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(1.吉林省生物研究所，吉林 長春 130012；2.長春金賽藥業(yè)股份有限公司，吉林 長春 130012)

琦紅丸是吉林省生物研究所開發(fā)的由功能性紅曲、荷葉、黑木耳等制成的具有降血脂作用的保健食品，功能性紅曲所含有的洛伐他汀是體內(nèi)膽固醇合成酶Hmg-COA還原酶的專一性抑制劑，能夠有效減少或阻斷內(nèi)源性膽固醇的合成，達(dá)到降血脂作用。其存在形式分酸式和內(nèi)酯2種,酸式結(jié)構(gòu)的洛伐他汀空間結(jié)構(gòu)與體內(nèi)Hmg-COA更為接近，無需水解，其活性較內(nèi)酯式高約一倍。而內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的洛伐他汀本身無生物活性，但在人體內(nèi)可以被水解成酸式結(jié)構(gòu)而具有活性。有關(guān)文獻[1-3]對洛伐他汀含量測定報道只測定內(nèi)酯洛伐他汀，鑒于洛伐他汀在功能性紅曲米中的存在特點,本文采用酸式和內(nèi)酯2種形式的洛伐他汀含量之和作為制定琦紅丸中洛伐他汀含量測定標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)，更為合理、科學(xué)，能夠較好地控制產(chǎn)品的質(zhì)量。

1 儀器與試劑

安捷倫1100高效液相色譜儀，安捷倫自動進樣器，低速離心機，超聲波清洗器；甲醇為色譜純，無水乙醇、磷酸、氫氧化鈉等試劑均為分析純；洛伐他汀(內(nèi)酯)標(biāo)準(zhǔn)品(批號：100600-200502,供含量測定用)購自中國藥品生物制品鑒定所，規(guī)格:100 mg；琦紅丸樣品由吉林省生物研究所提供。

2 適應(yīng)性試驗

色譜柱：XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇∶0.12%磷酸溶液(V/V)=77∶23；柱溫：24 ℃；流速：1 mL/min；檢測波長238 nm；進樣量：20 μL。規(guī)定其理論塔板數(shù)按洛伐他汀(內(nèi)酯)峰面積計算，應(yīng)不低于2 000。

3 洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品溶液制備

精密稱取洛伐他汀(內(nèi)酯)標(biāo)準(zhǔn)品40.0 mg，以75%乙醇定容100 mL。此溶液濃度為400 μg/mL。

4 操作方法

4.1 洛伐他汀(內(nèi)酯)標(biāo)準(zhǔn)工作液制備 準(zhǔn)確量取洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 mL，以75%乙醇定容至10 mL。此溶液濃度為40 μg/mL。

4.2 供試品溶液制備 取20袋琦紅丸，粉成細(xì)粉，混勻，取粉末約0.5 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加入30 mL 75%乙醇(體積分?jǐn)?shù))，室溫下超聲50 min，加75%乙醇至接近刻度,再超聲10 min，之后冷卻至室溫，用75%乙醇定容至50 mL，混勻。以3 500 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，取上清液，0.45 μm微孔濾膜過濾，濾液待用。

4.3 定性用酸式洛伐他汀的制備 稱取洛伐他汀(內(nèi)酯)標(biāo)準(zhǔn)品4 mg，以0.2 mol/L氫氧化鈉溶液定容至100 mL，在50 ℃條件下超聲轉(zhuǎn)化1 h，放置到室溫后再放置1 h。

4.4 供試品中洛伐他汀含量測定 取洛伐他汀內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)工作液、洛伐他汀酸式對照品溶液、供試品溶液各20 μL分別注入高效液相色譜儀，以供試品中洛伐他汀酸式峰面積與內(nèi)酯峰面積之和與洛伐他汀內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品峰面積之比計算琦紅丸中洛伐他汀的含量。洛伐他汀(內(nèi)酯)色譜圖見圖1；洛伐他汀(酸式)色譜圖見圖2；供試品色譜圖見圖3。

圖1 洛伐他汀(內(nèi)酯)標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖2 洛伐他汀(酸式)標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

圖3 琦紅丸供試品色譜圖

5 方法學(xué)考察

5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 mL置10 mL容量瓶中，加75%乙醇定容至刻度，0.45 μm微孔濾膜過濾，分別注入液相色譜儀。測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，以洛伐他汀(內(nèi)酯)含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測得回歸方程為Y=67.471 14X-8.914 04(r=0.999 9)。結(jié)果表明洛伐他汀(內(nèi)酯)在8.44～253.2 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

5.2 空白試驗 取不含功能性紅曲的陰性對照樣品，按上述方法檢測，結(jié)果陰性對照色譜中，在洛伐他汀酸式與內(nèi)酯的保留時間處，無干擾峰出現(xiàn)。

5.3 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液20 μL，分別在0、2、4、6、8、10 h照上述方法測定，以洛伐他汀酸式與內(nèi)酯峰面積之和計，結(jié)果表明供試品在10 h內(nèi)，未發(fā)生明顯變化。峰面積的RSD值為0.23%。

5.4 精密度試驗 取同一標(biāo)準(zhǔn)品溶液20 μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積值，結(jié)果，RSD=0.11%。

5.5 重復(fù)性試驗 取同一批號供試品(批號：20100801)6分，按4.2項下方法制備供試品溶液，分別按上述方法測定含量，結(jié)果RSD=0.47%。

5.6 回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品(批號：20100801)6分，分別加入等量的內(nèi)酯洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品。按照上述方法進行測定，計算出回收率，測定結(jié)果平均回收率=99.25%，RSD=1.42%。

5.7 3批樣品的含量測定 批號20100801、20100802、20100803的含量(mg/100 g)分別為350、349、352。

6 結(jié)論

通過比較紅曲原料、按配方比例混合的樣品及生產(chǎn)的3批樣品含量測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，生產(chǎn)過程酸式洛伐他汀部分脫水轉(zhuǎn)成內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，而且洛伐他汀含量有少量下降現(xiàn)象，可能是生產(chǎn)過程中受熱所造成的，但不影響產(chǎn)品質(zhì)量及功效?？傊?，本方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，用于琦紅丸中洛伐他汀的含量測定，能夠很好的控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。

[1]廖一民,向世學(xué).高效液相同時測定保健食品中兩種結(jié)果形式洛伐他汀的含量[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2006,16(3):286-287.

[2]宋洪濤.HPLC法對不同來源紅曲中洛伐他汀的定量分析[J].中草藥,1999,30(2):49.

[3]文鏡,常平.紅曲中內(nèi)酯型Lovastatin的HPLC測定方法研究[J].食品科學(xué),2000(12):56.