任華忠,萬 麗,王書林,王金鵬
(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)峨眉學(xué)院,四川 峨眉山 614201;2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,四川 成都 611137)
朱砂蓮為馬兜鈴科馬兜鈴屬植物四川朱砂蓮 Aristolochia cinnabarina C.Y.Cheng et J.L.Wu的干燥塊根,是四川、廣西、云南和貴州習(xí)用的一種止痛中藥,古稱辟虺雷,歷代本草著作如《證類本草》《本草品匯精要》《本草綱目》以及《植物名實圖考》等均有收載[1]。朱砂蓮性寒,味苦、辛,具有清熱解毒、消腫止痛功效,臨床主要用于治療腸炎、痢疾、胃及十二指腸潰瘍、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、癰癤腫毒、外傷出血等?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果表明,朱砂蓮主要具有鎮(zhèn)痛作用,也具有消炎和解熱、抗癌、抗感染、增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能等方面的作用;但朱砂蓮及其制劑有明顯的腎毒性[2],這與其含有的馬兜鈴酸類物質(zhì)有關(guān)。筆者采用高效液相色譜法測定了不同產(chǎn)地朱砂蓮中馬兜鈴酸A的含量[3],旨在為朱砂蓮的安全使用和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供基礎(chǔ)性研究。
Waters 2695型高效液相色譜儀,包括自動脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、二元泵、柱溫箱、2993型紫外檢測器,Empower2 Chromatography Data Software色譜工作站(美國Waters公司);UV-2450型紫外-可見分光光度計(日本島津公司);KQ-250 B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。朱砂蓮藥材樣品8批,分別來源于四川省的馬邊彝族自治縣、崇州市、峨眉山市和重慶市的涪陵區(qū)、萬州區(qū),各批次樣品經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)峨眉學(xué)院鄔家林教授鑒定,為馬兜鈴科馬兜鈴屬植物四川朱砂蓮 Aristolochia cinnabarina C.Y.Cheng et J.L.Wu的干燥塊根,生長年限均為4年,加工方法均為蒸制;馬兜鈴酸A對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號為110746-200406);乙腈為色譜純,其他試劑均為分析純。
色譜柱:Waters C18柱(200 mm ×4.6 mm,5 μm);流動相:水 -乙腈(70∶30);流速:1 mL/min;檢測波長:250 nm;柱溫:27℃。在此色譜條件下,各樣品溶液中的馬兜鈴酸A峰與其他組分峰能達(dá)到基線分離,色譜圖見圖1。
精密稱取馬兜鈴酸A對照品適量,加乙醇使溶解,制成質(zhì)量濃度為0.073 g/L的對照品溶液。取本品粉末約1 g,精密稱定,精密加入甲醇-甲酸(98∶2)100 mL,稱定質(zhì)量,回流90 min,放冷,再稱定質(zhì)量,用甲醇-甲酸(98∶2)補足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過,精密量取濾液20 mL,水浴蒸干,殘渣用乙醇50 mL溶解,再用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,即得供試品溶液。
線性關(guān)系考察:精密吸取質(zhì)量濃度為0.73 g/L的對照品溶液1,2,3,4,5,6,7,8,9,10 mL,用乙醇稀釋并定容至 10 mL,進(jìn)樣 10 μL,記錄色譜圖,測定峰面積。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、馬兜鈴酸A進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程 Y=36 283.478 X+656 353.898,r=0.998(n=10)。結(jié)果表明,馬兜鈴酸A進(jìn)樣量在730~7 300 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。
精密度試驗:精密量取馬兜鈴酸A對照品溶液,加乙醇稀釋至0.036 5 g/L。精密吸取該對照品溶液10 μL,連續(xù)進(jìn)樣6次,測定馬兜鈴酸A峰面積,結(jié)果的 RSD為1.34%(n=6),表明儀器精密度良好。
穩(wěn)定性試驗:取供試品溶液,室溫下放置,分別于 0,2,4,6,8,12 h時測定峰面積。結(jié)果6次測得的馬兜鈴酸A峰面積的 RSD為1.46%(n=6),表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。
重復(fù)性試驗:取樣品約1 g,共6份,精密稱定,照供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量。結(jié)果6次測得的馬兜鈴酸A含量的 RSD為1.52%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。
加樣回收試驗:取樣品約0.5 g,共6份,精密稱定,分別置圓底燒瓶中,各精密加入一定量的馬兜鈴酸A對照品,照供試品溶液制備方法制備溶液,測定含量,計算回收率。結(jié)果見表1。
表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=6)
表2 不同產(chǎn)地朱砂蓮中馬兜鈴酸A的含量(n=3)
分別精密吸取對照品溶液和各批次供試品溶液各10 μL,注入液相色譜儀,測定含量,結(jié)果見表2。
從文獻(xiàn)報道和臨床應(yīng)用的實際情況來看,馬兜鈴酸A是朱砂蓮致腎損害的主要毒性成分,且存在一定的量毒關(guān)系[4]。本試驗結(jié)果表明,不同產(chǎn)地朱砂蓮的馬兜鈴酸A含量有顯著性差異(P<0.05),其中含量較高的是栽培4年的峨眉山朱砂蓮,含量達(dá)0.241%,而各產(chǎn)地朱砂蓮的平均含量為0.206%。近年來,由于陸續(xù)有馬兜鈴科植物致腎損害的報道,朱砂蓮在藥用方面的價值不斷受到質(zhì)疑[2]。動物實驗得出的馬兜鈴酸安全劑量為5 mg/kg,就本次試驗結(jié)果來看,對來自各主要產(chǎn)地的朱砂蓮如能合理使用(《中華本草》規(guī)定為研末內(nèi)服,每次0.5~1 g,每日2次),則其馬兜鈴酸攝入量遠(yuǎn)低于中毒劑量[5]??紤]到朱砂蓮在西南各省民間使用歷史悠久,療效確切,筆者認(rèn)為不宜對朱砂蓮及其制劑采取完全否定的態(tài)度;但作為已明確不良反應(yīng)的藥物,應(yīng)當(dāng)慎重使用,可在藥品標(biāo)準(zhǔn)中注明使用禁忌和注意事項等內(nèi)容,以免使用不當(dāng)造成嚴(yán)重不良反應(yīng)。
[1]鄔家林.朱砂蓮的考證[J].中藥材,1985,8(5):46.
[2]黃仁發(fā),史 偉,吳金玉,等.朱砂蓮中毒致急性馬兜鈴酸腎病[J].藥物不良反應(yīng)雜志,2007,9(6):412.
[3]路金才,韓 娜,杜曉曦,等.馬兜鈴酸的測定方法現(xiàn)狀分析[J].中草藥,2006,37(7):1 113.
[4]徐曉月,張陸勇,江振洲,等.馬兜鈴酸Ⅰ腎毒性的實驗研究[J].中國生化藥物雜志,2006,27(6):336.
[5]梅全喜,高玉橋,胡世林.應(yīng)理性對待含馬兜鈴酸類中藥[J].中國藥房,2006,17(7):554.