徐淑貞 陳明濤

(浙江省中醫(yī)院,浙江 杭州 310006)

胸腹水有核細胞計數(shù)以往多采用傳統(tǒng)的計數(shù)板顯微鏡下人工計數(shù),此法是公認的參考方法,但其操作步驟較多,近年來,UF-1000i尿沉渣分析儀的應用迅猛發(fā)展,對其功能的開發(fā)日趨完善,應用也日趨成熟。本文旨在探討UF-1000i尿沉渣分析儀在胸腹水有核細胞計數(shù)中的應用,報道如下。

1 標本與方法

1.1 標本 選擇2010年4～5月本院住院患者足夠量的EDTA-3K抗凝胸腹水標本40份,所有標本在1小時內(nèi)完成檢測。儀器與試劑:UF-1000i尿沉渣分析儀由日本西森美康公司供應;改良牛鮑氏計數(shù)板由上海求精生化試劑有限公司供應;UF II sheath(鞘液),UF II pack-SED(沉渣用稀釋液),UF II search-SED(沉渣用染色液),UF II control(質(zhì)控品High/Low2個水平),白細胞稀釋液(自配5%冰醋酸)。

1.2 方法

1.2.1 校準儀器使用配套的校準物,每天行質(zhì)量控制系統(tǒng)監(jiān)控,并參加室間質(zhì)評活動,各項目均在性能可接受范圍之內(nèi)。具體檢測按照儀器和各項目標準作業(yè)指導書操作[1],儀器法記錄WBC和上皮細胞的和作為有核細胞數(shù)。

1.2.2 精密度試驗 取1份足夠量的新鮮胸腹水標本,用儀器法重復檢測10次,再用人工法重復檢測10次,記錄結(jié)果各求均值和CV%值。根據(jù)美國臨床實驗室修正法規(guī)(CLIA'88)規(guī)定[2],批內(nèi)變異小于該項目室間質(zhì)量評價標準的1/2即為可接受,相反則不接受。判斷標準為＜7.5%。

1.2.3 比對試驗 參照NCCLS文件EP9-A[3]每日選取5份標本(其中含高、中、低值),分別用儀器法和人工法按常規(guī)檢測方法測定每份標本的有核細胞數(shù),兩種方法對每份標本各重復測定2次求均值,5份標本第一次測定的排序為 1、2、3、4、5、第二次測定的排序5、4、3、2、1。同法連續(xù)測定8天 ,記錄每樣本雙次測定的均值,所得40對數(shù)據(jù)使用Excel軟件作散點圖:Y軸:儀器法測的每樣本雙次測定的均值(Y);X軸:人工法測的每樣本雙次測定的均值(X);軟件自動生成相關(guān)系數(shù)R^2和回歸方程 Y=bx+a。根據(jù)美國臨床實驗室修正法規(guī)(CLIA'88)規(guī)定將該項目醫(yī)學決定水平值代入回歸方程Y=bx+a,求相對誤差(%SE),如所得相對誤差(%SE)小于室間質(zhì)量評價標準WBC≤15%的1/2為臨床可接受標準,相反則不接受。

1.3 統(tǒng)計學處理 作相關(guān)系數(shù)檢驗并作線性回歸分析。

2 結(jié) 果

2.1 兩種方法精密度試驗結(jié)果 儀器法CV%=5.7%,小于人工法CV%=6.5%。兩種方法CV%均符合判斷標準＜7.5%,詳見表1。

表1 兩種方法精密度試驗結(jié)果

2.2 兩種方法比對結(jié)果 相關(guān)系數(shù)r=0.9958,大于判定標準0.95,提示兩種方法無顯著性差異(P＞0.05),回歸方程Y=0.9913X-9.7773,兩種方法測定的原始數(shù)據(jù)散點圖(見圖1)。

圖1 儀器法與人工法測定的原始數(shù)據(jù)散點圖

2.3 將項目醫(yī)學決定水平值代入回歸方程Y=0.9913X-9.7773,求兩水平相對誤差%SE1=4.1%,%SE2=1.8%均小于CLIA'88判斷標準＜7.5%,提示試驗方法與參考方法之間有一致性,見表2。

表2 儀器法中有核細胞數(shù)不同水平的準確度試驗結(jié)果

3 討 論

臨床開展的胸腹水常規(guī)分析中,有核細胞計數(shù)是不可缺少的項目指標,它對疾病的診斷、治療和預后估計都有重要的臨床意義。以往本院多采用傳統(tǒng)的計數(shù)板計數(shù),但其方法不夠簡便快捷。UF-1000i尿沉渣分析儀的工作原理是用紅色半導體激光束照射經(jīng)過核酸熒光染色后在鞘流貫流分析池中形成的鞘流樣本,并通過對各粒子產(chǎn)生的前向散色光、側(cè)向散色光以及側(cè)向熒光信號轉(zhuǎn)換成的光信號進行分析,從而對各個粒子進行識別。定量分析參數(shù)包括紅細胞、白細胞、上皮細胞、管型。線性范圍可以達到:白細胞 1～5000(個/μ L)上皮細胞1～200(個/μ L)[4],由此可見靈敏度可以達到各位數(shù),這就比較適合低值標本的檢測。表1對兩種方法進行了比較,結(jié)果證明UF-1000i尿沉渣的精密度為5.7%,小于CLIA'88判斷標準的7.5%,并且小于人工法的精密度6.5%,說明儀器檢測具有較高的精密度。圖1散點圖也提示,兩種方法具有較好的一致性。表2的評價可以看出儀器法在測量高、低兩個醫(yī)學決定水平濃度時與參考方法之間相對誤差均小于CLIA'88判斷標準的7.5%,表明儀器法有較高的準確度,需要指出的是胸腹水有核細胞形態(tài)多樣,大小不一,常含較多的間皮細胞,它在尿沉渣分析中多體現(xiàn)在上皮細胞項目中,所以儀器測的有核細胞不能僅僅采用白細胞數(shù),還需包括上皮細胞數(shù)。檢驗科自動化檢測手段日新月異,儀器檢測代替人工檢測是大勢所趨,故臨床醫(yī)生需要把握好儀器性能,及運用好各類儀器的項目參數(shù)。

[1] 葉應嫵,王毓三.全國臨床檢驗操作規(guī)程.3版,南京:東南大學出版社,2006:313

[2] 馮仁豐.臨床檢驗質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ).上海:上海科學技術(shù)文獻出版社,2003:58.

[3] 張傳寶,張克堅.方法比對及偏差評估的方法.臨床實驗室質(zhì)量管理文件匯編.2000:169

[4] 伊藤機一,油野友二.UF-1000i/UF-500i Clinical Case Study ver.2.Japan:2000:17