林 霄 劉布鳴 張寧寧 劉 元

廣西中醫(yī)藥研究院 廣西中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)重點實驗室，廣西 南寧 530022

木蘭科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.主要產(chǎn)于廣西、云南［1］，其新鮮枝葉或成熟果實經(jīng)水蒸氣蒸餾可得到八角茴香油［2］，臨床上用于溫陽散寒，理氣止痛，用于寒疝腹痛，腎虛腰痛，胃寒嘔吐，脘腹冷痛［2］。八角茴香油的主要成分為反式茴香腦。文獻(xiàn)報道的八角茴香油中反式茴香腦的測定方法多采用填充柱氣相色譜法或氣質(zhì)聯(lián)用色譜法［3－5］，而以內(nèi)標(biāo)法計算的毛細(xì)管柱氣相色譜法未見報道，且作為八角茴香油原料的八角枝葉亦鮮見有含量測定方面的報道。控制八角茴香油的質(zhì)量首先就需從原料抓起。本實驗采用毛細(xì)管柱氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測定八角枝葉中反式茴香腦的含量，結(jié)果表明，本法快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性和分離效果好，可作為八角枝葉質(zhì)量控制的測定方法。

1 儀器、試藥與試樣

美國安捷倫7890A氣相色譜儀。反式茴香腦對照品(trans－Anethol)，Lot:10370，含量≥99.0%，購自美國Sigma－Aldich Fluka公司;環(huán)己酮 (批號20070205)，分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠，含量≥99%。水為蒸餾水，其余所用試劑均為分析純。樣品:八角茴香枝葉，采自廣西金秀、馬山、大新，廣西中醫(yī)藥研究院中藥所提供，經(jīng)黃云峰助理研究員鑒定為木蘭科植物八角茴香Illicium verum Hook.f.。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:HP－INNOWAX(相當(dāng)于PEG－20M)毛細(xì)管柱，內(nèi)徑 0.32mm，柱長為 30m，膜厚0.50μm。程序升溫:初溫90℃，以每分鐘5℃的速率升溫至140℃，再以每分鐘10℃的速率升溫至200℃，保持5分鐘;分流進(jìn)樣，分流比為10∶1。進(jìn)樣口溫度:230℃;FID檢測器溫度:230℃。進(jìn)樣量1.0μl，理論板數(shù)按環(huán)己酮峰計算大于50000。

2.2 對照品溶液的制備 稱取反式茴香腦對照品約5g，精密稱定，得5.0917g，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，即得 (101.834mg/ml)。

2.3 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取環(huán)己酮約2.5g，精密稱定，得2.5146g，置50ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液 (50.292mg/ml)。

2.4 供試品溶液的制備 取八角枝葉粉末約4g，精密稱定，置500mL蒸餾瓶中，加水300ml，于電熱套蒸餾至揮發(fā)油不再增加為止，揮發(fā)油測定器中蒸餾液用乙酸乙酯萃取3次，每次10ml，合并萃取液，置50ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍考察 精密吸取反式茴香腦對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置50ml量瓶中，各精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件，進(jìn)樣1.0μl，測定，以茴香腦與環(huán)己酮的峰面積積分值之比為縱坐標(biāo)，茴香腦進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，得回歸方程Y=1.0579 X－0.006，r=0.9994，說表明茴香腦進(jìn)樣量在0.2037～2.0367μg范圍內(nèi)良好的線形關(guān)系。

2.6 校正因子測定 精密稱取上述反式茴香腦對照品溶液0.6ml置50ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為校正因子測定溶液 (含反式茴香腦 1.222mg/ml，環(huán)己酮 1.0058mg/ml)。吸取1.0μl，注入氣相色譜儀，測定，計算校正因子。結(jié)果校正因子為0.9450，RSD=1.95%(n=6)。

2.7 精密度試驗 分別吸取同一供試品溶液，進(jìn)樣6次，依次測定，以茴香腦峰面積積分值對環(huán)己酮峰面積積分值的比值計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，測得平均值為0.9706，RSD=0.35%。

2.8 重復(fù)性試驗 取同一批次八角枝葉 (廣西金秀)，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進(jìn)樣，測得反式茴香腦平均值為1.11%(g/g)，RSD=1.36%。

2.9 加樣回收試驗 取已測知含量 (1.11%)的八角枝葉(廣西金秀)6份，每份2g，精密稱定，加入反式茴香腦對照品溶液0.2ml，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，再按上述色譜條件進(jìn)樣1.0μl，計算，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實驗結(jié)果

2.10 樣品測定 按供試液的制備及檢測方法，分別測定3個產(chǎn)地批號的樣品，結(jié)果見表2。

反式茴香腦含量 (%)(g/g)為1.09，1.08，1.11。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

本分析方法采用了毛細(xì)管氣相色譜法和內(nèi)標(biāo)校正因子法測定八角枝葉中反式茴香腦的含量，毛細(xì)管氣相色譜法具有樣品用量少的優(yōu)點，且采用內(nèi)標(biāo)法可減少實驗誤差。研究結(jié)果表明，毛細(xì)管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可為八角茴香枝葉的質(zhì)量控制方法提供參考。

［1］國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草［M］.上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1998，450.

［2］中華人民共和國藥典 (一部)［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010，4.

［3］曹冠雄，陳素珍，王宗廉等.八角茴香油化學(xué)成分的毛細(xì)管氣相色譜質(zhì)譜測定［J］.中草藥，1983，14(9):19.

［4］李壽芬，劉紹華.岑溪優(yōu)質(zhì)八角茴香油的化學(xué)成分［J］.廣西植物，(20)(1):69－70.

［5］黃智波，劉布鳴，梁凱妮.氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測定八角茴香油中茴香腦的含量［J］.廣西中醫(yī)藥，2005，28(3):56－57.