林宇星 阮君山 傅慧玲 周 歡 王少明 莊 捷

1.福建醫(yī)科大學(xué)省立臨床學(xué)院，福建 福州 350001;2.福建省立醫(yī)院，福建 福州 350001

健康人的血清尿酸值一般為男性238－357umol/L，女性178－297umol/L，但由于飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣的變化，如攝入高嘌呤的食物，勞累及劇烈運(yùn)動(dòng)等也會(huì)有一過性的上升。因此通常1～2周內(nèi)測(cè)定2～3次，男性若持續(xù)超過380umol/L，女性持續(xù)超過300umol/L，就可稱為高尿酸血癥［1］。

以往人們對(duì)嘌呤代謝產(chǎn)物的作用和意義認(rèn)識(shí)較少，HU在我國(guó)一直被當(dāng)作少見病。近年來由于人們生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的變化，HU和痛風(fēng)的發(fā)病率逐年提高。流行病學(xué)研究表明，痛風(fēng)的發(fā)病率在不斷上升，導(dǎo)致了經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的不斷加重［2－4］。高尿酸血癥 (HU，hyperuricemia)是痛風(fēng)發(fā)展的一個(gè)關(guān)鍵性因素，而且與腎功能不全、心血管疾病、高血壓、高脂血癥、腫瘤、糖尿病腫瘤與衰老、糖尿病、器官移植以及代謝綜合癥的發(fā)生相關(guān)［5－9］。血尿酸產(chǎn)生過多、腎臟尿酸排泄障礙或者這兩個(gè)因素的綜合作用導(dǎo)致高尿酸血癥的發(fā)生。建立適合的HU模型，對(duì)人們無論研究嘌呤代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法，還是研究與嘌呤代謝有關(guān)的其他各種疾病，都具有重要的意義。

小春花系陰地蕨科植物陰地蕨 Sceptridium ternatum(Thunb1)Lyon的民間習(xí)稱，主產(chǎn)地為福建。性甘平、味淡，具有清肝、肺火、明目、解熱祛風(fēng)的功效［10］。臨床上可用于高尿酸血癥及痛風(fēng)的治療。我們前期的研究表明其具有解熱、抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤等活性［11－14］。我們利用建立的模型觀察小春花的干預(yù)作用，以檢驗(yàn)?zāi)Ｐ褪欠癯晒Α?/p>

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性昆明小鼠100只，體重17.5～31.0克，由福建省立醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 主要儀器 代謝籠:蘇州實(shí)驗(yàn)動(dòng)物器械廠;離心機(jī):貝克曼高速離心機(jī);電子天平:上海精密化學(xué)儀器有限公司;全自動(dòng)生化儀:日立儀器 (蘇州)有限公司。

1.3 主要藥物 鹽酸乙胺丁醇片購自沈陽紅旗制藥有限公司 (國(guó)藥準(zhǔn)字H21022349)，腺嘌呤購自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。小春花浸膏，濃度為1g生藥/ml，福建省立醫(yī)院制劑室提供。

1.4 檢測(cè)用試劑 尿素氮 (BUN)試劑盒、肌肝 (cr)試劑盒、尿酸 (UA)試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.5 模型建立方法 將50只小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，設(shè)立給藥組4個(gè)劑量組和空白對(duì)照組，稱重分別給予不同劑量的腺嘌呤和乙胺丁醇 (A組，腺嘌呤25mg/kg，乙胺丁醇 50mg/kg;B組，腺嘌呤35mg/kg，乙胺丁醇75mg/kg;C組，腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg;D組，腺嘌呤100mg/kg，乙胺丁醇200mg/kg)。藥物用蒸餾水配制成混懸液，按0.1ml/10g體重，分別按上述劑量灌胃，連續(xù)15天。空白組給予同體積的生理鹽水。實(shí)驗(yàn)第16天，各組小鼠斷頭取血，分離血清按試劑盒說明測(cè)定尿素氮、肌及尿酸的含量。

1.6 藥物干預(yù) 造模方法同上，另取40只小鼠，分為小春花組高低劑量 (3g、1.5g生藥·kg－1體重)，模型組，正常組，每組10只動(dòng)物，除正常組外按前述篩選的模型方法造模，于實(shí)驗(yàn)第7天給予不同濃度的小春花浸膏，實(shí)驗(yàn)第16天小鼠斷頭處死，取血，分離血清按試劑盒說明測(cè)定測(cè)定尿素氮、肌及尿酸的含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS10.0分析軟件，進(jìn)行 t檢驗(yàn)，分析各組的差異。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 高尿酸血癥動(dòng)物模型的建立

A、B組老鼠造模后，血清中BUN和CREA和正常組比較，顯著上升 (p＜0.01)，而UA沒有差異。C、D組的UA和正常組相比有顯著的升高 (p＜0.01)，同時(shí)D組的BUN、CREA的濃度顯著上升，提示腎臟損傷，而C組的BUN、CREA與正常組相比沒有差異。故選用C組的劑量及腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg作為HU的造模方法。

2.2 小春花的干預(yù)作用

選用腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg這個(gè)劑量造模后，實(shí)驗(yàn)第7日給予不同劑量的小春花，實(shí)驗(yàn)第16天取血測(cè)定BUN、CRE、UA的變化。結(jié)果表明，小春花能有效的降低血中UA的含量 (P＜0.01)，保護(hù)小鼠的腎功能 (P＜0.01)。結(jié)果見表2.

表1 各組血BUN、CRE、UA值比較

表2 小春花對(duì)高尿酸血癥小鼠的干預(yù)作用

3 討論

高尿酸血癥是由血UA濃度過高引起的代謝性疾病。成人不論男女，UA的正常值為90－420umol/L(尿酸酶－過氧化物偶聯(lián)法)，超過此范圍即為高尿酸血癥。無癥狀性高尿酸血癥是痛風(fēng)發(fā)生的前期狀態(tài)。由于UA的水溶性較差，血UA過高會(huì)形成結(jié)晶，沉積于關(guān)節(jié)、腎臟等處，引起關(guān)節(jié)炎和腎臟損害。并且與高血壓、高脂血癥、冠心病、腦卒中、糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)［15－18］。

近年來，由于人們飲食習(xí)慣的改變，痛風(fēng)和HU的發(fā)病率，在全世界范圍內(nèi)都呈上升趨勢(shì)，同時(shí)其導(dǎo)致的心腦血管并發(fā)癥，亦嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量。

動(dòng)物模型是研究疾病發(fā)病機(jī)理，尋找新型治療藥物的重要工具。開展關(guān)于HU和痛風(fēng)的研究，也應(yīng)首先建立起可靠的HU動(dòng)物模型。現(xiàn)有的建模方法，主要從以下幾個(gè)方面達(dá)到升高血尿酸的目的:(1)抑制尿酸酶的活性;(2)抑制腎臟排泄尿酸;(3)補(bǔ)充尿酸的前體物質(zhì);(4)直接補(bǔ)充外源性尿酸。

最理想的動(dòng)物模型是尿酸酶基因敲除小鼠，這種方法是通過破壞胚胎干細(xì)胞的尿酸酶基因，由于尿酸酶基因完全缺失，此動(dòng)物模型的血UA濃度可升高十倍引起HU。目前兩種方法可以減弱或消除尿酸酶的作用。但是這種模型方法技術(shù)較為復(fù)雜，成本也較高，這限制了它的廣泛使用。且此種小鼠一般不能成活4周以上［19－21］。

另外常見的方法是將尿酸酶抑制劑乙胺丁醇與腺嘌呤合用于大鼠的高尿酸血癥模型。但這種模型容易導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)腎小球肥大、和硬化、甚至纖維化，與臨床實(shí)際有出入［15，22］。

本實(shí)驗(yàn)采用腺嘌呤 (Adenine)、乙胺丁醇灌喂小鼠誘導(dǎo)高尿酸血癥動(dòng)物模型，根據(jù)參考文獻(xiàn)［28、29］造模方法及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，配置四個(gè)濃度的腺嘌呤跟乙胺丁醇，分別為25mg/kg(50mg/mg)、 35mg/kg(75mg/kg)、 50mg/kg(100mg/kg)、100mg/kg(200mg/kg)，灌胃造模。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取腺嘌呤50mg/kg，乙胺丁醇100mg/kg這個(gè)劑量造模實(shí)驗(yàn)結(jié)果及小春花的干預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明小鼠UA升高明顯，且腎功能的損害較小，模型可靠穩(wěn)定。

小春花是福建民間常用的草藥，具有清熱解毒的作用。臨床上可以用于高尿酸血癥及痛風(fēng)的治療。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小春花能降低模型小鼠的血尿酸值。但其作用機(jī)制如何，有待于進(jìn)一步的研究。

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