于忠輝，范 青，張 寧，張 策，呂慧怡

沃麗汀是卵磷脂絡(luò)合碘片劑，臨床用于治療血管痙攣性視網(wǎng)膜炎、出血性視網(wǎng)膜炎、缺碘性甲狀腺腫、缺碘性甲狀腺機(jī)能減退等［1］。本實(shí)驗(yàn)原理為酸性條件下血樣中的碘與重鉻酸鉀發(fā)生氧化還原反應(yīng)析出碘單質(zhì)，碘與丁酮1∶1絡(luò)合生成碘丁酮，碘丁酮被環(huán)己烷有機(jī)溶劑萃取，用氣相色譜法測定碘丁酮的濃度即為碘的濃度，適用于沃麗汀藥代動力學(xué)的研究。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 氣相色譜儀:GC-17A氣相色譜儀;檢測器:火焰離子化檢測器(日本島津公司);色譜柱類型:CV-1701;載氣:氮?dú)?燃?xì)?氫氣;助燃?xì)?空氣;METTLER萬分之一分析天平(日本)。

1.2 藥品 卵磷脂絡(luò)合碘片(日本第一株式會社，規(guī)格:1.5 mg，批號:200803)。

1.3 試劑 硫酸、硫代硫酸鈉、丁酮、重鉻酸鉀、環(huán)己烷，均為分析純。

2 方法

2.1 對象的選擇 6位健康受試者均為男性，年齡(23±4)歲，身高(175±5)cm，體重(75±5)kg。受試者體格檢查肝腎功能、血常規(guī)、心電圖、血壓和脈搏均屬正常;試驗(yàn)前2周及試驗(yàn)前期未服用其他藥物，每位受試者均簽署知情同意書。

2.2 方法 試驗(yàn)前隨機(jī)編號，禁食12 h后，清晨空腹口服沃麗汀片劑，用溫開水200 mL送服。受試者采血期間禁煙酒，采血后4 h給予低碘飲食。自給藥后 0、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8、10、15、24 h取上肢靜脈血1.5 mL，并立即移入肝素化試管中。離心30 min(1 000 r/min)分離血漿。于-20℃冰箱中保存待分析。

2.3 血藥濃度的測定

2.3.1 色譜條件的建立 采用CV-1701型色譜柱(50 mm×0.53 mm)，柱溫105℃，氮?dú)饬魉?0 mL/min，汽化室溫度230℃。檢測器溫度260℃，進(jìn)樣量1.0 μL。在選定的色譜條件下，血漿中的碘與內(nèi)源性物質(zhì)分離良好，保留時間為1.708 min，峰形尖銳。1號峰與2號峰分離度為1.51。見圖1。

圖1 碘的色譜圖注:1.卵磷脂絡(luò)合碘，2.內(nèi)源性物質(zhì)

2.3.2 血漿樣品的預(yù)處理 取血漿樣品0.5 mL，加水至5 mL，混勻。加入硫酸0.1 mL，搖勻后加入0.1 mol/L硫代硫酸鈉溶液0.2 mL，再次混勻，加入丁酮0.5 mL，混勻后加入0.25 mol/L重鉻酸鉀溶液1 mL，混勻后放置10 min，加入環(huán)己烷。輕輕正反倒置30次，待其靜置分層，提取上清液。進(jìn)樣，進(jìn)樣量1.0 μL，記錄峰面積，求出血藥濃度。

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 預(yù)先將KI粉末在110℃烘干至恒重，精稱KI粉末0.013 8 g用水定容至100 mL。臨使用前將KI儲備液稀釋1 000倍。取儲備液0.1 mL，用水定容至100 mL。分別取KI標(biāo)準(zhǔn)液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 于 5 支 10 mL帶塞比色管中，并加入空白(未服藥)血漿0.5 mL混勻。加入水至5 mL。按血漿樣品處理項(xiàng)下的方法操作，取1.0 μL上清液進(jìn)樣，記錄峰面積(A)，以濃度(C)對應(yīng)峰面積(A)進(jìn)行線性回歸。得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A=106 977.319C+5 499 093.095，r=0.999 2。由此可見，在 2 ～10 μg/dL的血藥濃度范圍內(nèi)，血漿中的碘與其峰面積成良好的線性關(guān)系。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 精密度試驗(yàn) 取5 mL的刻度試管，分別加入空白血漿，然后加入高、中、低3個濃度的標(biāo)準(zhǔn)碘液。使混勻配成含碘2、5、10 μg/dL的血漿樣品，按“血漿樣品的處理”項(xiàng)下的方法操作，取上清液進(jìn)樣，記錄峰面積，處理后的樣品置于冰箱中保存，于同一天內(nèi)進(jìn)樣，每個濃度各進(jìn)5針，計(jì)算日內(nèi)精密度。連續(xù)5 d，每天每個濃度進(jìn)一次樣，計(jì)算日間精密度。日間精密度(3.26% ±7.21%)，日內(nèi)精密度(2.43% ±6.31%)。

2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取碘化鉀標(biāo)準(zhǔn)液配制的5 μg/dL血漿溶液，按“血漿樣品的處理”項(xiàng)下的方法操作，處理后的樣品置于冰箱中保存。分別0、2.0、4.0、8.0、15、24.5 h 取上清液進(jìn)樣，記錄峰面積，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在24 h內(nèi)碘化鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液配制的血漿溶液的峰面積穩(wěn)定，RSD值為0.725%。

2.4.3 回收率試驗(yàn) 取健康人血漿，加入KI標(biāo)準(zhǔn)液配成濃度2.0、5.0、10.0 μg/dL的溶液，各 6份，按“血漿樣品的處理”項(xiàng)下的方法操作，用回歸方程求得碘濃度，計(jì)算回收率，分別為101.11%、98.4%、97.96%，RSD為1.72%。

2.5 數(shù)據(jù)的處理 將測得的數(shù)據(jù)代入標(biāo)準(zhǔn)曲線得出血漿藥物濃度。

3 結(jié)果

應(yīng)用3P97進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到結(jié)果:tmax=(1.625 ±0.25)h，t1/2=(3.932 ±0.941)h，Cmax=(57.9±1.651)μg/L。血藥濃度時間曲線見圖2。

圖2 血藥濃度時間曲線

4 討論

4.1 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果沃麗汀血藥濃度在1.6 h達(dá)峰，至24 h已基本代謝完全。表明氣相色譜法適用于卵磷脂絡(luò)合碘片(沃麗汀片)血漿藥物濃度的測定，為進(jìn)一步提供藥物代謝動力學(xué)監(jiān)測提供了依據(jù)。其結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、簡便。

4.2 由于人體甲狀腺攝取碘，在饑餓等狀態(tài)下可能釋放碘。人體自身碘值的影響會干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以在實(shí)驗(yàn)過程中特別注意飲食和飲水平衡，給予低碘飲食，使得人體內(nèi)基礎(chǔ)碘值處于相對恒定的水平［4］。

4.3 本實(shí)驗(yàn)存在樣本少的缺點(diǎn)，可為進(jìn)一步臨床試驗(yàn)提供依據(jù)，溫度對本實(shí)驗(yàn)影響不大，室溫放置與置于冰箱中保存后測定結(jié)果相差微小，所以本實(shí)驗(yàn)中對溫度要求不很嚴(yán)格。

［1］ 王曉通，姚金瑞.沃麗汀聯(lián)合腸溶阿司匹林治療視網(wǎng)膜靜脈阻塞［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2007，23(13):2114-2115.

［2］ 蔡克波.卵磷脂絡(luò)合碘片對非缺血型視網(wǎng)膜分支靜脈阻塞的療效［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2007，23(7):1051-1052.

［3］ 陳永信，張承芬，譚柯.卵磷脂絡(luò)合碘片(沃麗汀)臨床應(yīng)用的安全性和有效性驗(yàn)證［J］.臨床眼科雜志，2007，3(15):251-253.

［4］ 許啟榮，龍敏，曹民，等.離子色譜法測定尿碘濃度［J］.中國藥房，2006，17(23):1794.