陳 立， 杜 娟， 呂曉紅

神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cell，NSCs)是一類(lèi)具有分裂潛能和自我更新能力的母細(xì)胞，并具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力，存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)多個(gè)部位。神經(jīng)干細(xì)胞的最直接應(yīng)用是利用神經(jīng)干細(xì)胞的多方向分化潛能特性，進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞的移植，以恢復(fù)宿主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常結(jié)構(gòu)和功能。由于細(xì)胞移植治療需要相當(dāng)數(shù)量的移植源。因此，如何誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向目的細(xì)胞如多巴胺能神經(jīng)元分化則是問(wèn)題的關(guān)鍵。目前研究表明，神經(jīng)干細(xì)胞擬定向分化為多巴胺能神經(jīng)元存在兩種機(jī)制，一種為內(nèi)源性機(jī)制(由神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)在基因調(diào)控)，另一種為外源性機(jī)制，即通過(guò)體外給予化學(xué)誘導(dǎo)劑或細(xì)胞因子誘導(dǎo)。本文將對(duì)能夠使神經(jīng)干細(xì)胞分化為多巴胺能神經(jīng)元的相關(guān)因子綜述如下。

1 定向分化相關(guān)因子

1．1 膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Glial cell-derived neurotrophic factor GDNF) GDNF是1993年Lin等發(fā)現(xiàn)并克隆出來(lái)的，它是一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子家族中的一員。GDNF廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的的多巴胺能神經(jīng)元區(qū)域，在腹側(cè)蒼白球、嗅結(jié)節(jié)、梨狀區(qū)等也有表達(dá)［1］。近年來(lái)，隨著神經(jīng)干細(xì)胞的大量深入研究，GDNF在其中的作用越來(lái)越重要。GDNF不僅對(duì)多巴胺能神經(jīng)元具有營(yíng)養(yǎng)、支持、保護(hù)和修復(fù)作用，而且在神經(jīng)干細(xì)胞分化為多巴胺能神經(jīng)元中也起著重要作用。Eleni等［2］在培養(yǎng)胚胎中腦來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞時(shí)加入GDNF后發(fā)現(xiàn)神經(jīng)球高度表達(dá)早期多巴胺能神經(jīng)元特異性的基因Nurrl和pitx3，沒(méi)有加入GDNF的神經(jīng)球則不表達(dá)。Yong等［3］在含有人類(lèi)神經(jīng)元祖細(xì)胞(human neural progenitor hNP)培養(yǎng)液中加入25ng/mlGDNF，培養(yǎng)21d，與對(duì)照組相比，GDNF組分化的表達(dá)TH陽(yáng)性細(xì)胞比例達(dá)50%，而沒(méi)有加入GDNF的分化比例僅為2．9%(P＜0．05)，此外還能表達(dá)多巴胺能神經(jīng)元受體 D1、D4和 D5。丁繼固等［4］在有血清條件下體外培養(yǎng)鼠胚中腦神經(jīng)干細(xì)胞，予以GDNF作誘導(dǎo)分化，結(jié)果顯示GDNF可促進(jìn)中腦神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化。此外，沈峰等［5］在體外擴(kuò)增GDNF基因，并構(gòu)建帶有綠色熒光蛋白(GFP)的表達(dá)載體PcDNA3-GDNF-GFP質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)染神經(jīng)干細(xì)胞，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后72h熒光蛋白大量表達(dá)，該研究表明GDNF基因能明顯促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分化為多巴胺神經(jīng)元的比例。研究表明，GDNF是通過(guò)其受體發(fā)揮作用的。GDNF受體是一種多成分協(xié)同受體，它是由GDNF受體＆(GFR＆)和Ret蛋白組成，GFR＆ 有4種亞型:GFR＆1、GFR＆2、GFR＆3和 GFR＆4。Ret是原癌基因表達(dá)產(chǎn)物，是受體酪氨酸激酶(Rtk)超家族成員，特異性配體與受體酪氨酸激酶結(jié)合后，激活其胞內(nèi)部分，使其通過(guò)磷酸化、變構(gòu)和易位與相應(yīng)的胞內(nèi)蛋白相結(jié)合，由不同的第二信使來(lái)傳導(dǎo)發(fā)揮作用［6］。

1．2 白細(xì)胞介素-1(Interleukin-1 IL-1) IL-1是單核細(xì)胞產(chǎn)生的多肽，腦內(nèi)的多種神經(jīng)元、血管內(nèi)皮細(xì)胞、大小膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞均可產(chǎn)生IL-1。白細(xì)胞介素1(包括IL-1α和IL-1β)作為一種重要誘導(dǎo)劑，參與神經(jīng)系統(tǒng)多巴胺能神經(jīng)元的發(fā)育，單獨(dú)或與一些細(xì)胞因子聯(lián)合使用可以誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化出較為典型的酪氨酸羥化酶陽(yáng)性神經(jīng)元，這些誘導(dǎo)的神經(jīng)元用于移植治療帕金森病的6-羥基多巴胺模型大鼠療效顯著。有研究表明，人腦海馬區(qū)的神經(jīng)纖維及大鼠大腦前皮質(zhì)、海馬、嗅球、小腦脈絡(luò)叢、下丘腦紋狀體及延髓存在高密度的IL-1受體和IL-1β。劉兵等［7］利用IL-1α誘導(dǎo)小鼠胚胎中腦神經(jīng)元干細(xì)胞，免疫組化鑒定結(jié)果顯示IL-α1能明顯提高神經(jīng)干細(xì)胞分化為多巴胺能神經(jīng)元的比例。另外，譚雪峰等［8］利用IL-1α、IL-11、LIF和GDNF聯(lián)合誘導(dǎo)人神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺神經(jīng)元分化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IL-1α具有誘導(dǎo)人神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺神經(jīng)元分化的作用，聯(lián)合應(yīng)用IL-11，LIF和GDNF對(duì)人神經(jīng)干細(xì)胞向成熟多巴胺神經(jīng)元分化具有協(xié)同作用。劉兵、戴冀斌等［9］運(yùn)用IL-1β對(duì)體外分離培養(yǎng)的小鼠胚胎中的中腦神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化，結(jié)果顯示多巴能神經(jīng)元分化比例達(dá)16%左右。此外，丁繼固等［10］也有類(lèi)似的研究。

1．3 抗壞血酸(Ascorbic Acid AA) 抗壞血酸(AA)是人體必需的水溶性維生素，缺乏會(huì)導(dǎo)致壞血病，同時(shí)作為一種誘導(dǎo)因子，AA在誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元方向分化也起著重要作用。沈岳飛等［11］利用不同濃度的AA誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化，結(jié)果顯示各濃度AA均能促進(jìn)其向多巴胺能神經(jīng)元分化。此外，對(duì)于不同來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞，AA的誘導(dǎo)作用也不同。彭超華等［12］用AA對(duì)皮質(zhì)來(lái)源與中腦來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行分化，經(jīng)誘導(dǎo)，中腦神經(jīng)干細(xì)胞在AA的作用下均可分化出TH陽(yáng)性細(xì)胞。另有研究表明，利用AA聯(lián)合GDNF誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺神經(jīng)元分化，作用更明顯，細(xì)胞形態(tài)更成熟［13］。此外，韓姝等［14］研究不同培養(yǎng)條件下神經(jīng)干細(xì)胞分化的比例，將神經(jīng)干細(xì)胞分為4組，對(duì)照組(不加任何誘導(dǎo)因子組)、抗壞血酸誘導(dǎo)組(AA組)、Wnt3a(wingless Int 3a)重組腺病毒誘導(dǎo)組(Wnt3a組)，以及Wnt3a重組腺病毒加抗壞血酸誘導(dǎo)組(Wnt3a+AA組)。結(jié)果顯示，Wnt3a組細(xì)胞中的多巴胺能神經(jīng)元前體細(xì)胞特異性標(biāo)志Nurr1表達(dá)量顯著增多，Wnt3a+AA組多巴胺能神經(jīng)元明顯多于AA組，酪氨酸羥化酶(TH)在mRNA水平上的表達(dá)是AA組的1．86倍．蛋白質(zhì)印跡及免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示，各誘導(dǎo)組均有TH的表達(dá)，Wnt3a組和AA組多巴胺能神經(jīng)元陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比例分別為(5．76±3．34)% 和(37．42 ±2．54)%，與 Wnt3a+AA 組(73．96 ±2．61)% 比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。Jaroslaw等［15］將培養(yǎng)的人中腦神經(jīng)干細(xì)胞置于低氧環(huán)境中，加入抗壞血酸及腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor BDNF)并延長(zhǎng)分化時(shí)間，結(jié)果可誘導(dǎo)出大量TH陽(yáng)性神經(jīng)元。

1．4 骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein BMP2)骨形成蛋白2(BMP2)是生長(zhǎng)因子BMPs家族的重要成員，在神經(jīng)發(fā)育的不同階段、不同部位發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。研究表明:BMP2在神經(jīng)干細(xì)胞分化中起重要作用，不同濃度的BMP2在不同發(fā)育階段，不同部位來(lái)源的神經(jīng)干細(xì)胞分化中有復(fù)雜的調(diào)控作用，BMP2誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化成不同的神經(jīng)細(xì)胞。劉勝華等［16］利用BMP2對(duì)室管膜前下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞(SVZa NSCs)進(jìn)行誘導(dǎo)，觀察其分化為酪氨酸羥化酶陽(yáng)性(TH+)神經(jīng)元的情況，同時(shí)用RT-PCR檢測(cè)DLX5 mRNA(DLX5基因?qū)儆谵D(zhuǎn)錄因子基因，主要存在于細(xì)胞核，通過(guò)誘導(dǎo)其下游基因如TH基因轉(zhuǎn)錄，使其表達(dá)嗅球中間神經(jīng)元如TH+中間神經(jīng)元的表型特征最終定向分化為嗅球中間神經(jīng)元如多巴胺神經(jīng)元)表達(dá)水平，結(jié)果顯示 BMP2組 SVZa NSCs向TH+神經(jīng)元分化的比例和DLX5 mRNA表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組，該研究表明BMP2可能通過(guò)上調(diào)DLX5表達(dá)水平從而促進(jìn)SVZa NSCs向多巴胺能神經(jīng)元分化。此外也有人研究了BMP2及星形膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液(ACM)誘導(dǎo)SVZa NSCs向多巴胺能神經(jīng)元分化的情況，結(jié)果顯示BMP2及ACM均可誘導(dǎo)成功，其中BMP2+ACM組分化比例最高，推測(cè)與星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌的多種生物活性物質(zhì)如:神經(jīng)生長(zhǎng)因子(Nerve Growth Factor NGF)、GDNF、BDNF等有關(guān)［17］。研究發(fā)現(xiàn)，BMP2的作用機(jī)制主要是與受體結(jié)合后激活Smad信號(hào)途徑，然后發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)［18，19］，而ACM中的GDNF主要是通過(guò)Ret激活酪氨酸激酶通路發(fā)揮作用［20］。還有人利用紋狀體提取液誘導(dǎo)中腦神經(jīng)干細(xì)胞分化為多巴胺能神經(jīng)元，經(jīng)紋狀體提取液誘導(dǎo)后，能夠分化出多巴胺能神經(jīng)元，分化比例達(dá)20%左右，推測(cè)與其中的細(xì)胞因子有關(guān)［21］。

1．5 Brn-4 Brn-4是POU(Pit-Oct-Unc)蛋白家族成員之一，POU同源域蛋白是一大類(lèi)含POU結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子家族。Brn-4在神經(jīng)系統(tǒng)中大量表達(dá)，可參與神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化。大量研究表明體外因子在促進(jìn)神經(jīng)元前體細(xì)胞分化過(guò)程中可上調(diào)Brn-4基因的表達(dá)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn):如果封閉Brn-4基因，導(dǎo)致分化的神經(jīng)元數(shù)顯著下降［22，23］。譚雪峰等［24］曾研究Brn-4在神經(jīng)干細(xì)胞分化為多巴胺能神經(jīng)中的作用，已知，Nurr-1(nuclear recepter related factor 1)在多巴胺神經(jīng)元的發(fā)生和發(fā)展中起著非常重要的作用，但最近的研究表明Nurr-1尚不足以使神經(jīng)干細(xì)胞分化為成熟的多巴胺神經(jīng)元，譚雪峰等聯(lián)合Nurr-1與Brn-4誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化為多巴胺能細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)單獨(dú)加入Nurr-1的培養(yǎng)液誘導(dǎo)出少量TH陽(yáng)性細(xì)胞，而聯(lián)合應(yīng)用Nurr-1與Brn-4培養(yǎng)出大量TH陽(yáng)性細(xì)胞，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．01)．。施金洪等［25］在大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液中加入 Brn-4，發(fā)現(xiàn)Brn-4在海馬神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化過(guò)程中可能發(fā)揮重要作用。

2 定向分化的神經(jīng)元在帕金森病中的應(yīng)用

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是中老年人常見(jiàn)神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，主要病理變化是和黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元缺失路易小體形成。PD的研究已有近200年的歷史，由于其病因及發(fā)病機(jī)制尚未徹底明了，治療上不能從根本上解決黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的丟失，只能通過(guò)多巴胺替代療法改善癥狀，但并不能阻止病情進(jìn)展。神經(jīng)干細(xì)胞的全能性和成體干細(xì)胞橫向分化的多潛能性為帕金森病的治療提供了新的思路和方法。移植多巴胺能神經(jīng)元替代已經(jīng)變性的神經(jīng)元，恢復(fù)黑質(zhì)紋狀體多巴胺系統(tǒng)的完整性并改善其功能，利用干細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)保護(hù)作減少多巴胺神經(jīng)元凋亡等，神經(jīng)干細(xì)胞治療可能是帕金森病眾多治療方案中一項(xiàng)非常有前途的治療措施。Yu等［26］聯(lián)合利用堿性纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子、肝磷脂及層粘連蛋白培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞，誘導(dǎo)出大量酪氨酸羥化酶陽(yáng)性神經(jīng)元，后移植到經(jīng)過(guò)6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine 6-OHDA)處理的帕金森病模型鼠，4w后移植的神經(jīng)細(xì)胞仍然存活。Mimura等［27］證實(shí)腦內(nèi)多巴胺能神經(jīng)元移植可以使帕金森動(dòng)物模型的行為學(xué)得到改善。Clare等［28］將體外培養(yǎng)的大鼠腹側(cè)中腦神經(jīng)干細(xì)胞導(dǎo)入Wnt5a基因后可有效分化為多巴胺能神經(jīng)元，并很好的表達(dá)多巴胺能神經(jīng)元的生物學(xué)特性，將其移植到帕金森大鼠的紋狀體內(nèi)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可顯著改善帕金森大鼠的行為學(xué)癥狀，更為重要的是沒(méi)有發(fā)現(xiàn)腫瘤的形成。另有研究將取自大鼠海馬的神經(jīng)干細(xì)胞導(dǎo)入神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3基因(rNSC-NT3)，經(jīng)誘導(dǎo)分化獲得大量多巴胺能神經(jīng)元，再移植到經(jīng)6-OHDA處理的的帕金森模型鼠的腹側(cè)被蓋區(qū)(ventral tegmental area，VTA)及內(nèi)側(cè)前腦束(medial forebrain bundle，MFB)，結(jié)果證實(shí)可顯著改善帕金森大鼠的行為學(xué)癥狀，該結(jié)果也表明NSC-NT3有可能成為將來(lái)治療帕金森病的潛在移植源［29］。2005年 Takagi等［30］將取自猴的胚胎干細(xì)胞中加入成纖維細(xì)胞生成因子20(fibroblast growth factor 20 FGF20)及成纖維細(xì)胞生成因子2(fibroblast growth factor 2，F(xiàn)GF2)進(jìn)行誘導(dǎo)分化，培養(yǎng)出大量多巴胺能神經(jīng)元，后移植到經(jīng) 1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(1-methyl-4-pyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP)處理的帕金森病模型猴，移植后性能鑒定試驗(yàn)(Performance Evaluation Test PET)發(fā)現(xiàn)存活的移植細(xì)胞具有多巴胺神經(jīng)元的功能，并顯著改善帕金森病模型猴的行為學(xué)癥狀。由于MPTP誘導(dǎo)產(chǎn)生的帕金森病模型非常接近人類(lèi)帕金森病，因此實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)于細(xì)胞移植應(yīng)用于臨床具有高度的預(yù)測(cè)性［31］。Michel將從神經(jīng)外科手術(shù)中獲得的皮質(zhì)及皮質(zhì)下腦組織成功分離并培養(yǎng)數(shù)月，獲得大量神經(jīng)干細(xì)胞，經(jīng)誘導(dǎo)分化，培養(yǎng)出大量多巴胺能神經(jīng)元及γ-氨基丁酸能神經(jīng)元，研究人員將其移植到帕金森病患者的大腦紋狀體內(nèi)，應(yīng)用帕金森病統(tǒng)一評(píng)分量表(Uinifid Parkinson’s Disease Rating Scale UPDRS)進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果顯示:術(shù)前服用治療帕金森藥物癥狀改善達(dá)81%，移植術(shù)后2年癥狀改善達(dá)83%，術(shù)后5年評(píng)分回歸基線。該實(shí)驗(yàn)表明移植的神經(jīng)元能長(zhǎng)時(shí)間的改善帕金森病患者的癥狀，同時(shí)也證明神經(jīng)干細(xì)胞移植治療帕金森病的前景是非常誘人的［32］。Piccini及 Lindball也有類(lèi)似研究［33，34］。

3 問(wèn)題與展望

神經(jīng)干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)疾病特別是神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病的治療帶來(lái)了新的希望，當(dāng)前神經(jīng)干細(xì)胞的發(fā)展技術(shù)日新月異，部分研究已經(jīng)應(yīng)用于臨床，NSCs移植治療PD也取得了一定的效果，隨著對(duì)NSCs研究的逐步深入，需要解決的問(wèn)題也逐漸增多。例如:如何獲得用于移植的高純度NSCs?如何把細(xì)胞導(dǎo)入人腦中某些合適的部位?如何保證移植入腦內(nèi)的NSCs只朝著目的細(xì)胞(如DA能神經(jīng)元)分化而不分化為其它神經(jīng)細(xì)胞(如神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞)?為了在最短時(shí)間內(nèi)達(dá)到治療效果，需要尋找?guī)追N不同的干細(xì)胞來(lái)源?綜上所述，神經(jīng)干細(xì)胞研究前景誘人、潛力巨大，但是干細(xì)胞技術(shù)真正應(yīng)用于臨床，還有很長(zhǎng)的一段路要走。

［1］郭雨霽，李盛芳．神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族及其受體的研究進(jìn)展［J］．神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2001，17(3):288 －294．

［2］Roussa E，Krieglstein K．GDNF promotes neuronal differentiation and dopaminergic development of mouse mesencephalic neurospheres［J］．Neurosci Lett，2004，361:52 －55．

［3］Young A，Assey KS，Sturkie CD，et al．Glial cell line-derived neurotrophic factor enhances in vitro differentiation of mid-/hindbrain neural progenitor cells to dopaminergic-like neurons［J］．J Neurosci Res，2010，88(15)3222 －3232．

［4］丁繼固，丁文杰，李 光，等．膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子體外誘導(dǎo)小鼠胚胎中腦神經(jīng)干細(xì)胞分化的研究［J］．中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2008，23(4):341 －343．

［5］沈 峰，潘慶剛，鄧東風(fēng)，等．GDNF基因轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的作用［J］．同濟(jì)大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2007，28(5):35－39．

［6］Schuchardt A，D’Agati V，Larsson-Blomberg L，et al．Defects in the kidney and enteric nervous system of mice lacking the tyrosine kinase receptor Ret［J］．Nature，1994，3670:380 －383．

［7］劉 兵，劉洪濤，彭超華，等．IL-1α誘導(dǎo)胚鼠中腦神經(jīng)干細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究［J］．長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)，2005，12(2):343－346．

［8］譚雪鋒，金國(guó)華，田美玲，等．白介素-1α及白介素-11、白血病抑制因子和膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子聯(lián)合誘導(dǎo)人神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺神經(jīng)元的分化［J］．解剖學(xué)報(bào)，2005，36(4):351－355．

［9］劉 兵，戴冀斌，彭超華，等．IL-1β誘導(dǎo)中腦神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化的研究［J］．?dāng)?shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2004，17(5):393－395．

［10］丁繼固，丁文杰，李 光，等．白細(xì)胞介素1β體外誘導(dǎo)鼠胚中腦神經(jīng)干細(xì)胞的分化［J］．中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2008，12(3):406－410．

［11］沈岳飛，陳梅玲，羅彥妮，等．抗壞血酸誘導(dǎo)新生鼠神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元的分化［J］．中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù)，2009，13(23):4411 －4416．

［12］彭超華，戴冀斌，潘伯群．抗壞血酸體外誘導(dǎo)皮質(zhì)與中腦源性神經(jīng)干細(xì)胞向TH陽(yáng)性細(xì)胞定向分化［J］．解剖學(xué)研究，2009，31(2):119－122．

［13］陳梅玲，沈岳飛，羅彥妮，等．抗壞血酸聯(lián)合膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化的研究［J］．中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2009，26(5):523－526．

［14］韓 姝，師 偉，李艷華．Wnt 3a在神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元分化過(guò)程中作用的研究［J］．生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，2006，33(10):971 －977．

［15］Maciaczyk J，Singec I，Maciaczyk D，et al．Combined use of BDNF，ascorbic acid，low oxygen，and prolonged differentiation time generates tyrosine hydroxylase-expressing neurons after long-term in vitro expansion of human fetal midbrain precursor cells［J］．Exp Neurol，2008，213:354 －362．

［16］劉勝華，周 政，楊 輝，等．BMP-2對(duì)室管膜前下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞向多巴胺神經(jīng)元分化及對(duì)DLX5表達(dá)的影響［J］．第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，31(6):480 －483．

［17］辛志成，周 政，楊 輝，等．SVZa神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為多巴胺能神經(jīng)元的實(shí)驗(yàn)研究［J］．重慶醫(yī)學(xué)，2008，37(5):481－483．

［18］Mehler MF，Mabie PC，Zhang D，et al．Bone morphogenetic protein in the nervous system［J］．Trends Neurosci，1997，20(7):309 －317．

［19］Zwijsen A，Verschueren K，Huylebroeck D．New intracellular components of bone morphogenetic protein/Smad signaling cascades［J］．FEBS Lett，2003，546(1):113 －119．

［20］Ling ZD，Potter ED，Lipton JW，et al．Differentiation of mesencephalic progenitor cells into dopaminergic neurons by cytokines［J］．Exp Neurol，1998，149(2):411 －423．

［21］余小強(qiáng)，阮懷珍，蔡文琴，等．PD大鼠紋狀體提取液誘導(dǎo)中腦神經(jīng)干細(xì)胞分化為多巴胺能神經(jīng)元的研究［J］．第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，26(1):18 －21．

［22］Shimazaki T，Arsenijevic Y，Ryan AK，et al．A role for the POU-Ⅲtranscrip-tion factor Brn-4 in the regulation of striatal neuron precursor differentiation［J］．EMBO J，1999，18:444 －456．

［23］Arsenijevic Y，Weiss S．Insulin-like growth factor-I is a differentiation factor for postmitotic CNS stem cell-derived neuronal precursors:distinct actions from those of brain-derived neurotrophic factor［J］．J Neurosci，1998，18:2118 －2128．

［24］Tan XF，Jin GH，Tian ML．The co-transduction of Nurr1 and Brn4 genes induce the differentiation of NSCs into mature dopaminergic neurons．BIT’s 3rd Annual world congress Of regenerative medicine and stem cells，2010．

［25］施金洪，田美玲，朱惠霞，等．Brn-4在大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化中的作用［J］．解剖學(xué)雜志，2007，23(4):431－435．

［26］Yu Y，Gu S，Huang H，et al．Combination of bFGF，heparin and laminin induce the generation of dopaminergic neurons from rat neural stem cells both in vitro and in vivo［J］．Neurol Sci，2007，255(1－2):81－86．

［27］Mimura T，Dezawa M，Kanno H，et al．Behavioral and histological evaluation of a focal cerebral rat model transplanted with neurons induced from bone marrow stromal cells［J］．Neuropathol Exp Neurol，2005，64(12):1108 －1117．

［28］Parish CL，Castelo-Branco G，Rawal N，et al．Wnt5a-treated midbrain neural stem cells improve dopamine cell replacement therapy in parkinsonian mice［J］．J Clin Invest，2008，118(1):149 －160．

［29］Gu S，Huang H，Bi J，et al．Combined treatment of neurotrophin-3 gene and neural stem cells is ameliorative to behavior recovery of Parkinson’s disease rat model［J］．Brain Res，2009，1257:1 －9．

［30］Takagi Y，Takahashi J，Saiki H，et al．Dopaminergic neurons generated from monkey embryonic stem cells function in a Parkinson primate model［J］．J Clin Invest，2005，115(1):102 － 109．

［31］Langston JM．The promise of stem cells in Parkinson disease［J］．JClin Invest，2005，15(1):23 －25．

［32］Michel F．Neural stem cells-derived biotherapeutics for human degenerative diso-rders:Clinical experience in Parkinson’s disease［J］．BIT’s 3rd Annual world congress of regenerative medicine and stem cells，2010．253．

［33］Piccini P，Brooks DJ，Bjorklund A，et al．Dopamine release from nigral transplants visualized in a Parkinson’s patient［J］．Nat Neurosci，1999，2(12):1137 －1140．

［34］Lindball O，Hagell P．Cell replacement therapy in human neurodegenerative disorders［J］．Clini Neurosci Res，2002，2:86 － 92．