摘要：【目的】探究飼料中添加不同水平的黃芪多糖對(duì)黃喉擬水龜（Mauremys mutica）生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響，以期為黃芪多糖在黃喉擬水龜飼料中的應(yīng)用及黃喉擬水龜?shù)慕】叼B(yǎng)殖提供理論依據(jù)?！痉椒ā繉⒊跏计骄w重為128.36±1.80 g的黃喉擬水龜隨機(jī)分為5組，分別投喂黃芪多糖含量為0（M0，對(duì)照組）、0.25%（M25）、0.50%（M50）、0.75%（M75）和1.00%（M100）的等氮等脂飼料，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每重復(fù)10只龜，投喂60 d后測(cè)定其生長(zhǎng)性能指標(biāo)和血清生化指標(biāo)，以高通量測(cè)序分析腸道菌群結(jié)構(gòu)?！窘Y(jié)果】生長(zhǎng)性能分析結(jié)果顯示，M25、M50和M75組的黃喉擬水龜?shù)脑鲋芈屎吞囟ㄉL(zhǎng)率顯著高于MO組（Plt;0.05，下同），飼料系數(shù)顯著低于MO組，其中M50組的增重率和特定生長(zhǎng)率最高、飼料系數(shù)最低。M25、M50、M75和M100組黃喉擬水龜背甲長(zhǎng)、背甲寬和背甲高的日增長(zhǎng)與M0組比較均無顯著差異（Pgt;0.05，下同）。血清生化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示，M25、M50和M75組的堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性顯著高于M0組，M50、M75和M100組的過氧化氫酶活性顯著高于MO組；M25、M50和M75組的丙二醛含量顯著降低。腸道菌群分析結(jié)果顯示，M25組群落豐富度指數(shù)（Sobs指數(shù)和ACE指數(shù)）顯著高于M0組，群落多樣性指數(shù)（Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)）與MO組無顯著差異。M50、M75和M100組的Sobs指數(shù)、Chaol指數(shù)、ACE指數(shù)、Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)與M0組差異均不顯著。在門分類水平上，各組豐度占比排名前3的菌群均為厚壁菌門、擬桿菌門和變形菌門，0.25%～1.00%的黃芪多糖對(duì)門分類水平的腸道菌群組成無顯著影響。在屬分類水平上，M50組的瘤胃球菌屬1和M75組的漢氏鹽單胞菌屬相對(duì)豐度顯著提高；添加0.25%和1.00%的黃芪多糖對(duì)屬分類水平的腸道菌群組成均無顯著影響。【結(jié)論】飼料中添加適量的黃芪多糖能有效地促進(jìn)黃喉擬水龜生長(zhǎng)、提高抗氧化能力并改善腸道菌群結(jié)構(gòu)。綜合分析，建議飼料中黃芪多糖添加量為0.50%。

關(guān)鍵詞：黃芪多糖；黃喉擬水龜；生長(zhǎng)性能；血清生化指標(biāo)；腸道菌群結(jié)構(gòu)

中圖分類號(hào)：S966.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：2095-1191（2024）02-0388-09

Effects of Astragalus polysaccharides on growth performance，serum biochemical indexes and intestinal flora structure of Mauremys mutica

WU Zhi-gang'，ZHANG Hong-yao1，GAO Ming-zuo1，YAN Zi-ke1，TAN Wen-yu1，HAN Shu-yu2，SHI Jin-gu2，HUANG De-sheng3，LIANG Jing-zhen1*，HUANG Jun1*

（'College of Animal Science and Technology，Guangxi University/GuangxiLaboratory of Aquatic Animal Disease Dia-gnosis/GuangxiUniversity Key Laboratory of Aquatic Healthy Breeding and Nutrition Regulation，Nanning，Guangxi

530004，China;2Guangxi Station of Aquaculture Technology Extension，Nanning，Guangxi 530022，China;3Hepu Station of Aquaculture Technology Extension，Beihai，Guangxi 536199，China）

Abstract：[Objective]To investigate the effectsof different levels of Astragalus polysaccharides on the growth perfor-mance，serum biochemical indexes and intestinal flora structure of Mauremysmutica，with aview to providing theoretical basis for the application of Astragalus polysaccharides in the diets of M.mutica and the healthy breeding of M.mutica.【Method]M.mutica with an initial average body weight of 128.36±1.80 g were randomly divided into five groups，and fed isonitrogenous and isofat diets containing 0（M0），0.25%（M25），0.50%（M50），0.75%（M75），and 1.00%（M100）Asragalus polysaccharides，with three replicates of 10M.mutica in each group.After feeding for 60 d，the growth perfor-mance indexes and serum biochemical indexes were measured，and the structure of intestinal flora was analyzed by high- throughput sequencing.[Result]The results of growth performance analysis showed that the weight gain rateand specific growth rate of M.mutica in the M25，M50 and M75 groups were significantly higher than those in the M0 group（Plt;0.05，thesame below），and the feed coefficients were significantly lowerthan those in the M0 group，among which the M50 group had the highest weight gain rate and specific growth rate，and the lowest feed coefficient，and the daily growth rates of the dorsal carapace length，dorsal carapace width and dorsal carapace height of M.mutica in the M25，M50，M75 and M100 groups had no significant difference from those of the M0 group（Pgt;0.05，the same below）.The results of serum biochemical indexes showed that the activities of alkaline phosphatase and superoxide dismutase in M25，M50 and M75 groups were significantly higher than that of M0 group，and the activities of catalase in M 50，M75 and M100 groups were significantly higher than that of M0 group;and the contents of malondialdehyde in M25，M50 and M75 groups were significantly lower.The results of intestinal flora analysis showed that the community richness indexes（Sobs index andACE index）were significantly higher in M25 group than in M0 group，and the community diversity in-dexes（Shannon index and Simpson index）were not significantly different from those of MO group.The differences of Sobs index，Chaol index，ACE index，Shannon index and Simpson index were not significantly different from those of M0 group in M50，M75 and M100 groups.Atthe phylum level，the top 3 groups in terms of relative abundance were Fir-micutes，Bacteroidetes and Proteobacteria，and 0.25%-1.00%of Astragalus polysaccharides did not significantly affect the composition of intestinal flora at the phylum level.At the genus level，the relative abundanceof Ruminococcus 1 in the M50 group and Halomonas in the M75 group increased significantly;the addition of 0.25%and 1.00%of Astragalus polysaccharide had no significant effect on the composition of intestinal flora at the genus level.【Conclusion]Addition of appropriate amount of Astragalus polysaccharide to feedcan effectively promote the growth of M.mutica，improve anti-oxidant capacity and improve the structure of intestinal flora.It is recommended to add 0.50%of Astragalus polysacha-ride to the feed.

Key words：Astragalus polysaccharide;Mauremysmutica;growth performance;serum biochemical indicators;in-testinal flora structure

Foundation items：National Natural Sciences Foundation of China（202100475）;Guangxi Natural Science Founda-tion（2018GXNSFAA138167）

0引言

【研究意義】黃喉擬水龜（Mauremysmutica）又名石龜、黃板龜?shù)?，隸屬于爬行綱（Reptilia）龜鱉目（Chellonia）地龜科（Geoemydidae）擬水龜屬（Mau-remys），主要分布于廣西、廣東及海南等地，具有較高的食用和藥用價(jià)值（牟超盛等，2021），在我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中占有重要地位。但目前黃喉擬水龜?shù)母呙芏瑞B(yǎng)殖模式易導(dǎo)致病害肆虐，養(yǎng)殖戶通常濫用或亂用抗生素，從而引起細(xì)菌耐藥和食品安全問題（陳笑冰等，2022;魏華等，2023）。研究表明，許多中藥提取物能通過增強(qiáng)動(dòng)物免疫力來降低發(fā)病率，可作為潛在的免疫增強(qiáng)劑（譚曉晨等，2022;佟延南等，2022;吳俊等，2022）。黃芪多糖（Astragalus polysac-charides）通過黃芪酒精過濾和沉淀提取而得，其組成成分有葡萄糖、阿拉伯糖等，具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化和改善腸道結(jié)構(gòu)等生物學(xué)功能（向梟等，2011;Nejatian et al.，2013;王煜恒等，2018;張杰等，2022;向靜，2023），毒副作用較低且不易產(chǎn)生耐藥性（蔡巖，2017）。因此，研究黃芪多糖對(duì)黃喉擬水龜生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響，對(duì)提高黃喉擬水龜機(jī)體抗病力以確保其健康養(yǎng)殖和有效病害防控具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前已有較多關(guān)于黃芪多糖在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物中應(yīng)用的報(bào)道。

在齊口裂腹魚（Schizothorax prenanti）飼料中添加黃芪多糖能明顯促進(jìn)其生長(zhǎng)速度及免疫能力（向梟等，2011）;在草魚（Ctenopharyngodon idellus）的飼料中添加一定水平的黃芪多糖可提高草魚的免疫力和對(duì)嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）感染的抵抗力（劉春花等，2017）;在中華鱉（Pelodiscus sinensis）飼料中添加黃芪多糖能顯著增強(qiáng)中華鱉抵抗嗜水氣單胞菌的能力（楊移斌等，2018）;在雜交鱧（Channamaculata Q×C.argusd）飼料中添加一定量的黃芪多糖能促進(jìn)其生長(zhǎng)速度、消化能力及免疫力（王煜恒等，2018）;在淇河鯽（Carassius auratus）飼料中添加黃芪多糖可促進(jìn)淇河鯽生長(zhǎng)，增強(qiáng)其抗氧化能力和抵御細(xì)菌感染的抗病力（張杰等，2022）;在吉富羅非魚（Oreochromis niloticus）飼料中添加適量的黃芪多糖可提高其生長(zhǎng)性能、免疫力及對(duì)無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）的抵抗力（楊政高等，2023）;在黃鱔（Monopterus albus）飼料中添加黃芪多糖有利于增加黃鱔腸道菌群的多樣性和豐富度，優(yōu)化腸道菌群結(jié)構(gòu)（向靜，2023）;在長(zhǎng)江鱘幼魚（Acipenser dabryanus）飼料中添加適量的黃芪多糖對(duì)幼魚抗應(yīng)激能力和腸道消化酶功能等有強(qiáng)化作用（張建明等，2023）。【本研究切入點(diǎn)】黃芪多糖對(duì)多種水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物有促進(jìn)生長(zhǎng)、提高抵抗力和抗氧化能力及優(yōu)化腸道菌群等作用，但關(guān)于黃芪多糖對(duì)黃喉擬水龜生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及腸道菌群影響的研究尚未見報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】通過在黃喉擬水龜飼料中添加不同水平的黃芪多糖，探究其對(duì)黃喉擬水龜生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)及腸道菌群的影響，以期為黃芪多糖在黃喉擬水龜飼料中的應(yīng)用及黃喉擬水龜?shù)慕】叼B(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用黃喉擬水龜購于南寧市碧艷龜鱉經(jīng)營(yíng)部。黃芪多糖（產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)Q/RJSK036-2019）購于河南省駐馬店市確山縣富博商貿(mào)有限公司，其有效含量不低于70%?；A(chǔ)飼料（產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)Q/QX004-2023）購于廣東省佛山市順德區(qū)全興水產(chǎn)飼料有限公司，其產(chǎn)品分析保證值為粗蛋白≥45.0%、粗脂肪≥3.0%、粗纖維≤3.0%、粗灰分≤16.0%、總磷≥0.8%、水分≤12.0%、賴氨酸≥2.0%。將基礎(chǔ)飼料和黃芪多糖按比例進(jìn)行稱重和混合，加入適量的蒸餾水，再用直徑2.5mm的擠壓膨化機(jī)進(jìn)行制粒，隨后放入烘箱烘干后取出，制成黃芪多糖含量分別為0、0.25%、0.50%、0.75%和1.00%的等氮等脂沉性飼料，置于-20℃冰箱儲(chǔ)存。

1.2試驗(yàn)方法

飼養(yǎng)試驗(yàn)在廣西大學(xué)水產(chǎn)教學(xué)科研基地進(jìn)行。養(yǎng)龜箱為塑料材質(zhì)（長(zhǎng)×寬×高為70 cm×45 cm×18 cm）。試驗(yàn)龜入箱前暫養(yǎng)7d，暫養(yǎng)結(jié)束后，將龜禁食24 h，選取健康無傷病、活力強(qiáng)、規(guī)格相近的黃喉擬水龜150只用于試驗(yàn)，其初始平均體重為128.36±1.80 g。將挑選好的150只黃喉擬水龜隨機(jī)分5組，分別命名為M0、M25、M50、M75和M100組，按體重的3%進(jìn)行飽食投喂，每2天投喂1次；其中M0組投喂不含黃芪多糖的基礎(chǔ)飼料（對(duì)照組），M25、M50、M75和M1004個(gè)試驗(yàn)組分別投喂含0.25%、0.50%、0.75%和1.00%黃芪多糖的試驗(yàn)飼料。每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每重復(fù)10只龜，喂食1h后清理殘餌及污物，觀察黃喉擬水龜?shù)纳鼱顩r，記錄其死亡個(gè)數(shù)，養(yǎng)殖試驗(yàn)共60 d。養(yǎng)龜箱中水溫保持在25～30℃。動(dòng)物試驗(yàn)已由廣西大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)為GXU-2024-013。

1.3樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束后，將黃喉擬水龜禁食1d，同時(shí)對(duì)其稱重并記錄終末體重，用游標(biāo)卡尺測(cè)量其背甲長(zhǎng)、背甲寬和背甲高。每組隨機(jī)挑選6只黃喉擬水龜進(jìn)行低溫麻醉后，用無菌注射器在頸動(dòng)脈取血，將采集的血樣置于4℃冰箱靜置5h，然后進(jìn)行離心收集血清，-80℃冰箱保存，用于血清生化指標(biāo)分析；解剖后取腸道內(nèi)容物，用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌后轉(zhuǎn)移至2 mL凍存管，-80℃冰箱保存，用于腸道菌群分析。

1.4測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定測(cè)定試驗(yàn)龜?shù)脑鲋芈剩╓eight gain ratio，WGR）、特定生長(zhǎng)率（Specific growth ratio，GR）、成活率（Survival rate，SR）和飼料系數(shù)（Feed conversion ratio，F(xiàn)CR），計(jì)算公式如下：

WGR（%）=（試驗(yàn)龜終末體重-試驗(yàn)龜初始體重）/試驗(yàn)龜初始體重×100

SGR（%/d）=[In（試驗(yàn)龜終末體重）-In（試驗(yàn)龜初始體重）]/試驗(yàn)天數(shù)×100

SR（%）=試驗(yàn)終末龜只數(shù)/試驗(yàn)初始龜只數(shù)×100

FCR=攝食飼料重量/（試驗(yàn)龜終末體重-試驗(yàn)龜初始體重）

1.4.2血清生化指標(biāo)測(cè)定丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、堿性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、過氧化氫酶（CAT）活性測(cè)定試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。各指標(biāo)測(cè)定均按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4.3腸道菌群測(cè)定從-80℃冰箱取出黃喉擬水龜腸道內(nèi)容物樣品并置于冰上融化，按照DNA提取試劑盒提取腸道微生物總DNA。PCR擴(kuò)增細(xì)菌16S rRNA序列V3和V4區(qū)，構(gòu)建腸道菌群DNA文庫。使用Qubit Fluorometer熒光定量?jī)x（美國(guó)Thermo-Fisher公司）檢測(cè)文庫DNA質(zhì)量濃度，使用Qseq100 DNA分析儀檢測(cè)文庫DNA長(zhǎng)度分布，對(duì)文庫DNA的摩爾濃度進(jìn)行定量（KAPA文庫定量試劑盒），作為文庫混合標(biāo)準(zhǔn)。將文庫進(jìn)行混合和變性，利用Illumina NovaSeq 6000測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行雙末端測(cè)序，將得到的成對(duì)序列進(jìn)行拼接，使用Cutadapt去除序列中的引物、低質(zhì)量序列、含有N堿基的序列及長(zhǎng)度小于100 bp的序列，最后得到有效數(shù)據(jù)（Clean data）。將相似度大于97%的序列聚為同一個(gè)操作分類單元（Operational taxonomic unit，OTU），通過Mothur的classify.seqs命令，將OTU序列相似度最高且可信度達(dá)80%以上的物種信息用于OTU注釋。采用群落豐富度指數(shù)（Sobs指數(shù)、Chaol指數(shù)和ACE指數(shù)）和群落多樣性指數(shù)（Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)）對(duì)腸道菌群進(jìn)行Alpha多樣性分析。使用R語言工具繪制Venn圖和群落結(jié)構(gòu)柱狀圖。

1.5統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以Excel 2019和SPSS 26.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分析法（One-way ANOVA）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，差異顯著則以Duncan's法進(jìn)行多重比較。

2結(jié)果與分析

2.1黃芪多糖對(duì)黃喉擬水龜生長(zhǎng)性能的影響

由表1可知，隨著黃芪多糖添加量的逐漸增加，試驗(yàn)龜?shù)脑鲋芈屎吞囟ㄉL(zhǎng)率均呈先升高后降低的變化趨勢(shì)，飼料系數(shù)則先降低后升高。相比M0組，M25、M50和M75組的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著提高（Plt;0.05，下同），飼料系數(shù)顯著降低，其中M50組的增重率和特定生長(zhǎng)率最高、飼料系數(shù)最低；M25和M75組的增重率、特定生長(zhǎng)率及飼料系數(shù)差異均不顯著（Pgt;0.05，下同）。M25、M50和M75組的成活率與M0組差異不顯著，M100組的增重率、特定生長(zhǎng)率、成活率和飼料系數(shù)與M0組均無顯著差異。該結(jié)果表明在基礎(chǔ)飼料中添加0.25%～0.75%的黃芪多糖可有效提高黃喉擬水龜?shù)纳L(zhǎng)性能，其中當(dāng)黃芪多糖添加量為0.50%時(shí)的促生長(zhǎng)效果最明顯。

由表2可知，M25、M50、M75和M100組黃喉擬水龜?shù)谋臣组L(zhǎng)、背甲寬和背甲高的日增長(zhǎng)與M0組比較均無顯著差異。該結(jié)果表明在基礎(chǔ)飼料中添加黃芪多糖對(duì)黃喉擬水龜背甲長(zhǎng)、背甲寬和背甲高的日增長(zhǎng)無顯著影響。

2.2黃芪多糖對(duì)黃喉擬水龜血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，隨著黃芪多糖添加量的逐漸增加，試驗(yàn)龜?shù)腁KP和SOD活性先升高后降低，MDA含量先降低后升高；相比M0組，M25、M50和M75組的AKP和SOD活性顯著增加，其中M50組的AKP和SOD活性最高；M25、M50和M75組MDA含量顯著降低；M50、M75和M100組CAT活性顯著高于M0和M25組；M25、M50、M75和M 100組ACP活性與M0組差異均不顯著。該結(jié)果表明在飼料中添加0.25%的黃芪多糖可顯著增加黃喉擬水龜血清的AKP和SOD活性，降低MDA含量；添加0.50%和0.75%的黃芪多糖可顯著增加AKP、SOD和CAT活性，降低MDA含量；添加1.00%的黃芪多糖可顯著增加CAT活性。

2.3黃芪多糖對(duì)黃喉擬水龜腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

2.3.1 OTUs數(shù)量比較OTUs數(shù)量對(duì)比韋恩圖（圖1）顯示，5個(gè)組的腸道菌群微生物OTUs總數(shù)為10321種，共有種類為2822種，M0、M25、M50、M75和M100組的OTUs數(shù)量及其占比分別為5507種（53.36%）、6825種（66.13%）、6242種（60.48%）、6223種（60.29%）和6403種（62.04%）;特有OTUs數(shù)量及其占比分別為358種（3.47%）、714種（6.92%）、537種（5.20%）、520種（5.04%）和520種（5.04%）。

2.3.2 Alpha多樣性分析Alpha多樣性指數(shù)分析結(jié)果（表4）顯示，5個(gè)組的覆蓋度在96.41%～97.53%，表明測(cè)序量充足，可反映黃喉擬水龜腸道菌群的真實(shí)情況。M25組的Sobs指數(shù)和ACE指數(shù)顯著高于M0組，Chaol指數(shù)、Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)與M0組差異均不顯著。M50、M75和M100組的Sobs指數(shù)、Chaol指數(shù)、ACE指數(shù)、Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)與M0組差異均不顯著。該結(jié)果表明，在飼料中添加0.25%的黃芪多糖可提高腸道菌群的群落豐富度。

2.3.3腸道菌群組成分析門分類水平的腸道菌群組成（圖2）顯示，5個(gè)組共檢測(cè)出19個(gè)門，各組中相對(duì)豐度占比前3的細(xì)菌門均為厚壁菌門（Fir-micutes）、擬桿菌門（Bacteroidetes）和變形菌門（Pro-teobacteria），其豐度依次為M0組50.38%、41.84%和6.37%，M25組45.42%、44.78%和8.34%，M50組49.50%、38.65%和10.44%，M75組52.17%、33.84%和11.26%，M100組49.87%、38.81%和6.97%，各組中這3個(gè)細(xì)菌門豐度之和均超過95%。單因素方差分析結(jié)果表明，在飼料中添加0.25%～1.00%的黃芪多糖對(duì)門分類水平的腸道菌群組成無顯著影響。

屬分類水平的腸道菌群組成（圖3）顯示，5個(gè)組相對(duì)豐度排前15的菌屬包括毛螺菌科未分類屬（Lachnospiraceae unclassified）、擬桿菌屬（Bacteroi-des）、瘤胃球菌科未分類屬（Ruminococcaceae unclas-sified）、普雷沃氏菌科未分類屬（Prevotellaceaeunclas-sified）、漢氏鹽單胞菌屬（Halomonas）、擬桿菌科未分類屬（Bacteroidales unclassified）、Muribaculaceaege屬、狹義梭菌屬1（Clostridium sensu stricto 1）、瘤胃球菌屬1（Ruminococcus 1）、Muribaculaceae科未分類屬（Muribaculaceae unclassified）、梭菌目未分類屬（Clostridiales unclassified）、羅姆布茨菌屬（Rombout-sia）、瘤胃梭菌屬6（Ruminiclostridium 6）、埃希氏菌-志賀氏菌屬（Escherichia Shigella）、副擬桿菌屬（Para-bacteroides）。單因素方差分析結(jié)果顯示，M50組瘤胃球菌屬1豐度（5.80%）顯著高于M0組（0.45%），M75組漢氏鹽單胞菌屬豐度（9.89%）顯著高于M0組（4.68%）。該結(jié)果表明，在飼料中添加0.50%的黃芪多糖可顯著提高瘤胃球菌屬1豐度；添加0.75%的黃芪多糖可顯著提高漢氏鹽單胞菌屬豐度；添加0.25%和1.00%的黃芪多糖對(duì)屬分類水平的腸道菌群組成無顯著影響。

3討論

3.1黃芪多糖對(duì)黃喉擬水龜生長(zhǎng)性能的影響

中藥對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物具有誘食性（張艷秋和詹勇，2005），黃芪常被用作促生長(zhǎng)的水產(chǎn)飼料添加劑（李春靜等，2019）。從黃芪根莖提取的黃芪多糖可增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物將營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)的能力，提高水產(chǎn)動(dòng)物消化酶活性及抗微生物能力，從而促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)（李宏全等，2008;張建明等，2023）。本研究中，隨著黃芪多糖添加量的逐漸增加，試驗(yàn)龜?shù)娘暳舷禂?shù)先降低后升高，當(dāng)黃芪多糖添加量為0.50%時(shí)飼料系數(shù)達(dá)最低，當(dāng)添加量增至0.75%時(shí)飼料系數(shù)有所上升但仍顯著低于M0組，飼料系數(shù)變化趨勢(shì)與前人對(duì)銀鯽（Carassius auratus gibelio）（王永玲和蔡春芳，2002）、齊口裂腹魚（向梟等，2011）等的研究結(jié)果相似，該結(jié)果可能與黃芪多糖能促進(jìn)黃喉擬水龜?shù)倪M(jìn)食、消化與吸收，進(jìn)而提高飼料轉(zhuǎn)化率有關(guān)（白鈺迪，2023;張榮浩等，2023）。試驗(yàn)龜增重率和特定生長(zhǎng)率隨著黃芪多糖添加量的增加呈先升高后下降趨勢(shì)，當(dāng)黃芪多糖添加量為0.50%時(shí)，增重率和特定增長(zhǎng)率均達(dá)最高；當(dāng)添加量為0.75%時(shí)增重率與特定增長(zhǎng)率雖有所下降但仍顯著高于M0組，該變化趨勢(shì)與前人對(duì)雜交鱧（王煜恒等，2018）、中華鱉（楊移斌等，2018）和淇河鯽（張杰等，2022）等的研究結(jié)果類似，推測(cè)黃芪多糖的生物活性物質(zhì)可能通過促進(jìn)黃喉擬水龜?shù)牡鞍踪|(zhì)合成，增強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)的能力，從而加快黃喉擬水龜生長(zhǎng)速度（李宏全等，2008;向靜，2023）。當(dāng)黃芪多糖添加量繼續(xù)增加至1.00%時(shí)，黃喉擬水龜?shù)纳L(zhǎng)性能反而出現(xiàn)回落，與M0組無顯著差異，表明過高劑量的黃芪多糖并不能促進(jìn)黃喉擬水龜?shù)纳L(zhǎng)，其原因仍需進(jìn)一步研究。本研究中，M25、M50、M75和M100組的背甲長(zhǎng)、背甲寬和背甲高的日增長(zhǎng)與M0組相比差異均不顯著。已知龜背甲生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要包括鈣和磷等（王潛潛，2023），推測(cè)黃芪多糖的添加并無促進(jìn)背甲對(duì)鈣或磷等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收的作用，因此不同濃度黃芪多糖組試驗(yàn)龜?shù)谋臣组L(zhǎng)、背甲寬和背甲高日增長(zhǎng)差異不顯著。本研究中，添加0.25%～0.75%的黃芪多糖能促進(jìn)黃喉擬水龜?shù)纳L(zhǎng)并改善飼料系數(shù)，當(dāng)黃芪多糖添加量為0.50%時(shí)其促生長(zhǎng)作用最佳。

3.2黃芪多糖對(duì)黃喉擬水龜血清生化指標(biāo)的影響

黃芪多糖具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、促進(jìn)機(jī)體抗氧化等作用（李春靜等，2019）。血清生化指標(biāo)是判斷動(dòng)物機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定及營(yíng)養(yǎng)代謝是否正常的綜合指標(biāo)（薛小翠等，2023）。AKP參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝，在消除病原體、細(xì)胞吞噬等過程中發(fā)揮重要作用；ACP是溶酶體的重要特征性酶，與動(dòng)物機(jī)體的免疫水平有關(guān)（楊振燕等，2023）。當(dāng)機(jī)體長(zhǎng)期處于惡劣環(huán)境時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量活性氧自由基，SOD能將動(dòng)物機(jī)體中過量的活性氧自由基轉(zhuǎn)化為氧氣和過氧化氫，而CAT能分解過氧化氫。大量自由基會(huì)攻擊細(xì)胞膜導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化反應(yīng)從而轉(zhuǎn)化為MDA，造成動(dòng)物機(jī)體損傷，因此MDA含量間接反映動(dòng)物機(jī)體的受損傷程度（王海瑞等，2022）。本研究中，隨著黃芪多糖添加量的逐漸增加，試驗(yàn)龜AKP和SOD活性先升高后降低，MDA含量先降低后升高，該變化趨勢(shì)與前人對(duì)雜交鱧（王煜恒等，2018）和長(zhǎng)江鱘幼魚（張建明等，2023）的研究結(jié)果相似。本研究中，黃芪多糖對(duì)ACP活性影響不顯著;相比M0組，M25、M50和M75組的AKP和SOD活性顯著提高，M50、M75和M100組的CAT活性顯著提高，M25、M50和M75組的MDA含量顯著降低；當(dāng)黃芪多糖添加量為0.50%時(shí)，試驗(yàn)龜?shù)腁KP、SOD和CAT活性均達(dá)最高值MDA含量達(dá)最低值，表明適量的黃芪多糖可增強(qiáng)黃喉擬水龜血清中AKP、SOD和CAT活性，并降低MDA含量，推測(cè)適量的黃芪多糖能提高黃喉擬水龜?shù)目共×涂寡趸芰Γ档蜋C(jī)體氧化應(yīng)激水平。但黃芪多糖對(duì)黃喉擬水龜?shù)目共×涂寡趸芰Φ脑鰪?qiáng)作用與其添加量之間并不呈正相關(guān)關(guān)系，當(dāng)黃芪多糖添加量繼續(xù)增加至1.00%時(shí)，試驗(yàn)龜?shù)腁KP和SOD活性顯著下降、MDA含量顯著增加，與M0組無顯著差異，說明過高劑量的黃芪多糖并不能增強(qiáng)黃喉擬水龜?shù)目共×涂寡趸芰?，具體原因有待深入研究。綜上所述，添加0.25%～0.75%的黃芪多糖能提高黃喉擬水龜?shù)目寡趸芰涂共×?、減輕機(jī)體過氧化損傷，當(dāng)黃芪多糖添加量為0.50%時(shí)其促抗氧化能力和促抗病力作用最佳。

3.3黃芪多糖對(duì)黃喉擬水龜腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響

腸道菌群對(duì)機(jī)體吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)能力、免疫力和腸道健康等有重要影響（黃鑫瑋等，2015）。Alpha多樣性指數(shù)可反映腸道菌群的群落豐富度和多樣性，Sobs指數(shù)、Chaol指數(shù)和ACE指數(shù)越大，說明腸道菌群的群落豐富度越高；Shannon指數(shù)越大、Simp-son指數(shù)越小，說明腸道菌群的群落多樣性越高（彭祖想等，2023）。本研究結(jié)果表明，M25組的Sobs指數(shù)和ACE指數(shù)顯著增加，而M50、M75和M100組群落豐富度指數(shù)增加不顯著，究其原因可能是較高含量的黃芪多糖對(duì)腸道有害菌的生長(zhǎng)有一定抑制作用（儲(chǔ)德勝，2023），因而較高水平黃芪多糖添加組的群落豐富度比M25組顯著下降。已有文獻(xiàn)報(bào)道，厚壁菌門、變形菌門和擬桿菌門是魚類腸道核心菌群，這3個(gè)門豐度之和通常占90%以上，在營(yíng)養(yǎng)吸收和免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用（Rimoldi et al.，2018）。本研究中，各組相對(duì)豐度占比為前3的細(xì)菌門為厚壁菌門、擬桿菌門和變形菌門，3個(gè)門的相對(duì)豐度在組間差異不顯著，其相對(duì)豐度之和均超過95%，說明黃喉擬水龜腸道核心菌群組成與魚類基本相同，在飼料中添加黃芪多糖未改變黃喉擬水龜腸道核心菌群的組成和豐度。屬分類水平的腸道菌群分析結(jié)果顯示，黃芪多糖可分別顯著提高瘤胃球菌屬1和漢氏鹽單胞菌屬的相對(duì)豐度。瘤胃球菌屬1可促進(jìn)腸道丁酸和乙酸的產(chǎn)生和氨基酸代謝，從而減輕炎癥反應(yīng)、抑制腸道中有害細(xì)菌生長(zhǎng)，增強(qiáng)免疫能力（李邈宇，2023）。本研究中，隨著黃芪多糖添加量的增加，瘤胃球菌屬1的相對(duì)豐度先升高后降低，M50組的相對(duì)豐度顯著高于M0組，說明添加0.50%的黃芪多糖可刺激瘤胃球菌屬1的增殖，有助于改善黃喉擬水龜?shù)哪c道菌群、增強(qiáng)機(jī)體抗病力和減少腸道炎癥的發(fā)生。水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)飼料的消化吸收與腸道消化酶密切相關(guān)，飼料的營(yíng)養(yǎng)成分含量會(huì)影響消化酶活性（秦驥等，2023）。漢氏鹽單胞菌屬能分泌多種消化酶，促進(jìn)動(dòng)物腸道消化（劉慧玲等，2012）。本研究中，隨著黃芪多糖添加量的增加，漢氏鹽單胞菌屬相對(duì)豐度先升高后降低，M75組的相對(duì)豐度顯著增加，與向靜（2023）對(duì)黃鱔的研究結(jié)果相似，推測(cè)0.75%的黃芪多糖可通過促進(jìn)漢氏鹽單胞菌屬的增殖，提高黃喉擬水龜腸道消化酶活性，從而提高腸道消化能力。依據(jù)腸道菌群分析結(jié)果，當(dāng)黃芪多糖添加量為0.50%和0.75%時(shí)可改善黃喉擬水龜腸道菌群結(jié)構(gòu)。

4結(jié)論

飼料中添加適量的黃芪多糖可提高黃喉擬水龜?shù)脑鲋芈屎吞囟ㄉL(zhǎng)率，降低飼料系數(shù)，提高黃喉擬水龜生長(zhǎng)性能；增強(qiáng)黃喉擬水龜血清AKP、SOD和CAT活性，降低MDA含量，提高黃喉擬水龜?shù)目寡趸芰涂共×?；改善黃喉擬水龜腸道菌群組成，對(duì)黃喉擬水龜?shù)哪c道健康具有積極作用。綜合分析，建議飼料中黃芪多糖添加量為0.50%。

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（責(zé)任編輯 王暉）