摘要 選擇市面上常見的7種殺螨劑對(duì)鐵線蓮上二斑葉螨進(jìn)行毒力測(cè)定。利用玻片浸漬法、葉片殘毒法和盆栽毒力測(cè)定分別對(duì)二斑葉螨卵、成螨及盆栽鐵線蓮上的葉螨種群進(jìn)行了毒力測(cè)定。對(duì)卵和成螨的毒力測(cè)定結(jié)果顯示，除治效果由高到低依次為苦參堿、阿維噠螨靈、丁氟螨酯、聯(lián)肼乙螨唑、阿維乙螨唑、螺螨酯和聯(lián)苯肼酯。盆栽毒力測(cè)定顯示，各種殺螨劑的LC50值都比室內(nèi)毒力測(cè)定值有所提高。通過與其他已有研究結(jié)果比對(duì)發(fā)現(xiàn)，鐵線蓮上二斑葉螨的LC50值較高，表明在鐵線蓮上定殖的二斑葉螨對(duì)農(nóng)藥的耐受性更高。研究結(jié)果可為鐵線蓮上二斑葉螨的化學(xué)防治提供一定理論參考。

關(guān)鍵詞 鐵線蓮；二斑葉螨；殺螨劑；毒力測(cè)定

中圖分類號(hào) S436.8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2024）18-0112-06

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.18.024

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Toxicity Test of Seven Acaricides on Tetranychus urticaris on Clematis

CHEN Rui-xu，DOU Hong-qi，MING Hao-yu et al

（College of Landscape Architecture，Jiangsu Vocational College of Agriculture and Forestry，Jurong，Jiangsu 212400）

Abstract Seven acaricides were selected in the toxicity test on Tetranychus urticaris that break out on Clematis L.. Slide impregnation， leaf disk and toxicity test on pot were applied respectively for eggs， female adults and single population on plant in toxicity test. Results indicated that the order of curative effect from good to bad was matrine， abamectin+pyridaben， buflomedin， bifenazate+etoxazole， abamectin+etoxazole， spirodiclofen and bifenazate. Toxicity test on pot showed that the LC50 value were higher than that in slide impregnation and leaf disk test. Morever， the LC50 values that we obtained in this study were higher than previously reported LC50 values of T. urticaris that live on other plants which indicated that T. urticaria colonized on Clematis L. had higher tolerance to pesticides. This study would be helpful in providing theoretical basis for T. urticaria chemical control.

Key words Clematis；Tetranychus urticaris；Acaricides；Toxicity test

基金項(xiàng)目 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目“鐵線蓮二斑葉螨殺螨劑的篩選及安全性研究”（202013103-029Y）；江蘇省種業(yè)振興揭榜掛帥項(xiàng)目“江浙滬地區(qū)鐵線蓮屬優(yōu)良品種選育與推廣應(yīng)用研究”（JBGS〔2021〕092）；江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院青年扶持項(xiàng)目“MYC 轉(zhuǎn)錄因子在馬尾松誘導(dǎo)型樹脂萜類合成中的作用機(jī)制”（2020kj002）。

作者簡(jiǎn)介 陳瑞旭（1990—），女，江蘇南京人，講師，博士，從事植物與昆蟲互作及昆蟲化學(xué)生態(tài)研究。

*通信作者，教授，博士，從事鐵線蓮品種選育及推廣應(yīng)用研究。

收稿日期 2023-10-24

鐵線蓮為毛茛科（Ranunculaceae）鐵線蓮屬（Clematis L.）重要的藥用及觀賞植物。植株多為多年生藤本、木質(zhì)或草質(zhì)，花色常見紫色、藍(lán)色、粉色、黃色、白色等；瓣型包括重瓣、單瓣及半重瓣；花期可達(dá)8個(gè)月［1-2］。鐵線蓮憑借花色多種多樣、花期長(zhǎng)、花形新穎別致的特點(diǎn)被歐美庭院廣泛運(yùn)用，在我國(guó)園藝愛好者中更有“莖韌如鐵，花開如蓮”的贊美［3］。全球約有350種，其中中國(guó)140多種，云南、貴州、四川被認(rèn)為是鐵線蓮屬植物的起源地與分化中心［1］。國(guó)內(nèi)現(xiàn)有對(duì)鐵線蓮的研究集中在種質(zhì)資源的分布、遺傳分析或藥用價(jià)值挖掘等方面。實(shí)際運(yùn)用中的大多數(shù)鐵線蓮以家庭盆栽的形式出現(xiàn)在公眾視野，在園林綠化中常因?yàn)楣诜^小、利用方式有限（多為立體綠化）、園林綠化管理方式粗放等原因無法大面積推廣。

二斑葉螨（Tetranychus urticae Koch）又稱白蜘蛛、二點(diǎn)葉螨，是葉螨科Tetranychidae葉螨屬Tetranychus中食性最廣的物種，寄主植物達(dá)800余種［4］。二斑葉螨以幼螨、若螨及成螨形態(tài)刺吸寄主汁液，使其葉片失綠，光合作用下降，整個(gè)植株的生長(zhǎng)狀態(tài)和觀賞效果受到嚴(yán)重影響。鐵線蓮一般栽植在花房、陽臺(tái)或小庭園等植物密度較高、通風(fēng)性不高、溫濕度較高的小環(huán)境中，為二斑葉螨的快速繁殖及蔓延提供了理想的環(huán)境。螨害一旦暴發(fā)，傳播速度極快，最后能夠觀察到二斑葉螨在寄主上成片吐絲結(jié)網(wǎng)的景象，葉片失水并干枯脫落，最終至植株死亡。

化學(xué)防治目前仍是二斑葉螨的主要防治方式［5］，但在實(shí)際應(yīng)用中，防治工作時(shí)常進(jìn)行的不夠徹底，葉螨種群中殘存的耐藥個(gè)體又很快繁殖，產(chǎn)生具有一定抗藥性的新種群［6］。筆者擬對(duì)不同發(fā)育階段的二斑葉螨，選擇多種高效低毒農(nóng)藥制劑進(jìn)行室內(nèi)盆栽毒力測(cè)定，篩選出對(duì)卵及成蟲均有效的殺螨劑，為二斑葉螨的化學(xué)防控提供選藥依據(jù)，以期為鐵線蓮的工廠化繁育、商業(yè)推廣及景觀營(yíng)造提供可能。

1 材料與方法

1.1 供試殺螨劑

共選擇7種不同類型殺螨劑，并逐步稀釋成1 000、2 000、4 000、8 000和16 000倍液5個(gè)濃度梯度（表1）。

1.2 供試螨

二斑葉螨采自江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院花房中鐵線蓮，移至實(shí)驗(yàn)室內(nèi)［溫度（25±3） ℃，光照L∶D = 16 h∶8 h，濕度60%～70%］養(yǎng)蟲籠中以鐵線蓮盆栽為寄主進(jìn)行擴(kuò)繁備用。

1.3 二斑葉螨雌成螨毒力試驗(yàn) 采用玻片浸漬法，在聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（Food and Agriculture Organization of the United Nations，F(xiàn)AO）推薦的方法基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)。在載玻片一側(cè)貼上雙面膠段（約5 cm長(zhǎng)），準(zhǔn)備粘葉螨之前再除去襯紙。用濕潤(rùn)的極細(xì)勾線筆挑取個(gè)體大小相近、活潑的成螨，將其背部粘在雙面膠上，每片載破片上有序排布30頭。將載玻片置于生化培養(yǎng)箱中［溫度（25±1）℃，相對(duì)濕度為85%，光照L∶D = 16 h∶8 h］放置4 h后，置于體式鏡下觀察，用筆尖輕觸螨體觀察反應(yīng)，剔除死亡或不活潑個(gè)體后重新計(jì)數(shù)。處理組帶螨玻片的一端浸入7種殺螨劑不同稀釋倍數(shù)的藥液中輕輕搖動(dòng)，5 s后取出并迅速用吸水紙吸干螨體周圍多余的藥液，將玻片重新置于生化培養(yǎng)箱中。24 h后檢查結(jié)果，再次用筆尖輕觸螨體，螨足不動(dòng)者視為死亡個(gè)體。每種殺螨劑每個(gè)濃度設(shè)3組重復(fù)。對(duì)照組的帶螨玻片在清水中進(jìn)行浸漬，其余處理與處理組相同。對(duì)照組死亡率在10%以內(nèi)的試驗(yàn)記為有效試驗(yàn)。

1.4 二斑葉螨卵毒力試驗(yàn)

準(zhǔn)備含有新鮮鐵線蓮葉片的培養(yǎng)皿，用濕潤(rùn)的極細(xì)勾線筆挑取室內(nèi)培養(yǎng)的二斑葉螨雌成螨置于其中，待其產(chǎn)卵后在體式鏡下計(jì)數(shù)卵的數(shù)目。處理組中用噴瓶在距離試驗(yàn)卵所在培養(yǎng)皿30 cm高的正上方噴灑不同梯度的供試殺螨劑共1 mL，使藥液均勻地滴在二斑葉螨卵的表面（防止對(duì)其造成物理傷害）；對(duì)照組在同等條件下噴灑等量清水。噴灑后將卵置于生化培養(yǎng)箱中［溫度（25±1）℃，相對(duì)濕度為85%，光照L∶D = 16 h∶8 h］，分別在24、48及72 h后進(jìn)行鏡檢，分別記錄不同殺螨劑不同稀釋倍數(shù)下卵的發(fā)育及孵化情況。

1.5 盆栽毒力試驗(yàn)

選擇長(zhǎng)勢(shì)相近的健康鐵線蓮植株，以人工接種的方式在每株上接種二斑葉螨，置于養(yǎng)蟲籠中擴(kuò)繁14 d，14 d后每株植株上隨機(jī)選擇3枚葉片計(jì)算蟲口密度。將供試殺螨劑裝入100 mL壓力噴霧瓶中，每株供試鐵線蓮噴灑殺螨劑50 mL，24 h后在供試鐵線蓮上隨機(jī)選擇3枚葉片，鏡檢計(jì)算蟲口密度，求出蟲口減退率。

1.6 數(shù)據(jù)處理

利用SPSS（statistics products and service solutions）23計(jì)算，得出毒力回歸方程并進(jìn)行Pearson擬合優(yōu)度的卡方檢驗(yàn)。

校正死亡率=（處理死亡率-對(duì)照死亡率）/（1-對(duì)照死亡率）×100%

蟲口減退率＝（藥前螨數(shù)－藥后螨數(shù)）/藥前螨數(shù)×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 不同殺螨劑對(duì)鐵線蓮二斑葉螨成螨的毒力

在對(duì)鐵線蓮二斑葉螨成螨的毒力測(cè)定中，各殺螨劑在稀釋1 000倍時(shí)，其校正死亡率都接近100%，并隨著稀釋倍數(shù)的增加而逐漸減少。稀釋倍數(shù)在2 000倍時(shí)，校正死亡率下降不明顯，但稀釋至4 000倍時(shí)，各殺螨劑的校正死亡率都有較明顯下降，苦參堿的校正死亡率下降至65.43%。考慮到殺螨劑有效成分含量時(shí)，LC50值最高的殺螨劑為聯(lián)苯肼酯18.023 mg/L，最低為苦參堿的0.256 mg/L，前者是后者的70余倍，其余殺螨劑的LC50值由高到低依次為螺螨酯、阿維乙螨唑、聯(lián)肼乙螨唑、丁氟螨酯和阿維噠螨靈。由此可知，對(duì)鐵線蓮二斑葉螨成螨毒力最高的殺螨劑是苦參堿，其次是阿維噠螨靈、丁氟螨酯、聯(lián)肼乙螨唑、阿維乙螨唑，效果最差的是螺螨酯15.806 mg/L和聯(lián)苯肼酯18.023 mg/L（表2）。

通過對(duì)7種殺螨劑對(duì)二斑葉螨成螨的毒力回歸方程進(jìn)行Pearson擬合優(yōu)度的卡方檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，除聯(lián)肼乙螨唑外，其余方程的顯著性均≥0.05，其中以螺螨酯的毒力回歸方程擬合度最高，為0.936，其次為丁氟螨酯0.813和阿維噠螨靈0.791，數(shù)據(jù)分布與預(yù)期一致性較好，阿維乙螨唑、苦參堿和聯(lián)苯肼酯的顯著性相近，雖大于等于0.05，但擬合度偏低（表3）。

2.2 不同殺螨劑對(duì)鐵線蓮二斑葉螨卵的毒力

卵的校正死亡率結(jié)果顯示，各殺螨劑在稀釋1 000倍時(shí)，卵校正死亡率均較高，隨著稀釋倍數(shù)的增加而逐漸減少，相同處理下，卵的校正死亡率比雌成螨低。螺螨酯LC50值最高，為19.730 mg/L，苦參堿最低，為0.673 mg/L，前者是后者的29倍。其他殺螨劑的LC50值由高到低依次為聯(lián)苯肼酯、聯(lián)肼乙螨唑、丁氟螨酯、阿維乙螨唑、阿維噠螨靈。由此可知，對(duì)鐵線蓮卵殺滅效果最好的是苦參堿，其次是阿維噠螨靈，阿維乙螨唑、丁氟螨

酯、聯(lián)肼乙螨唑三者毒力接近，效果最差的是螺螨酯19.730 mg/L和聯(lián)苯肼酯15.674 mg/L（表4）。

對(duì)7種殺螨劑對(duì)二斑葉螨卵的毒力回歸方程進(jìn)行Pearson擬合優(yōu)度的卡方檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，所有方程顯著性均≥0.05，實(shí)際數(shù)據(jù)分布情況與預(yù)期一致。其中以螺螨酯的毒力回歸方程擬合度最高，顯著性值0.992，其次為丁氟螨酯0.967和阿維乙螨唑0.946（表5）。

2.3 7種藥劑對(duì)鐵線蓮盆栽上二斑葉螨種群的毒力

模擬自然環(huán)境，在對(duì)鐵線蓮盆栽上二斑葉螨種群的毒力測(cè)定中，噴灑1 000倍濃度稀釋的聯(lián)苯肼酯的植株上的蟲口減退率高達(dá)100%，同種情況下的阿維乙螨唑和阿維噠螨靈接近95%，聯(lián)肼乙螨唑達(dá)90.5%，苦參堿植株上的蟲口減退率最低為83.3%。蟲口減退率隨著殺螨劑稀釋倍數(shù)的增加而降低。螺螨酯為L(zhǎng)C50值最高的殺螨劑，為63.544 mg/L，最低為苦參堿1.297 mg/L，前者是后者的約49倍，余下殺螨劑的LC50值由高到低依次為聯(lián)苯肼酯、聯(lián)肼乙螨唑、阿維乙螨唑、丁氟螨酯和阿維噠螨靈。毒力測(cè)定中效果最好的是苦參堿，依次是阿維噠螨靈、阿維乙螨唑、丁氟螨酯、聯(lián)肼乙螨唑、聯(lián)苯肼酯，最差的是螺螨酯（表6）。

對(duì)毒力回歸方程進(jìn)行Pearson擬合優(yōu)度的卡方檢驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)，所有方程的顯著性均≥0.05，表明實(shí)際數(shù)據(jù)分布與擬合預(yù)期匹配度較好，其中以聯(lián)肼乙螨唑的毒力回歸方程擬合度最高，為0.997，其次為丁氟螨酯、螺螨酯、阿維噠螨靈、阿維乙螨唑、聯(lián)苯肼酯和苦參堿。與對(duì)雌成螨和卵的毒力測(cè)定卡方結(jié)果相比，盆栽試驗(yàn)條件下的毒力測(cè)定擬合度更高（表7）。

3 結(jié)論與討論

目前世界各大農(nóng)藥公司開發(fā)的和在開發(fā)中的具有新化學(xué)結(jié)構(gòu)的殺蟲殺螨劑主要有魚尼丁受體類、季酮酸類、丙烯腈類、氨基脲類等，其作用機(jī)制包括生長(zhǎng)調(diào)節(jié)、呼吸毒性和神經(jīng)毒性等［7］。該研究選擇7種不同類別的殺螨劑，包括植物源殺螨劑苦參堿，單一化學(xué)制劑的聯(lián)苯肼酯、丁氟螨酯和螺螨酯，生物-化學(xué)復(fù)配型的阿維噠螨靈和阿維乙螨唑以及化學(xué)復(fù)配型的聯(lián)肼乙螨唑進(jìn)行毒力測(cè)定，找出對(duì)鐵線蓮上二斑葉螨效果較好的殺螨劑及其合適濃度，以期發(fā)揮最大防效，延緩二斑葉螨抗藥性的產(chǎn)生和發(fā)展。

根據(jù)LC50值來看，與其他所有農(nóng)藥相比，無論是對(duì)卵、成螨還是模擬室外條件下，苦參堿水劑的毒性最高，但其1 000倍稀釋液的校正死亡率未達(dá)100%，說明0.5%的水劑稀釋1 000倍后毒性不足以百分百致死，因此在實(shí)際使用中，可適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)，或購(gòu)買有效成分含量更高的制劑，市面常見有效含量在0.3%～2.0%，電商平臺(tái)的售價(jià)約在100元/kg，相比于其他殺螨劑而言，性價(jià)比較高?？鄥A已有在蘋果紅蜘蛛上的防治案例，但值得注意的是，苦參堿對(duì)蠶、蜜蜂及魚類有毒性，施用時(shí)需注意周圍環(huán)境，避免噴霧及殘留物對(duì)生態(tài)造成影響［8］。LC50值僅次于苦參堿的殺螨劑是阿維噠螨靈。阿維噠螨靈的商品標(biāo)簽上標(biāo)注對(duì)紅蜘蛛的推薦使用濃度為1 500～2 000倍液，但在該研究中，其1 000倍稀釋劑的校正死亡率均未達(dá)100%，據(jù)此，在對(duì)二斑葉螨的防治時(shí)，應(yīng)適當(dāng)減少稀釋倍數(shù)或選擇有效成分含量更高的制劑，以提高防治效果，防止耐藥性較高的個(gè)體存留。同樣以阿維菌素作為復(fù)配搭配的阿維乙螨唑在對(duì)卵和模擬自然環(huán)境下的處理中表現(xiàn)較好，但在對(duì)雌成螨的處理中毒力表現(xiàn)略差于丁氟螨酯，但其處理下的雌成螨校正死亡率達(dá)100%，說明在1 000倍稀釋下，對(duì)卵和處于自然狀態(tài)下的種群滅殺效果不足，可適當(dāng)降低稀釋倍數(shù)或選擇更高倍數(shù)的制劑。阿維菌素與苦參堿同屬生物制劑，但研究表明，二斑葉螨對(duì)阿維菌素的抗藥性尤其明顯，有些地區(qū)的種群對(duì)阿維菌素的抗藥性可達(dá)上千倍［9］，所以不推薦單純以阿維菌素作為殺螨劑進(jìn)行使用。噠螨靈和乙螨唑同屬于含雜環(huán)的殺蟲劑，不能與堿性藥劑混合使用，噠螨靈通過抑制呼吸作用對(duì)葉螨起毒殺作用，對(duì)任何發(fā)育階段均有防治效果；乙螨唑則是通過抑制幼蟲蛻皮，致使雌性不育和胚胎發(fā)育停止等方式進(jìn)行防治，速殺效果較差［9］。綜合看來，阿維噠螨靈要比阿維乙螨唑適用范圍廣，除治效果好，且價(jià)格便宜，適合推廣使用，但選擇時(shí)可考慮噠螨靈比例較高的制劑。螺螨酯同屬含雜環(huán)的殺蟲劑，其作用機(jī)制是阻止害螨的能量供應(yīng)，理論上對(duì)卵和若螨的防治效果較好，在該研究中，螺螨酯1 000倍稀釋液的校正死亡率達(dá)80%以上，LC50值與其他殺螨劑相比雖然不理想，但相比趙秋宇［11］的螺螨酯對(duì)草莓二斑葉螨的LC50值低，說明鐵線蓮上的二斑葉螨種群對(duì)螺螨酯尚未形成抗藥性，考慮到螺螨酯持效性長(zhǎng)的特點(diǎn)［10］，可將螺螨酯與其他急性毒力較高的制劑合理搭配，以達(dá)到長(zhǎng)期控制的效果。聯(lián)苯肼酯屬于氨基甲酸酯類農(nóng)藥，雖對(duì)各發(fā)育階段都有一定效果，但致死成螨所需時(shí)間長(zhǎng)，在該研究中，聯(lián)苯肼酯和聯(lián)苯肼酯與乙螨唑的1 000～2 000倍液對(duì)成螨的除殺效果都可達(dá)100%，但單純聯(lián)苯肼酯的LC50值幾乎比聯(lián)苯肼酯與乙螨唑的LC50值高一倍，說明乙螨唑的毒力比聯(lián)苯肼酯高，且復(fù)配制劑的價(jià)格較低，因此純聯(lián)苯肼酯制劑的實(shí)際應(yīng)用潛力不高。

在前期有關(guān)二斑葉螨的報(bào)道中，單獨(dú)的阿維菌素和單獨(dú)的噠螨靈對(duì)菜豆和花生上的葉螨防治效果較好，但其LC50低于該研究中復(fù)合殺螨劑阿維噠螨靈的LC50值，對(duì)花生上二斑葉螨的毒力測(cè)定中，乙螨唑?qū)Υ瞥沈腖C50為6 mg/L，阿維菌素為0.044 6 mg/L，但阿維乙螨唑在該試驗(yàn)中LC50僅為10.2 mg/L［12-13］。可見，鐵線蓮上的二斑葉螨對(duì)農(nóng)藥的耐受性要比其他植物上的二斑葉螨耐受度稍高，這可能與鐵線蓮植株中豐富的次生代謝物的含量有關(guān)［14］，以鐵線蓮為寄主植物的二斑葉螨在長(zhǎng)期的選擇壓力下，解毒系統(tǒng)更加發(fā)達(dá)，對(duì)農(nóng)藥的耐受性有所提高。

綜上所述，在鐵線蓮二斑葉螨的防治中，苦參堿、阿維噠螨靈均為較理想的防治鐵線蓮二斑葉螨的殺螨劑，為防止二斑葉螨產(chǎn)生耐藥性，可將二者交替使用，但使用時(shí)需注意藥劑的稀釋濃度及使用環(huán)境，避免對(duì)生態(tài)環(huán)境造成影響。此外，根據(jù)筆者實(shí)踐，只要是正規(guī)廠家生產(chǎn)的殺螨劑，在有效成分及其含量相同的情況下，效果相近，但有時(shí)價(jià)格差異較大，采購(gòu)時(shí)不必過于追求廠家品牌。

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