黎海瀾,焦 偉,莫柱寧,陽子驥

(廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院,南寧 530021）

臨床工作中,從新生兒身上采血比較困難,有時難以準(zhǔn)確判定血型,使新生兒 A、B、O血型、Rh(D)血型鑒定和直接抗球蛋白試驗(yàn)檢測無法常規(guī)進(jìn)行。為適應(yīng)輸血醫(yī)學(xué)發(fā)展,提高新生兒血型血清學(xué)檢測的準(zhǔn)確性和臨床輸血安全性,很有必要尋找一種安全、有效的措施,解決新生兒血型和血清學(xué)檢測問題。作者嘗試了以新生兒臍帶血替代外周血用微柱凝膠技術(shù)(MGP)進(jìn)行A、B、O血型、Rh(D)血型鑒定及直接抗球蛋白試驗(yàn)的檢測探索。

1 資料與方法

1.1 一般資料 3 238例新生兒臍血均系2008年11月至2010年2月在本院產(chǎn)科足月順產(chǎn)的新生兒,其中男1 714例,女1 524例。臍血采集的方法:新生兒娩出斷臍帶后,選擇靠近兒端的臍靜脈較充盈處,常規(guī)局部消毒后,用一次性5 m L注射器穿刺抽血2m L,用EDTA抗凝并將樣本標(biāo)記好;另外,采集其中336例新生兒外周靜脈血2 m L,用EDTA抗凝,做好對照樣本標(biāo)記備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 DiaM ed單克隆新生兒凝膠血型卡(簡稱新生兒卡,Diaclon1 ABO/Rh for New borns)、DiaMed自動加樣儀、達(dá)亞美 2號稀釋液(ID-Diluent 2)、DiaMed微柱凝膠卡專用離心機(jī)等,均由瑞士DiaMed公司提供。試管法所用單克隆抗A和抗B標(biāo)準(zhǔn)血清、抗H、抗人球蛋白試劑及抗D等,由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供。A、B、O試劑紅細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室自制。其他儀器KA-2200型離心機(jī)(日本久保田研究所)等。

1.3 方法

1.3.1 微柱凝膠技術(shù) 用微柱凝膠技術(shù)(DiaM ed新生兒卡)分別對新生兒臍帶血樣和外周血樣進(jìn)行 A、B、O血型、Rh(D)血型鑒定及直接抗球蛋白試驗(yàn)。嚴(yán)格按照產(chǎn)品操作說明書操作。由自動加樣儀自動加樣,儀器加樣完畢,置卡于專用定速離心機(jī)內(nèi)離心,離心速度和時間均按廠商推薦標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行,最后通過系統(tǒng)的自動判讀裝置判讀、保存并打印結(jié)果。

1.3.2 試管法 用試管法分別對新生兒臍帶血樣和外周血樣進(jìn)行A、B、O血型、Rh(D)血型鑒定及直接抗球蛋白試驗(yàn)。按《免疫血液學(xué)》中的具體步驟操作和判讀結(jié)果[1]。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 將檢測所得的結(jié)果建立數(shù)據(jù)庫,用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié) 果

2.1 血型鑒定結(jié)果 采用傳統(tǒng)試管法和微柱凝膠技術(shù)對3 238例臍血標(biāo)本進(jìn)行 A、B、O血型及 Rh(D)血型鑒定,兩法檢測結(jié)果一致。其中 O型1 334例(41.20%),B型 889例(27.46%),A型 828例(25.57%),AB型187例(5.78%);Rh(D)陽性3 226例(99.63%),陰性11例(0.34%),表位不完全型D 1例(DⅥ,為白種人)。

2.2 新生兒出生后同時檢測臍帶血和靜脈血 對336份新生兒外周靜脈血進(jìn)行A、B、O血型和 Rh(D)血型鑒定發(fā)現(xiàn),與其臍帶血檢測結(jié)果完全吻合。其中A型139例,B型140例,O型38例,AB型19例;Rh(D)陽性336例。2.3 直接抗球蛋白試驗(yàn) 應(yīng)用微柱凝膠技術(shù)檢出陽性者141例(4.35%),用試管法檢出陽性者 117例(3.61%)。經(jīng)χ2檢驗(yàn),χ2=2.328 4,P=0.127 0,兩種檢測方法結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。用試管法只出現(xiàn)鏡下可見至±凝集的樣本,用DiaMed新生兒卡檢測則出現(xiàn)±至2+的凝集。用DiaMed新生兒卡檢測直接抗球蛋白試驗(yàn)陰性的樣本,采用試管法全部陰性。采用新生兒臍血進(jìn)行直接抗球蛋白試驗(yàn)的結(jié)果,與用同一個體外周靜脈血樣本進(jìn)行檢測的結(jié)果一致。

2.4 對141例直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性的標(biāo)本進(jìn)一步調(diào)查結(jié)果2例新生兒直接抗球蛋白試驗(yàn)強(qiáng)陽性(4+),通過血型血清學(xué)檢測,均被證實(shí)其紅細(xì)胞被來自母體的抗D所致敏;在76例母親為O型新生兒為A型者中,新生兒紅細(xì)胞放散液或紅細(xì)胞放散液和血清中均檢出IgG抗A(抗AB);在63例母親為O型新生兒為B型者中,新生兒紅細(xì)胞放散液或紅細(xì)胞放散液和血清中均有而IgG抗B(抗AB)。

3 討 論

3.1 臨床上新生兒采血樣困難問題一直困擾著廣大醫(yī)務(wù)工作者與家屬。采集新生兒股靜脈血難度大,穿刺成功率低,對新生嬰兒有傷害(抽取新生兒股靜脈血可能損傷股神經(jīng)),家屬也不愿意配合等。而臍帶血容易采集,沒有技術(shù)難度。臍血代替股靜脈血作為標(biāo)本的可靠性研究認(rèn)為,采用臍帶血與股靜脈血的診斷價(jià)值相仿,為臨床可行的方法。本研究發(fā)現(xiàn)采用容易獲得的臍帶血進(jìn)行A、B、O血型、Rh(D)血型鑒定及直接抗球蛋白試驗(yàn)與用新生兒外周靜脈血檢測結(jié)果完全一致。用臍帶血替代新生兒靜脈血進(jìn)行 A、B、O血型、Rh(D)血型鑒定及直接抗球蛋白試驗(yàn),結(jié)果準(zhǔn)確可靠,且避免了對新生兒的侵襲性操作和對新生兒的傷害,也大大減少了護(hù)理工作量,避免了不必要的醫(yī)患矛盾,值得推廣[2]。

3.2 臍帶血代替新生兒外周靜脈血進(jìn)行血型血清學(xué)檢測需要特別注意的地方:采取臍帶血的關(guān)鍵問題就是操作中避免污染。胎盤娩出后,不要擠壓,先抽血;抽血前先將臍帶牽直,清洗干凈、嚴(yán)格消毒穿刺部位,不要移動臍帶,不要讓針尖刺破穿出臍帶的膠質(zhì)層;盡量保證一次抽夠2 m L,避免反復(fù)穿刺。采集臍血位置不準(zhǔn)確,或臍靜脈穿刺失誤造成臍血中混入少量母親血液,或采樣錯誤,會造成結(jié)果不準(zhǔn)確。特別是胎兒未娩出前母血已污染產(chǎn)道者,如會陰側(cè)切術(shù)、前置胎盤流血者等,最好由助手采臍帶血。進(jìn)行 A、B、O血型、Rh(D)血型鑒定和直接抗球蛋白試驗(yàn)時,用DiaMed新生兒卡若出現(xiàn)雙相或試管法出現(xiàn)混合凝集外觀者,要警惕有異型(母血)細(xì)胞混入。輸血科工作人員對送檢可疑的新生兒臍血標(biāo)本要詳細(xì)詢問采集部位和穿刺情況,必要時采集外周靜脈血重新檢測。要正確鑒定新生兒血型,除嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程外,還應(yīng)注意新生兒血液的特點(diǎn)(如華通膠胨的干擾)、先天性疾病、感染(細(xì)菌污染產(chǎn)生的類B抗原)等情況,結(jié)合父母血型加以分析,必要時重新鑒定父母的血型,以輔助判斷孩子的血型是否符合遺傳規(guī)律,發(fā)現(xiàn)異常及時復(fù)查[3-4]。必要時用分子生物學(xué)作進(jìn)一步鑒定不失為一種有效手段[5]。本組對336例新生兒出生后同時鑒定臍帶血和靜脈血A、B、O血型、Rh(D)血型及進(jìn)行直接抗球蛋白試驗(yàn),結(jié)果完全一致。因此,只要注意避免母血的污染,用臍血替代外周血用于新生兒血型和直接抗球蛋白試驗(yàn)是可行的。

3.3 本研究通過試驗(yàn)對比發(fā)現(xiàn),與傳統(tǒng)試管法相比,以微柱凝膠技術(shù)進(jìn)行直接抗球蛋白試驗(yàn)時,靈敏度有所提高,但2種檢測方法結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。在A、B、O血型系統(tǒng)中,新生兒溶血病(hemoly tic disease of new born,HDN)的直接抗球蛋白試驗(yàn)反應(yīng)常常較弱甚至無法檢出。因此,其結(jié)果只能起參考作用。而Rh(D)血型系統(tǒng)中,HDN的直接抗球蛋白試驗(yàn)反應(yīng)較強(qiáng),陽性率高。本組對直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性的標(biāo)本進(jìn)一步調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn),141例患兒均被證實(shí)其紅細(xì)胞被來自母體的IgG抗體所致敏,這提示對新生兒直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性者應(yīng)警惕異常或危險(xiǎn)情況的存在,很有必要進(jìn)行HDN的排查。

3.4 微柱凝膠技術(shù)已被發(fā)達(dá)國家常規(guī)應(yīng)用于血型鑒定、不規(guī)則抗體檢測、交叉配血等檢測項(xiàng)目[6-8]。本研究顯示,與傳統(tǒng)試管法相比,MGP取樣量準(zhǔn)確,自動孵育和離心后直接判斷結(jié)果,人為干擾因素少。微柱凝膠技術(shù)在鑒定臍血 A、B、O、Rh(D)血型和直接抗球蛋白試驗(yàn)時結(jié)果準(zhǔn)確可靠,而且具有操作步驟化、程序化、自動化、標(biāo)準(zhǔn)化、安全性高等特點(diǎn),優(yōu)于試管法。與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]。

[1] 劉達(dá)莊.免疫血液學(xué)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,2002:128-225.

[2] 焦偉,黎海瀾.DiaM ed單克隆凝膠血型卡在臍血血型血清學(xué)中的應(yīng)用研究[J].中國臨床新醫(yī)學(xué),2009,29(9):908-910.

[3] 馬印圖,靳智春,高軍.新生兒臍血血型鑒定誤差原因分析[J].臨床誤診誤治,2002,15(5):381-382.

[4] 周湘靜,陳碧樂,謝作聽,等.37例血漿因素引起正反定型不符原因分析[J].重慶醫(yī)學(xué),2006,35(5):452-454.

[5] 翁彬,王雷萍,趙祥勝.用分子生物學(xué)技術(shù)鑒定新生兒臍血ABO疑難血型[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,15(5):35-36.

[6] Leitch K,Forrest A,M itchell R.A p relim inary trial of the Gel test for blood group serology[J].Br J Biomed Sci,1993,50:64-69.

[7] Brom ilow IM.The use o f the monoclonal antibodies for b lood typing and antibody screening by the Gel test[J].Vox Sang,1996,70:49-55.

[8] Knight RC,PoolGD.Detec tion of cell antibodies:Current and future techniques[J].Br JBiomed Sci,1995,52(4):297-305.

[9] 羅梅,陳方祥,何 靜,等.酶試驗(yàn)和微柱凝膠法在新生兒溶血病檢測中的效果比較[J].重慶醫(yī)學(xué),2007,36(24):2486-2490.