有清熱化痰、止咳平喘的功效[1]。方中黃芩所含黃芩苷具有清熱、解毒、抗炎等作用[2]。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定產(chǎn)品中黃芩苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀;USC－202型超聲處理器(上海波龍電子設(shè)備有限公司)。黃芩苷對(duì)照品(批號(hào)為110715－200212，中國(guó)藥品生物制品檢定所);小兒肺熱平膠囊(批號(hào)分別為20080101，20080301，20080601，吉林省大俊藥業(yè)股份有限公司);流動(dòng)相用甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Zorbax SB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流動(dòng)相:甲醇 － 水 －冰醋酸(46∶54∶1);流速:1.0 mL/min;柱溫:20℃;檢測(cè)波長(zhǎng):274 nm[3]407;進(jìn)樣量:10μL。理論板數(shù)以黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品12.52 mg，加50%甲醇[3]407制成每1 mL含黃芩苷25.04μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱(chēng)定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲處理30 min(功率80 W，頻率40 kHz)，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液。按處方比例和供試品溶液制備方法制成不含黃芩的陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn):分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10μL，按照上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果供試品溶液色譜中在與對(duì)照品溶液色譜保留時(shí)間相同的位置上有色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液色譜在相同的位置上無(wú)色譜峰(見(jiàn)圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線(xiàn)性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品溶液 4，8，12，16，20 μL，在上述條件下測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量(X)與峰面積(Y)作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算得回歸方程 Y=78.577X+0.373，r=0.999 8(n=5)，結(jié)果表明，黃芩苷進(jìn)樣量在0.100 2～0.500 8μg范圍內(nèi)與峰面積線(xiàn)性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取黃芩苷對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD為1.5%(n=6)。

重復(fù)性試驗(yàn):取同批樣品(批號(hào)為20080601)，平行6份，依法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果黃芩苷含量的 RSD為 0.79%(n=6)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，分別在 0.5，2，4，6，8 h 時(shí)測(cè)定。結(jié)果的 RSD為1.6%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品(批號(hào)為20080601，含量為1.045 7 mg/g)，分別精密加入黃芩苷對(duì)照品溶液(0.025 04 g/L)適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 黃芩苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法操作，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖并用外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為20080101，20080301，20080601的3批樣品中黃芩苷含量分別為 1.181 2，0.945 0，1.045 7 mg/g。

3 討論

曾分別采用加熱回流[3]212及超聲(40 kHz，80 W)各30 min提取本品，結(jié)果兩者沒(méi)有顯著性差別，根據(jù)檢驗(yàn)快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的原則，選擇超聲法作為供試品溶液的制備方法。另外分別用70%乙醇和50%甲醇提取本品，發(fā)現(xiàn)50%甲醇提取效果好于70%乙醇[2]，故選擇50%甲醇作為提取溶劑。

分別采用色譜柱 Zorbax SB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)和 Zorbax Extend C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在甲醇－水－冰醋酸(46∶54∶1)比例下，Zorbax SB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)分離度較好，保留時(shí)間適中，故選擇此色譜柱。

試驗(yàn)中考察了流動(dòng)相甲醇－水－冰醋酸(50∶50∶1)、乙腈－0.2%磷酸溶液(20∶80)、甲醇 －水 －冰醋酸(46 ∶54∶1)對(duì)供試品預(yù)測(cè)定峰分離度的影響[4－5]，其中流動(dòng)相甲醇－水－冰醋酸(46∶54∶1)分離度好，保留時(shí)間適中。供試品預(yù)測(cè)定峰出峰后到60 min內(nèi)有較多雜質(zhì)峰，為了不干擾樣品測(cè)定，故采用了梯度洗脫的方法。

[1]WS3－B－1490－93，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第八冊(cè))[S].

[2]羅定強(qiáng)，王錫領(lǐng)，呂 卓，等.金嗓清音丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，28(5):653 －654.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[4]崔 嵐，安富榮，夏玲紅.反相高效液相色譜法測(cè)定舒肝祛脂膠囊黃芩苷含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2007，26(11):1 363 － 1 364.

[5]顧云燕，葛衛(wèi)紅.高效液相色譜法測(cè)定女金膠囊中黃芩苷的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，27(2):233 －234.