張可+齊遵利

摘要：通過在養(yǎng)殖羅非魚的水體里添加不同濃度的枯草芽孢桿菌，分別測定羅非魚酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、谷草轉氨酶、谷丙轉氨酶、溶菌酶五種免疫酶活性指標及生長性能指標，探討在養(yǎng)殖水體中添加枯草芽孢桿菌對羅非魚的免疫酶活性及生長性能的影響，目的為評價枯草芽孢桿菌在羅非魚養(yǎng)殖過程中使用效果的生物學指標，以及為了推廣枯草芽孢桿菌在羅非魚養(yǎng)殖過程中提高羅非魚免疫功能提供理論依據。

關鍵詞：枯草芽孢桿菌；羅非魚；免疫酶活性；生長性能

1材料及方法

1.1試驗動物

本試驗以羅非魚為試驗對象，挑選體質健壯、體表無傷的羅非魚，平均每條羅非魚的重量為15 g左右。

1.2試驗設計

本試驗于河北農業(yè)大學渤海校區(qū)實驗育苗室內進行，水族箱規(guī)格為100 cm×60 cm×50 cm，試驗前將水族箱和實驗所用器具用高錳酸鉀浸泡消毒24 h。水體體積為100 cm×60 cm×35 cm，并充分曝氣24 h后將魚放入水族箱中。共16個水族箱，每個水族箱里放25尾魚。待魚適應環(huán)境以后開始投喂飼料并正式試驗。

試驗分為5個處理組，每個試驗組設3個平行，分別添加濃度為102、103、104、105、106 cfu/mL的枯草芽孢桿菌，對照組不添加枯草芽孢桿菌。每個水族箱中飼養(yǎng)25尾羅非魚。

1.3日常管理

每天投食兩次，上午8：30、下午2：30各投喂一次，投喂量以多數魚不攝食為準。試驗期間不換水，每天上午清洗過濾棉。試驗期間定時觀察羅非魚的生長及健康狀況，定期往水體里添加菌粉以保持水體菌的濃度。

1.4試驗處理

實驗開始后，在實驗飼養(yǎng)的第30 d采樣，采樣時取其血液，用肝素鈉潤洗注射器后抽取2～3 mL的血液，放置冰箱冷凍條件下12 h，然后在離心機里離心，3 500 r/min離心15 min，取上清液待測。

生長性能的測定為羅非魚的特定生長率及成活率，特定生長率的計算公式為SGR=100×（lnW末-lnW初）/t（養(yǎng)殖天數），成活率的計算公式為成活率=成活的數量÷總數量×100%。

免疫指標的測定為酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、谷草轉氨酶（AST）、谷丙轉氨酶（ALT）、溶菌酶（LZM），均為南京建成生物工程研究所生產的試劑盒測定，具體操作按其說明書進行。采用SPSS19.0對數據進行統(tǒng)計分析，運用ANOVA單因素進行方差分析及Duncans多重比較對實驗所得出的結果進行顯著性檢驗，顯著水平為P<0.05。

2試驗結果

2.1水體添加枯草芽孢桿菌對羅非魚血清中酸性磷酸酶（ACP）活性的影響

添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚血清的ACP活性顯著高于其他組（P<0.05），且試驗組顯著高于對照組。

2.2水體添加枯草芽孢桿菌對羅非魚血清中堿性磷酸酶（AKP）活性的影響

添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚血清的AKP活性顯著高于其他組（P<0.05），且試驗組顯著高于對照組。

2.3水體添加枯草芽孢桿菌對羅非魚血清中谷草轉氨酶（AST）活性的影響

添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚血清AST活性顯著高于其他組（P<0.05），且試驗組顯著高于對照組。

2.4水體添加枯草芽孢桿菌對羅非魚血清中谷丙轉氨酶（ALT）活性的影響

添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL和105cfu/mL添加組的魚血清ALT活性顯著高于其他組（P<0.05），且試驗組顯著高于對照組。

2.5水體添加枯草芽孢桿菌對羅非魚血清中溶菌酶（LZM）活性的影響

添加枯草芽孢桿菌的濃度為104cfu/mL的魚血清的LZM活性顯著高于其他組（P<0.05），且試驗組顯著高于對照組。

2.6對羅非魚生長性能的影響

添加枯草芽孢桿菌濃度分別為102cfu/mL、103cfu/mL、104cfu/mL、105cfu/mL、106cfu/mL及對照組的特定生長率分別為2.628、2.918、3877、3.510、3.587、2.197，成活率分別為88%、92%、96%、92%、80%、80%。添加組的特定生長率顯著高于空白組，添加濃度為104cfu/mL的生長性能表現(xiàn)最好。

3結論

酸性磷酸酶（ACP）是動物體內重要的調控酶，它可以直接參與血細胞的包囊作用和吞噬作用，并能幫助殺死及吞噬病原體。

在整個實驗過程中，104cfu/mL添加組中ACP的活性最高，且添加組明顯高于對照組，因此ACP可以作為評價動物免疫功能的指標。

堿性磷酸酶（AKP）普遍存在于動植物體內，是重要的調控酶，可直接參與磷酸基團的轉移與磷酸脂的代謝，可為ADP磷酸轉化形成ATP提供更多的必需無機磷酸，也是動物體內重要的解毒體系，可作為評價羅非魚免疫功能的指標。

實驗過程中，104cfu/mL添加組中AKP的活性最高，且添加效果最為明顯，因此AKP可以作為評價羅非魚的免疫功能指標。

谷草轉氨酶（AST）是一種重要的氨基轉移酶，廣泛存在于動物組織細胞中。當血清中AST的活性升高或組織內AST的活性降低時，即表明動物機體的肝臟、心臟等內臟器官發(fā)生損傷。AST 活性變化也是反映肝細胞受到損傷的主要敏感指標。

在本試驗階段，104cfu/mL添加組的羅非魚血清中AST活性最高，顯著高于其他組（P<005），且試驗組顯著高于對照組。

谷丙轉氨酶（ALT）是催化谷氨酸與丙酮酸之間的轉氨作用，在肝臟內的活力最大的一種酶。存在于很多器官中，對肝臟的蛋白質代謝起到樞紐的作用，攝入的糖類、脂肪及其他營養(yǎng)物質經由轉氨基作用轉變?yōu)樗璧鞍踪|，而轉氨基作用最重要的就是需要谷丙轉氨酶的催化作用。

在本試驗階段，104cfu/mL和105cfu/mL添加組的魚血清ALT活性顯著高于其他組（P<005），這兩個添加組無明顯差異（P>0.05），試驗組顯著高于對照組（P<0.01）。

溶菌酶（LZM）是一種堿性蛋白酶，廣泛存在于動物體內的某些淋巴組織和體液中。LZM活性的高低，可作為衡量水產動物免疫狀態(tài)的重要指標之一，在一定程度上也能反映出動物機體的非特異性體液免疫的狀態(tài)。當血清中LZM活性提高時，機體的免疫能力也會相應提高。

在本試驗中，104cfu/mL添加組魚血清的LZM活性最高，且試驗組的溶菌酶活性顯著高于對照組。

特定生長率是指生長率與生長天數的比，是衡量生長狀況的一個常用指標，特定生長率越大，代表每天體重增長越快。成活率表示成活的數量占總量的百分比，成活率越高，反映枯草芽孢桿菌對魚的生長性能的影響越高。本試驗中，104cfu/mL添加組羅非魚的特定生長率和成活率都是最高的，且試驗組明顯高于對照組。

在養(yǎng)殖水體中添加枯草芽孢桿菌對養(yǎng)殖羅非魚的免疫酶活性及生長性能都能起到一定的作用，且明顯高于空白對照組，其中添加濃度為104cfu/mL的所起到的作用最為明顯。