秦雪怡，孫萌，郜晶，侯立功，張現(xiàn)偉，羅淑穎，，張耀東，，張萬(wàn)存，，

1 鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院河南省兒童遺傳代謝性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，鄭州 450018；2 鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院河南省兒科病防治國(guó)際聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室；3 鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院河南省衛(wèi)生健康委員會(huì)兒童腫瘤精準(zhǔn)診療重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

血液、組織、尿液等是人體主要生物樣本，它們的預(yù)處理方式分別為離心分離白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板及粉碎、裂解和離心去除沉淀物等，這些對(duì)于后續(xù)RNA 提取和分析的結(jié)果具有重要影響。人體生物樣本的RNA 提取方法包括酚氯仿法、硅基柱法和磁珠法等，選擇合適的RNA 提取方法是至關(guān)重要，對(duì)RNA 質(zhì)量產(chǎn)生主要影響。在質(zhì)量控制方面，需要注重RNA 純度、濃度以及完整度，穩(wěn)定性十分重要。高質(zhì)量的RNA 可以滿(mǎn)足各種下游實(shí)驗(yàn)需求，并直接影響cDNA 文庫(kù)構(gòu)建、基因克隆、基因表達(dá)分析等結(jié)果可靠性［1］，需要對(duì)保存試劑、保存時(shí)間、凍融程序等多個(gè)方面進(jìn)行嚴(yán)格把控［2］?，F(xiàn)就人體生物樣本的預(yù)處理方式、RNA 提取方法及質(zhì)量控制技術(shù)應(yīng)用進(jìn)展情況綜述如下。

1 人體生物樣本預(yù)處理方式

高質(zhì)量的RNA 可通過(guò)立即從新鮮的人體生物樣本中抽提得到［2］，操作過(guò)程需要在無(wú)RNase 的環(huán)境下進(jìn)行，收取樣本后，如不具備當(dāng)場(chǎng)抽提RNA 的條件，則需要將人體生物樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理。對(duì)人體生物樣本進(jìn)行有效的預(yù)處理可以避免RNA酶的污染，防止RNA 降解［3］。組織樣本預(yù)處理需縮短冷缺血時(shí)間，選擇合適固定方式，減少凍融次數(shù)，以保障RNA 質(zhì)量。不同人體樣本提取RNA 需適當(dāng)預(yù)處理，離心分離血樣樣本，洗滌細(xì)胞顆粒和保留更多尿量等尿液樣本預(yù)處理，以及粉碎和裂解組織樣本，精子洗滌，陰道分泌物保存在RNAlater 中低溫保存，眼淚放入無(wú)RNase微管冷凍等預(yù)處理方式，均可以提高RNA質(zhì)量。

1.1 人體血液樣本的預(yù)處理 在臨床工作中，人體血液樣本采集簡(jiǎn)單，對(duì)患者創(chuàng)傷小，是理想的RNA來(lái)源。但是血液樣本在采集、處理、存儲(chǔ)過(guò)程中的不當(dāng)操作，都可能使RNA 出現(xiàn)降解現(xiàn)象，進(jìn)而影響RNA 質(zhì)量［4］。例如溶血樣本的紅細(xì)胞破碎后會(huì)大量釋放血紅蛋白（Hb），使RNase 逐步釋放，RNA 產(chǎn)生降解，所以在選擇血液樣本時(shí)，需要選擇離心后上清外觀清亮的血液樣本［5］。為了減少血液樣本出現(xiàn)溶血的現(xiàn)象，通常要求工作人員在3～5 h 完成血液樣本的離心及分裝處理［6］。不同的血液樣本類(lèi)型［7］、不同的放置時(shí)間及反復(fù)凍融次數(shù)［8］等，都會(huì)對(duì)血液樣本中RNA 質(zhì)量產(chǎn)生影響；使用合適的采血管，如PAX-gene全血RNA采血管，添加保護(hù)劑如RNAlater、TRIzol，也是保證RNA 質(zhì)量的重要舉措。為了評(píng)估血液樣本的預(yù)處理方法對(duì)RNA 質(zhì)量的影響，張佳怡等［9］選取了8種外周血不同預(yù)處理方法及儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)，提取RNA 后對(duì)其產(chǎn)量、純度以及完整性進(jìn)行比較，證實(shí)了經(jīng)過(guò)預(yù)處理后的血液樣本提取出來(lái)的RNA在產(chǎn)量、純度以及完整性方面皆?xún)?yōu)于直接凍存法保存的血液樣本。不同類(lèi)型的血液樣本提取出來(lái)的RNA 完整性及反轉(zhuǎn)錄后基因擴(kuò)增效果有明顯差異，常見(jiàn)用于提取RNA 的血液樣本類(lèi)型主要有全血、血漿、血清、白膜層、紅細(xì)胞等。劉欣等［7］通過(guò)提取凍存血研究了不同血液成分，如分離白細(xì)胞法、低滲紅細(xì)胞法、全血直提法提取的RNA 質(zhì)量及其反轉(zhuǎn)錄后基因擴(kuò)增效果，發(fā)現(xiàn)與分離白細(xì)胞法、低滲紅細(xì)胞法相比，全血直提法提取的凍存血RNA 完整性更好，其反轉(zhuǎn)錄后基因擴(kuò)增效果更高，這對(duì)臨床血液樣本以何種成分保藏有一定的指導(dǎo)意義。反復(fù)凍融血液樣本對(duì)RNA 質(zhì)量的影響較為明顯，何松哲等［10］考察了反復(fù)凍融血液樣本對(duì)RNA 質(zhì)量的影響，通過(guò)將樣本置于不同溫度條件下，設(shè)置儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)1～7 d，凍融1～3 次，分別提取RNA，結(jié)果表明反復(fù)凍融主要影響全血RNA 提取效率和得率。由此可見(jiàn)，對(duì)血液樣本進(jìn)行有效的預(yù)處理，選擇合適的采血管及保護(hù)液收集血液樣本、合適成分的血液樣本減少血液樣本的凍融次數(shù)能夠切實(shí)有效的提高血液樣本提取RNA的質(zhì)量。

1.2 人體組織樣本的預(yù)處理 人體組織樣本是臨床診斷和科學(xué)研究中應(yīng)用廣泛的生物樣本資源之一，從組織樣本中提取出來(lái)的RNA 質(zhì)量可以很好地反映該樣本的質(zhì)量［11］。組織樣本離體后影響其穩(wěn)定性的因素較多，采集、固定及保存環(huán)節(jié)均影響著樣本RNA 完整性［12］，如樣本保存環(huán)境、細(xì)胞裂解、RNA 提取方法、內(nèi)源RNase 激活、環(huán)境RNase 污染、低濃度RNA 的沉淀、提取后的RNA 儲(chǔ)存、源自富含降解酶的組織樣本等，都會(huì)對(duì)組織樣本中的RNA 質(zhì)量產(chǎn)生影響，其中RNase廣泛而穩(wěn)定存在，耐受多種處理而不被滅活，如煮沸、高壓滅菌，在實(shí)驗(yàn)中要嚴(yán)格控制外源RNase 的污染，同時(shí)也要最大限度地抑制內(nèi)源性RNase［13］。為保障人體組織樣本中RNA 的質(zhì)量，對(duì)組織樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，如控制冷缺血時(shí)間、選擇合適的保存方式、減少凍融循環(huán)次數(shù)等都是必要的環(huán)節(jié)。首先，冷缺血時(shí)間是影響人體組織樣本質(zhì)量的重要因素，組織樣本在采集保存過(guò)程中的冷缺血時(shí)間主要是指組織離體后到儲(chǔ)存前的時(shí)間［11］，冷缺血時(shí)間與RNA 的質(zhì)量具有一定的相關(guān)性。何璟榮等［14］隨機(jī)選取5 例手術(shù)切除的肝癌組織，分別在離體后5 個(gè)時(shí)間點(diǎn)處置，提取RNA 進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)肝癌組織標(biāo)本離體后，在25 ℃環(huán)境下放置30 min 內(nèi)處置，提取RNA 的穩(wěn)定性尚有質(zhì)量保障，而離體40 min 后處置，RNA 已有一定降解，因此應(yīng)該盡量縮短組織樣本的冷缺血時(shí)間，以保障RNA 的質(zhì)量。其次，保存方式對(duì)人體組織樣本RNA 的質(zhì)量也有重要影響，由于低溫保存過(guò)程中會(huì)包含結(jié)晶、反玻璃化以及冰晶再生長(zhǎng)等冰晶生長(zhǎng)過(guò)程，而冰晶的生長(zhǎng)會(huì)對(duì)組織造成致命的機(jī)械損傷，所以在對(duì)組織的預(yù)處理中，可以加入保護(hù)劑（CPA）如二甲基亞砜、甘油、乙二醇、丙二醇和二甲基甲酰胺等，它們可以通過(guò)氫鍵相互作用結(jié)合水分子，抑制冰晶生長(zhǎng)并提高玻璃化轉(zhuǎn)變溫度［15］。組織的固定方法也是影響組織樣本RNA 質(zhì)量的因素，例如石蠟包埋就是組織常見(jiàn)的固定方法，石蠟包埋組織中的RNA 含量極微，只能使用定量PCR 技術(shù)對(duì)其中的RNA 進(jìn)行分析。嚴(yán)曉麗等［16］通過(guò)對(duì)相同病例的新鮮冰凍組織和石蠟包埋組織進(jìn)行RNA 的提取，并對(duì)這兩種組織的長(zhǎng)鏈編碼RNA 和短鏈非編碼RNA 中的微小RNA 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增，比較兩種組織中不同類(lèi)型RNA 的保存質(zhì)量，認(rèn)為石蠟包埋組織的RNA 濃度明顯低于新鮮組織，且石蠟包埋組織未能成功擴(kuò)增ABCB1，結(jié)果未檢測(cè)出ABCB1 基因的表達(dá)。最后，反復(fù)凍融冰凍組織樣本對(duì)其提取的RNA 質(zhì)量影響較為明顯，組織樣本凍融次數(shù)越多，RIN 值越低，并且隨解凍后RNA提取時(shí)間的延長(zhǎng)，RNA 完整性也在不斷降低。張園等［17］收集15 例肝癌患者術(shù)后的組織樣本，低溫保存后將樣本分別在凍融0、1、3、6 次后提取RNA，通過(guò)對(duì)以上RNA 的完整性分析，發(fā)現(xiàn)當(dāng)研究對(duì)RNA 質(zhì)量要求比較高時(shí)，肝癌組織解凍不應(yīng)超過(guò)3次，以保證RNA 的完整性。綜上，在人體組織樣本的預(yù)處理中，縮短組織缺血時(shí)間、選擇合適的固定方式，盡量減少凍融次數(shù)可以有效保障后續(xù)提取RNA的質(zhì)量。

1.3 人體尿液樣本的預(yù)處理 尿液作為臨床上常見(jiàn)的樣本，與其他人體生物樣本的收集相比具有無(wú)創(chuàng)性、取用方便等優(yōu)點(diǎn)，尿液樣本RNA 檢測(cè)被證實(shí)可能是泌尿系統(tǒng)疾病無(wú)創(chuàng)診斷和預(yù)后程序的最佳方法，RNA 的質(zhì)量控制顯得十分重要。但尿液樣本的收集保藏又受到多種因素的影響，比如尿液收集方法、一天中的時(shí)間和排尿次數(shù)的變化等，為了提高尿液樣本中RNA 的質(zhì)量，需要在提取之前對(duì)尿液樣本進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理。BARAU 等［18］測(cè)試了幾種預(yù)處理策略，即洗滌細(xì)胞顆粒以去除可能的尿液痕跡，增加用于中和尿液樣本中含有的RNase的硫甘油酯的量，在RNA 提取過(guò)程中添加RNase 抑制劑，以及在尿液收集后立即向樣品中添加蛋白酶抑制劑，最終發(fā)現(xiàn)洗滌細(xì)胞顆粒的方法提供了最佳的提取率和RNA 質(zhì)量，這種方法需要清洗細(xì)胞顆粒，以去除可能的尿液痕跡，從而能夠去除RNase，減少RNA的降解。不僅如此，尿液量也是提取RNA 的關(guān)鍵因素，王潔敏等［19］留取50 mL 尿液，以尿液容量區(qū)分，提取RNA 后發(fā)現(xiàn)兩組產(chǎn)量明顯不同，容量多的尿液提取出的RNA 產(chǎn)量顯著高于低容量的尿液，這組實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)-80 ℃低溫凍存尿液標(biāo)本7 d 或添加TRIzol 預(yù)處理凍存的方式對(duì)提取尿液沉渣細(xì)胞RNA 數(shù)量和質(zhì)量均無(wú)影響，由此可見(jiàn)，在預(yù)處理中應(yīng)盡量保留容量多的尿液樣本，可提高RNA 質(zhì)量的重要因素，而凍存時(shí)長(zhǎng)及保護(hù)液的添加對(duì)尿液中RNA 的質(zhì)量影響不大。綜上，不管是洗滌洗滌顆粒細(xì)胞還是保留更多的尿量，對(duì)人體尿液樣本進(jìn)行合適的預(yù)處理都是可以切實(shí)有效的提高尿液樣本中RNA 質(zhì)量的手段。

1.4 其他人體生物樣本的預(yù)處理 除上述常見(jiàn)的人體生物樣本之外，腦脊液、陰道分泌物、精液、淚液等體生物樣本中也能提取出RNA，需要對(duì)其進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理。有些樣本，例如人體精子樣本中所含RNA 量極少，且由于精子中圓形細(xì)胞存在，使得分離RNA 具有一定的挑戰(zhàn)性。于艷等［20］對(duì)人體精子樣本進(jìn)行預(yù)處理，發(fā)現(xiàn)利用精子洗滌液純化精子，可以完全去除其他細(xì)胞的污染，為下一步提取高質(zhì)量的精子RNA 奠定良好基礎(chǔ)。使用陰道分泌物提取RNA 之前也需要先進(jìn)行合適的預(yù)處理，其方法通常是采集陰道灌洗液10 mL，離心后將沉淀物保存于1 mL 的RNAlater 中，并置于-70 ℃保存?zhèn)溆茫?1］。眼淚作為一種無(wú)創(chuàng)的遺傳物質(zhì)和生物標(biāo)志物，可以用于眼部和非眼部疾病的預(yù)后和診斷，考慮到淚液中RNA 的含量很少，選擇一種合適的預(yù)處理方法，對(duì)于提取出高質(zhì)量的RNA 非常重要。DARA 等［22］發(fā)現(xiàn)，對(duì)淚液樣本最佳的預(yù)處理方式是將淚液樣品輕輕放入1.5 mL 無(wú)RNase 的微管中，在-70 ℃冷凍保存，待使用時(shí)再取出提取RNA，低溫凍存能夠最大程度上保證其中RNA 的質(zhì)量。綜上，根據(jù)人體生物樣本的類(lèi)型不同，進(jìn)行的預(yù)處理方式也大不相同，而合適的預(yù)處理方法可以有效的提高RNA質(zhì)量。

2 人體生物樣本RNA提取方法

常見(jiàn)的人體生物樣本RNA 提取方法主要包括TRIzol法、試劑盒法、改良十六烷基三甲基溴化銨法（CTAB 法）等。TRIzol 法是一種常見(jiàn)的RNA 提取方法，能夠同時(shí)分離樣品中的RNA、DNA 和蛋白質(zhì)，但存在分離效率不高和RNA 純度不穩(wěn)定等缺點(diǎn)。RNA 提取試劑盒簡(jiǎn)化操作，減少污染風(fēng)險(xiǎn)，適用于各種樣本，質(zhì)量好可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。改良TRIzol 法和CTAB 法可提高RNA 提取效率和純度，適用于不同樣本特性［14］。

2.1 TRIzol 法提取RNA TRIzol 法是常見(jiàn)的RNA提取方法，最大的特點(diǎn)是TRIzol 試劑含有多組分分離作用，可同時(shí)分離一個(gè)樣品的RNA、DNA、蛋白質(zhì)，但是存在分離效率不高，RNA 純度不穩(wěn)定等缺點(diǎn)［23］。TRIzol 法能夠迅速裂解細(xì)胞釋放出RNA，并且能夠抑制細(xì)胞裂解產(chǎn)生出的核酸酶，從而可保護(hù)RNA 分子的完整性，因此對(duì)純化RNA 及標(biāo)準(zhǔn)化RNA 的生產(chǎn)十分有用［24］。TRIzol 法所使用的試劑，主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA 與蛋白質(zhì)分離，并將RNA 釋放到溶液中。當(dāng)加入氯仿時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA 進(jìn)入水相，離心后形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA 與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA 分離開(kāi)。水相層主要為RNA，有機(jī)層主要為DNA 和蛋白質(zhì)，再通過(guò)乙醇析出DNA，異丙醇沉淀蛋白質(zhì)，即可將RNA 分離。有些人體組織樣本，例如胰腺，富含酶活力容易使RNA產(chǎn)生降解，使用TRIzol 法提取時(shí)需要注意對(duì)原始樣本的處理。魏偉等［25］對(duì)胰腺癌及癌旁組織進(jìn)行優(yōu)化處理，采用組織塊分離剪碎、RNase 清洗及抑制等方法，在液氮研磨后再使用TRIzol法進(jìn)行提取，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)優(yōu)化處理后的組織相較之前很大程度上降低了RNA 的降解程度，為RNA 的表達(dá)檢測(cè)提供高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)樣本，增加了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。綜上，TRIzol法是目前提取RNA 的常用方法，能夠滿(mǎn)足大部分實(shí)驗(yàn)需求，但亦需要根據(jù)樣本類(lèi)型的不同，對(duì)提取步驟進(jìn)行優(yōu)化，減少提取過(guò)程中RNA 出現(xiàn)降解，保證RNA 的質(zhì)量。

2.2 試劑盒法提取RNA 相較于TRIzol 提取法的操作繁瑣、費(fèi)時(shí)、提取率低、易污染、直接接觸有毒的化學(xué)試劑等［26］，RNA 提取試劑盒的出現(xiàn)極大的簡(jiǎn)化了操作步驟，使操作更為簡(jiǎn)便，操作時(shí)間減短，避免了多次換管操作帶來(lái)的Rnase 污染的機(jī)會(huì)［27］。RNA試劑盒通常指用于各種植物、動(dòng)物、微生物的RNA提取的試劑盒，適合RNA 的快速提取。目前，RNA提取試劑盒主要采用膜吸附技術(shù)（離心柱提取法）和磁珠吸附技術(shù)（納米磁珠法），不同的試劑盒在提取效率、時(shí)間、成本等方面存在較大差異，對(duì)RNA 的提取可影響RT-PCR 的檢測(cè)效果，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自身?xiàng)l件及試驗(yàn)?zāi)康暮侠磉x擇性?xún)r(jià)比較高的試劑盒對(duì)臨床樣本進(jìn)行核酸提?。?8］。在RNA質(zhì)量方面，試劑盒與TRIzol法差異并不明顯，李冉冉等對(duì)比了6種試劑盒和TRIzol提取法的相對(duì)提取效率，在所有的提取方法中，綜合考慮RNA的產(chǎn)量、質(zhì)量以及RT-PCR檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)TRIzol 提取法及試劑盒（RNeasy?Mini Kit）提取的RNA 質(zhì)量并無(wú)明顯差異。對(duì)于miRNA，試劑盒法的提取效果略?xún)?yōu)于TRIzol 法。黃學(xué)文等對(duì)miRNA 提取方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)硅膠吸附柱法比TRIzol 法更能有效提高miRNA 的提取效率和純度。綜上，無(wú)論是總RNA 還是miRNA 的提取，使用試劑盒提取的RNA 質(zhì)量完整性好、純度高，可以用于分子生物學(xué)后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.3 其他方法提取RNA 除以上兩種常見(jiàn)的RNA提取方法，亦可以選擇對(duì)TRIzol 法進(jìn)行改良或使用CTAB 法等。由于miRNA 在細(xì)胞中主要以蛋白復(fù)合體的方式存在，TRIzol 法容易造成miRNA 大量丟失。陳雪梅等根據(jù)血漿游離RNA 與蛋白結(jié)合的特性，通過(guò)調(diào)整有機(jī)試劑比例、改變RNA 沉淀時(shí)間等方式，改良了傳統(tǒng)TRIzol法，有效地提高了血漿游離RNA 的得率。CTAB 是一種強(qiáng)變性劑，能溶解細(xì)胞膜和核膜，使核蛋白解聚變性，從而使RNA 得以游離出來(lái)，有些人體生物樣本，如松質(zhì)骨內(nèi)含有大量造血細(xì)胞及脂肪等，富含降解核酸的各種酶分子。因此，很難從細(xì)胞量少、難于裂解的致密結(jié)締組織中提取出完整和純凈的總RNA，趙煥英等通過(guò)對(duì)比TRIzol法、試劑盒法及CTAB法提取人體松質(zhì)骨組織樣本的RNA，發(fā)現(xiàn)用TRIzol 方法提取，不但基因組DNA 很難分離出去，且含有糖蛋白成分，導(dǎo)致獲得的RNA 純度最差。用試劑盒提取RNA 可以去除基因組DNA 污染，但完整性差，從電泳帶及A260/A230比值都證明了仍然有多糖分子殘留，而使用CTAB 法則提取得到了質(zhì)量較高的RNA。由此可知，除傳統(tǒng)TRIzol 法及試劑盒提取法外，根據(jù)樣本的特性選擇其他合適的RNA 提取方法，如改良TRIzol 法、CTAB法也可以得到高質(zhì)量的RNA。

3 人體生物樣本RNA質(zhì)量控制技術(shù)

人體生物樣本RNA 的質(zhì)量控制需要重點(diǎn)關(guān)注濃度、純度、完整度及基因表達(dá)水平這幾個(gè)方面。使用超微量分光光度計(jì)檢測(cè)RNA 的吸光度，ng/μL 為RNA 的濃度單位，A260nm 是核酸最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)，代表該核酸的濃度，A280nm是蛋白和酚類(lèi)物質(zhì)最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)，A230是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長(zhǎng)，A260/A280和A260/A230為RNA 的純度指標(biāo)。A260/A280范圍在1.8～2.0，即表明該樣本RNA為高度純化，A260/A280低于1.8，則提示該樣本可能受到蛋白質(zhì)等污染。RNA 的完整性通常使用RIN值來(lái)表示，使用10～1 反映RNA 完整性程度，10 為完整性最高，1 為降解程度最高；RIN≥7 視為較高質(zhì)量的RNA，可用于基因芯片等的高級(jí)別研究。RIN值可通過(guò)毛細(xì)管凝膠電泳法對(duì)RNA 樣本進(jìn)行檢測(cè)得出，此外如能在電泳中觀察到28S 的條帶亮度為18S 的2 倍，且無(wú)拖帶現(xiàn)象，則也可表明所提取的RNA 基本無(wú)降解，完整性好。值得注意的是，在進(jìn)行毛細(xì)管凝膠電泳法檢測(cè)之前通常需要對(duì)RNA 樣本做變性處理，操作方法是使用PCR 儀對(duì)RNA 樣本進(jìn)行70 ℃，2 min 的加熱后立即在冰上放置5 min 后再進(jìn)行檢測(cè)。除此之外，有些實(shí)驗(yàn)在提取RNA 后，將其反轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行基因擴(kuò)增，觀察期基因表達(dá)水平，以此作為該RNA 質(zhì)量控制指標(biāo)。綜上，RNA 質(zhì)量的考察必須從多方面進(jìn)行，需要關(guān)注其濃度、純度、完整度指標(biāo)，不僅如此，其基因表達(dá)水平也是重要的質(zhì)量控制指標(biāo)。

綜上所述，人體生物樣本預(yù)處理對(duì)RNA 質(zhì)量非常重要，包括控制收集和保存時(shí)間、選擇合適的保存劑以及減少凍融次數(shù)等預(yù)處理方式均與RNA 質(zhì)量有關(guān)。此外，提取方法也是影響RNA 質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，根據(jù)不同生物樣本類(lèi)型選擇合適的提取方法，可以有效提高RNA 質(zhì)量。最后，在評(píng)判RNA 質(zhì)量時(shí)需要關(guān)注濃度、純度、完整度以及基因表達(dá)水平。未來(lái)研究重點(diǎn)和熱點(diǎn)包括改進(jìn)生物樣本預(yù)處理技術(shù)，尋找更加有效的保存劑和提取方法，并且發(fā)展新型的RNA 質(zhì)量評(píng)估指標(biāo)。另外，在基因表達(dá)水平方面也有待深入研究，以更全面地評(píng)價(jià)RNA質(zhì)量。