姜軍坡　高同國　王世英

摘要：將90只30日齡斷奶健康幼兔隨機(jī)分成對(duì)照組和試驗(yàn)組，試驗(yàn)組日糧中添加Tu-569菌劑，對(duì)照組不添加，分別飼喂10、20和30 d后，計(jì)算相應(yīng)的日均增重、料重比、飼料轉(zhuǎn)化率、腹瀉率等指標(biāo)。解剖幼兔后收集小腸、大腸內(nèi)容物，通過選擇性培養(yǎng)基測(cè)定其芽孢桿菌、大腸桿菌、乳酸菌、酵母菌的數(shù)量。結(jié)果表明，試驗(yàn)組幼兔的日均增重比對(duì)照組增加9.4%～22.6%，料重比低5.7%～18.9%，飼料轉(zhuǎn)化率高6.9%～23.7%，胴體重高13.4%～26.1%，幼兔腹瀉率降低了33.43%，小腸內(nèi)的芽孢桿菌數(shù)量增加了15.9倍；而幼兔小腸內(nèi)的大腸桿菌數(shù)量、乳酸菌數(shù)量、酵母菌數(shù)量差異不大。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的芽孢桿菌數(shù)量增加了26.8倍；試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的大腸桿菌數(shù)量減少了53.0%；試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的乳酸菌數(shù)量增加了9.2倍；試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的酵母菌數(shù)量增加了2.2倍。故飼喂Tu-569菌劑可使幼兔的日均增重、飼料轉(zhuǎn)化率、胴體重增加，料重比下降；還可增加幼兔大腸內(nèi)芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌等有益菌的數(shù)量，降低幼兔大腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量，防止幼兔腹瀉。

關(guān)鍵詞：兔；生長性能；芽孢桿菌；大腸桿菌；乳酸菌；酵母菌

中圖分類號(hào)：S829.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2015）19-4779-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.19.031

Abstract： 90 healthy weaned rabbits， 30 days old， were randomly divided into the control group and the test group. Agent Tu-569 was only added into the diet of rabbits in the test group. Indexes， such as daily weight gain， feed-gain ratio， feed conversion rate and diarrhea rate， were calculated when rabbits were fed for 10 days， 20 days and 30days， respectively. Intestine contents were collected after dissecting. Amount of Bacillus， Escherichia coli， lactic bacteria and yeast were determined with selective medium. Results showed that the daily weight gain of rabbits in the test group was increased by 9.4% ～22.6%， compared with that of the control group. Feed-gain ratio was decreased by 5.7% ～ 18.9%. Feed conversion rate increased by 6.9%～23.7%. Carcass weight was increased by 13.4%～26.1%. Meanwhile， diarrhea rate in the test group was decreased by 33.43%. Amount of Bacillus in the small intestine of rabbits in the test group was increased by 15.9 times， compared with that of the control group. But amounts of Escherichia coli， lactic bacteria and yeast in the small intestine had no significant difference between the two groups. Amount of Bacillus in the large intestine of rabbits in the test group was increased by 26.8 times， compared with that of the control group. Amount of Escherichia coli in the large intestine was decreased by 53.0%. Amount of lactic bacteria in the large intestine was increased by 9.2 times. Amount of yeast in the large intestine was increased by 2.2 times. Conclusion could be draw that agent Tu-569 had functions of increasing daily weight gain， feed conversion rate and carcass weight， decreasing feed-gain ratio， increasing amounts of beneficial bacteria， such as Bacillus， lactic bacteria and yeast， decreasing the amount of Escherichia coli and preventing young rabbit diarrhea.

Key words：rabbits；growth performance；Bacillus；Escherichia coli；Lactic bacteria； yeast

據(jù)統(tǒng)計(jì)，腹瀉引起的兔死亡約占家兔死亡總數(shù)的70%～80%[1]。造成幼兔腹瀉的原因包括寄生蟲、病毒性、細(xì)菌性等傳染性因素和自身消化機(jī)能、應(yīng)激、飼料等非傳染性因素，其中細(xì)菌性因素包括大腸桿菌、魏氏梭菌等病原菌[2]。研究證明，微生態(tài)制劑可較好地預(yù)防幼兔腹瀉的發(fā)生和降低死亡率，并可減少耗料量，降低料重比[3]。本研究組從健康獺兔腸道中篩選到的Bacillus velezensis Tu-569菌株，可在胞外產(chǎn)生抑制大腸桿菌、沙門氏菌和痢疾桿菌等致腹瀉病原菌的抑菌蛋白，并可在胞外產(chǎn)生消化酶，對(duì)幼兔安全，具有作為飼料添加劑飼喂幼兔的潛力，可制備成菌劑用于防治幼兔腹瀉及提高幼兔生產(chǎn)性能[4]。Tu-569菌劑系由Tu-569菌株制備而成。本試驗(yàn)擬研究Tu-569菌劑對(duì)幼兔生長性能及腸道內(nèi)微生物區(qū)系的影響，為Tu-569菌劑的進(jìn)一步推廣應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 Tu-569菌劑 Tu-569菌劑（菌濃為1×1010 CFU/g）由河北眾邦生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，系Bacillus velezensis Tu-569菌株經(jīng)發(fā)酵制備。Tu-569菌株由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院制藥工程系分離并保存。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 30日齡斷奶健康幼兔90只，購自河北省保定市曲陽縣吳少偉獺兔養(yǎng)殖廠。

1.1.3 主要培養(yǎng)基 NA培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化鈉15 g，瓊脂15 g，水1 000 mL，pH 7.2～7.4。

EMB培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，乳糖10 g，K2HPO4 2 g，瓊脂25 g，2%曙紅水溶液20 mL，0.5%美藍(lán)水溶液13 mL，水1 000 mL，pH 7.4。

MRS培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，牛肉膏10 g，酵母膏10 g，KH2PO4 2 g，K2HPO4 2 g，葡萄糖20 g，吐溫80 1 mL，CH3COONa·3H2O 5 g，MgSO4·7H2O 0.58 g，MnSO4·H2O 0.25 g，瓊脂18 g，水1 000 mL，pH 6.2～6.6。

YPD培養(yǎng)基：蛋白胨10 g，酵母浸出粉5 g，葡萄糖20 g，瓊脂14 g，水1 000 mL，pH 7.0。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 飼喂方案 將90只30日齡斷奶健康幼兔隨機(jī)分為對(duì)照組、試驗(yàn)組，每組45只。試驗(yàn)組幼兔日糧中添加0.1%的Tu-569菌劑，對(duì)照組幼兔日糧中不添加Tu-569菌劑。每天6：00和18：00人工飼喂日糧，按每只幼兔每天定量添加75 g日糧進(jìn)行喂養(yǎng)，自由飲水，正常管理。

1.2.2 幼兔生長性能及腹瀉率、死亡率的測(cè)定 每天觀察兔舍的臭味，記錄群兔狀態(tài)、采食量、腹瀉、糞便及死亡情況。

1.2.3 取樣及菌群變化的測(cè)定 飼喂10 d后，對(duì)照組和試驗(yàn)組分別隨機(jī)選取3只幼兔停食24 h后稱重，處死，解剖，測(cè)定酮體重。飼喂20 d后，對(duì)照組和試驗(yàn)組分別隨機(jī)選取3只幼兔停食24 h后稱重，處死，解剖，測(cè)定酮體重。飼喂20 d后，對(duì)照組和試驗(yàn)組分別隨機(jī)選取3只幼兔停食24 h后稱重，處死，解剖，測(cè)定酮體重。

幼兔解剖時(shí)，將腸道按小腸、大腸分段，分別收集其內(nèi)容物。各取大約1 g腸道內(nèi)容物于滅菌錐形瓶中，放入已滅菌的研缽中快速研細(xì)。將研細(xì)的腸道內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至裝有10 mL無菌水的試管中，并用渦旋振蕩儀混勻。大腸內(nèi)容物依次進(jìn)行10-1～10-9倍梯度稀釋，小腸進(jìn)行10-1～10-6倍梯度稀釋。

（1）芽孢桿菌數(shù)量的測(cè)定。測(cè)定芽孢桿菌時(shí)，先將腸道內(nèi)容物80 ℃水浴處理30 min。采用平板稀釋涂布法，以NA培養(yǎng)基平板測(cè)定芽孢桿菌的數(shù)量。37 ℃培養(yǎng)12 h，觀察并記數(shù)。

（2）大腸桿菌數(shù)量的測(cè)定。采用平板稀釋涂布法，以EMB培養(yǎng)基平板測(cè)定大腸桿菌的數(shù)量。37 ℃培養(yǎng)12 h，觀察并記數(shù)。

（3）乳酸菌數(shù)量的測(cè)定。采用平板稀釋涂布法，以MRS培養(yǎng)基平板測(cè)定乳酸菌。37 ℃培養(yǎng)12 h，觀察并記數(shù)。

（4）酵母菌數(shù)量的測(cè)定。采用平板稀釋涂布法，以YPD培養(yǎng)基平板測(cè)定酵母菌的數(shù)量。37 ℃培養(yǎng)12 h，觀察并記數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼喂Tu-569菌劑對(duì)幼兔生長性能的影響

由表1可知，飼喂期間，試驗(yàn)組和對(duì)照組的日均采食量保持同一水平。與對(duì)照組相比，飼喂至10 d時(shí)，試驗(yàn)組的日均增重高9.4%；20 d時(shí)，試驗(yàn)組的日均增重高22.6%；30 d時(shí)，試驗(yàn)組的日均增重高12.9%。與對(duì)照組相比，飼喂至10 d時(shí)，試驗(yàn)組的料重比下降5.7%；飼喂至20 d時(shí)，試驗(yàn)組的料重比下降18.9%；飼喂至30 d時(shí)，試驗(yàn)組的料重比下降12.4%。與對(duì)照組相比，飼喂至10 d時(shí)，試驗(yàn)組的飼料轉(zhuǎn)化率增加6.9%；飼喂至20 d時(shí)，試驗(yàn)組的飼料轉(zhuǎn)化率增加23.7%；飼喂至30 d時(shí)，試驗(yàn)組的飼料轉(zhuǎn)化率增加13.1%。與對(duì)照組相比，飼喂至10 d時(shí)，試驗(yàn)組的胴體重增加26.1%；飼喂至20 d時(shí)，試驗(yàn)組的胴體重增加16.0%；飼喂至20 d時(shí)，試驗(yàn)組的胴體重增加13.4%。

2.2 飼喂Tu-569菌劑對(duì)幼兔腹瀉的影響

由表2可知，試驗(yàn)組的腹瀉率為4.44%，與對(duì)照組相比，下降了33.43%。試驗(yàn)組有2只幼兔僅表現(xiàn)出輕微腹瀉癥狀；對(duì)照組幼兔有2只腹瀉表現(xiàn)出輕微腹瀉癥狀，1只表現(xiàn)出嚴(yán)重腹瀉癥狀，4 d后輕微腹瀉幼兔恢復(fù)正常，嚴(yán)重腹瀉幼兔死亡。

2.3 飼喂Tu-569菌劑對(duì)幼兔腸道菌群的影響

2.3.1 飼喂Tu-569菌劑對(duì)幼兔小腸內(nèi)菌群的影響 由表3可知，試驗(yàn)組幼兔小腸內(nèi)的芽孢桿菌數(shù)量增加明顯，為對(duì)照組幼兔小腸內(nèi)的芽孢桿菌數(shù)量的16.9倍。與對(duì)照組幼兔相比，試驗(yàn)組幼兔小腸內(nèi)的大腸桿菌數(shù)量、乳酸菌數(shù)量、酵母菌數(shù)量相差不大。故飼喂Tu-569菌劑可明顯增加幼兔小腸內(nèi)的芽孢桿菌數(shù)量。

2.3.2 飼喂Tu-569菌劑對(duì)幼兔大腸內(nèi)菌群的影響 由表4可知，與對(duì)照組幼兔相比，試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的芽孢桿菌數(shù)量明顯增加，為對(duì)照組幼兔大腸內(nèi)芽孢桿菌數(shù)量的27.8倍。試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的大腸桿菌數(shù)量減少，為對(duì)照組幼兔大腸內(nèi)的大腸桿菌數(shù)量的47.0%。試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的乳酸菌數(shù)量增加，為對(duì)照組幼兔大腸內(nèi)的乳酸菌數(shù)量的10.2倍。試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的酵母菌數(shù)量增加，為對(duì)照組幼兔大腸內(nèi)的乳酸菌數(shù)量的3.2倍。故飼喂Tu-569菌劑可顯著增加幼兔大腸內(nèi)芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌的數(shù)量，可降低幼兔大腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量。

3 小結(jié)與討論

吳建忠等[5]向兔日糧中添加乳酸芽孢桿菌制劑，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組的平均日增重可提高7.98%～15.16%，料肉比降低2.83%～3.40%，。潘康成等[6]向兔基礎(chǔ)日糧中添加0.1%蠟樣芽孢桿菌PAS38制劑，發(fā)現(xiàn)可使試驗(yàn)組的料重比比對(duì)照組下降13.8%。胡艷等[7]向兔飼料中添加枯草芽孢桿菌，使試驗(yàn)組兔子平均日增重比對(duì)照組提高了33.35%，料肉比降低了13.96%，成活率提高了10%。孫寶麗等[8]對(duì)仔兔灌服利生菌王（芽孢桿菌為其主要成分之一），發(fā)現(xiàn)灌服后仔兔的生長速度可提高2.3%～13.0%，斷奶后料肉比可下降11.5%～14.0%。任永軍等[9，10]向35日齡斷奶肉兔日糧中添加由枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌組成的復(fù)合芽孢桿菌制劑，發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加復(fù)合芽孢桿菌制劑可以促進(jìn)肉兔腸道發(fā)育，刺激盲腸有益菌的增殖并抑制有害菌的增殖；還發(fā)現(xiàn)該復(fù)合芽孢桿菌制劑可有效提高新西蘭兔生產(chǎn)性能、屠宰性能和免疫器官指數(shù)，并可改善兔肉肉品質(zhì)。本研究證明，Tu-569菌劑可使試驗(yàn)組幼兔的日均增重增加9.4%～22.6%；試驗(yàn)組幼兔的料重比下降5.7%～18.9%；試驗(yàn)組幼兔的飼料轉(zhuǎn)化率增加6.9%～23.7%；試驗(yàn)組幼兔的胴體重增加13.4%～26.1%；同時(shí)，試驗(yàn)組幼兔腹瀉率降低了50.0%；與對(duì)照組幼兔相比，可使試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的芽孢桿菌數(shù)量增加26.8倍；試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的大腸桿菌數(shù)量減少53.0%；試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的乳酸菌數(shù)量增加9.2倍；試驗(yàn)組幼兔大腸內(nèi)的酵母菌數(shù)量增加2.2倍。日糧中添加Tu-569菌劑導(dǎo)致有益菌數(shù)量增加及有害菌數(shù)量減少與Tu-569菌株產(chǎn)生抑制腹瀉病原菌生長的物質(zhì)相關(guān)[4]。日糧中添加Tu-569菌劑導(dǎo)致幼兔的日均增重、飼料轉(zhuǎn)化率、胴體重增加的原因可能與Tu-569菌株特性有關(guān)，該菌株富產(chǎn)胞外消化酶[4]，但這一相關(guān)性尚需測(cè)定日糧添加Tu-569菌劑后小腸、大腸的消化酶活力變化來加以證實(shí)。

飼喂Tu-569菌劑可使幼兔的日均增重、飼料轉(zhuǎn)化率、胴體重顯著增加，料重比顯著下降，還可顯著增加幼兔大腸內(nèi)芽孢桿菌、乳酸菌、酵母菌等有益菌的數(shù)量，顯著降低幼兔大腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量，防止幼兔腹瀉。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李炳勝，趙鳳傳.家兔腹瀉病的綜合防治[J].中國養(yǎng)兔，2013（7）：42，38.

[2] 張林海，張代寶，馬文濤，等.淺析仔兔腹瀉病因及防治措施[J].當(dāng)代畜牧，2014（14）：63-64.

[3] 王仲兵.微生態(tài)制劑對(duì)幼兔腹瀉治療的研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2007，29（6）：475-479.

[4] 尚 偉.抗兔腹瀉芽孢桿菌Tu-569菌株的篩選、發(fā)酵及應(yīng)用[D].河北保定：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[5] 吳建忠，劉清神，馮定遠(yuǎn).乳酸芽孢桿菌制劑對(duì)齊卡肉兔的促生長作用研究[J].飼料工業(yè)，2008，29（15）：48-49.

[6] 潘康成，馮 軾，崔恒敏，等.微生物制劑對(duì)幼兔生長及HPA軸5-HT能細(xì)胞的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2009，21（6）：945-952.

[7] 胡 艷，蘇 州，郭禮榮.枯草芽孢桿菌對(duì)普通級(jí)實(shí)驗(yàn)兔生產(chǎn)性能的初探[J].科技廣場(chǎng)，2012（12）：230-231.

[8] 孫寶麗，何英俊，傅沖云，等.益生菌添加劑對(duì)天露山黑兔仔兔生產(chǎn)性能的影響[J].中國草食動(dòng)物科學(xué)，2013，33（2）：75-77.

[9] 任永軍，雷 珉，鄺良德，等.復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)肉兔腸道發(fā)育和免疫功能的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2014，26（1）：144-152.

[10] 任永軍，雷 珉，鄺良德.復(fù)合芽孢桿菌制劑對(duì)肉兔生產(chǎn)性能、免疫器官指數(shù)及肉質(zhì)的影響[J].中國畜牧雜志，2014，50（3）：73-77.