程海洋 程亮 朱海霞 李娟 魏有海 郭青云

摘 要 從青海省大通縣達(dá)隆村農(nóng)田采集自然感病的植物葉片并分離出真菌菌株，以密花香薷為靶標(biāo)草，通過離體葉片和溫室盆栽試驗(yàn)以及作物安全性評價，篩選獲得1株具有較好除草活性的生防菌DT-XRKA。結(jié)果表明，離體葉片接種DT-XRKA 7 d后，密花香薷葉片上出現(xiàn)產(chǎn)3～4倍于菌餅大小的灰褐色病斑，病斑面積達(dá)到了整個葉片的50%以上，在接種處可見大量灰褐色的菌絲，中心黑色，邊緣褐色，且葉片開始逐漸失綠變黃，病級達(dá)到5級。不同濃度（1.47×101～1.47×104個/mL）的DT-XRKA孢子懸浮液對密花香薷的發(fā)病率達(dá)到67.84%～96.42%，病情指數(shù)為51.11～97.97，鮮質(zhì)量防效達(dá)到52.44%～82.67%。作物安全性評價結(jié)果表明，DT-XRKA菌株孢子懸浮液對油菜、白菜、番茄、黃瓜和辣椒安全。經(jīng)形態(tài)學(xué)特征和rDNA-ITS序列分析將DT-XRKA鑒定為鏈格孢Alternaria alternata。

關(guān)鍵詞 雜草；除草活性；作物安全性；生物防治

密花香薷（Elsholtzia densa Benth.）為唇形科香薷屬1 a生草本植物，別名咳嗽草、野紫蘇、萼果香薷等，是中國重要的蜜源植物和藥用植物，也是提取香精的主要材料之一[1-2]。主要分布于甘肅、青海、西藏及新疆等地，同時也是麥類作物田和油菜田的主要惡性雜草之一[3]。密花香薷的防除多依靠化學(xué)除草劑，但長期、大量使用化學(xué)除草劑，致使農(nóng)田雜草的抗藥性水平迅速提高，已對國內(nèi)農(nóng)田雜草防控和糧食安全造成嚴(yán)重威脅[4]?；谌颦h(huán)境意識和人類健康要求，開發(fā)高效，低毒，無污染的新型除草劑，已成為目前的主要任務(wù)和重中之重。近年來，微生物除草劑因具有對環(huán)境污染小，資源豐富等優(yōu)點(diǎn)[5]，被人們廣泛關(guān)注，且已經(jīng)取得了一定成果。

鏈格孢（Alternaria alternata）可防除的雜草范圍較廣，Siddiqui等[6]將含有107個/mL的? A.alternata分別噴施于2～3葉期和4～5葉期的藜（Chenopodium album），可使藜的生物量顯著降低90%。王禹博[7]將孢子濃度為2.0×106? 個/mL的A. alternata SC-018噴施于1～2葉期的野慈姑（Sagittaria trifolia），能造成90%以上的野慈姑死亡。Bohra等[8]將107和108? 個/mL的A. alternata噴施在10～30 d葉齡的假海馬齒（Trianthema portulacastrum）其植株的死亡率達(dá)到100%。Abbasi等[9]將含有104～105? 個/mL的A. alternata接種于苜蓿（Medicago sativa）幼苗 5 d后，葉片和莖部出現(xiàn)壞死斑，最終導(dǎo)致植株死亡。Kaspary等[10] 將含有106個/mL的A. alternata接種于皺葉酸模（Rumex crispus），葉片出現(xiàn)嚴(yán)重淺棕色斑點(diǎn)，最終變成不規(guī)則的深棕色病變。Mira等[11]將1×106個/mL的A. thunbergiae接種于4～6葉期的翼葉山牽牛（Thunbergia alata）幼苗8 d后，葉片表現(xiàn)出深褐色病斑，并形成大面積壞死區(qū)。Mohammad[12] 將105個/mL的A. alternata孢子懸浮液接種于? 2～3葉期的稗草（Echinochloa crusgalli）幼苗，48 h后葉片出現(xiàn)長條形褐色病斑，并對稗草種子萌發(fā)具有較強(qiáng)的抑制作用。Bozoglu等[13]將? 1×104個/mL的A. crassa分離株EUCC-22081的孢子懸浮液接種于曼陀羅（Datura stramonium）幼苗，15 d后40%的植株死亡。另外，鏈格孢產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物利用方面，A. alternata產(chǎn)生的毒素細(xì)交鏈孢菌酮酸在對惡性雜草馬纓丹（Lantana camara）具有較強(qiáng)的生物殺草活性[14]。Meena等[15]報道將鏈格孢菌株次生代謝產(chǎn)物用于防除銀膠菊（Parthenium hysterophorus），在全濃度培養(yǎng)濾液處理下，對其種子萌發(fā)、幼苗根長和莖長的抑制率達(dá)到27%、51%和45%。Tang等[16]報道將來自Alternaria sp.的毒素Alternariol和Altenuisol在對反枝莧（Amaranthus retroflexus）研究中，當(dāng)濃度達(dá)到1 000 μg/mL時，使其根長減少68.1%和51.0%。

目前，利用鏈格孢菌對密花香薷的除草研究報道較少。僅有朱海霞等[17]初步研制Alternaria tenuissima HZ-1可濕性粉劑，對密花香薷等其他闊葉雜草的除草作用進(jìn)行了研究。然而，本研究以密花香薷為研究對象，評價Alternaria alternata DT-XRKA菌株的除草活性及對作物的安全性，旨在為微生物除草劑開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

病樣采集：2021年7月從青海省大通縣達(dá)隆村采集自然感病的瓜葉葵（Helianthus cucumerifo）植株葉片，將不同病部組織葉片分類裝于? 無菌自封袋中，編號后置于冰箱以4 ℃保存，? 備用。

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL，pH自然，121 ℃滅菌30 min。

雜草和作物種子：密花香薷種子采集于試驗(yàn)地成熟密花香薷植株上。作物種子購買于西寧佳農(nóng)種子有限責(zé)任公司。

試劑：3%次氯酸鈉、75%乙醇和吐溫-80。

1.2 病原菌的分離純化

參照方中達(dá)[18]的方法。從植物葉片的病健交界處切取5 mm×5 mm的小塊組織，依次在75%乙醇中和2%次氯酸鈉水溶液中浸30 s，滅菌水沖洗3次，于PDA培養(yǎng)基上，28 ℃恒溫培養(yǎng)3～5 d，從菌落邊緣挑取少量菌絲再次純化后保存于PDA試管斜面中，備用。

1.3 孢子懸浮液的制備

取PDA上培養(yǎng)7 d的菌株，用移液槍吸取? 5 mL的無菌水轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基平板上，然后用滅菌接種鏟刮取平板菌落于無菌離心管中，并向離心管中補(bǔ)加無菌水至10 mL，擰緊管蓋，搖晃混勻，在振蕩器中充分振蕩，確認(rèn)孢子均勻無明顯分層。然后用紗布過濾，制成孢子懸浮液，并用血球計數(shù)板計數(shù)。

1.4 離體葉片致病性測試

采集新鮮無病蟲密花香薷雜草葉片，用于離體葉片致病性測試。葉片經(jīng)75%乙醇消毒處理并晾干后正面向上置于墊有2層無菌濾紙的培養(yǎng)皿中（d＝9 cm），加無菌水1.5 mL濕潤濾紙，將d=8 mm的菌餅菌絲生長旺盛的一側(cè)緊貼葉片正面，以接無菌的PDA培養(yǎng)基塊為對照，每處理重復(fù)3次。置于25 ℃光照培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)，接種7 d后調(diào)查葉片發(fā)病情況。參照文獻(xiàn)[19]按如下標(biāo)準(zhǔn)記載發(fā)病情況：1級，無病或者幾乎無??；? 2級，葉片上出現(xiàn)少量的病斑（病斑面積少于總?cè)~面積的1/3）；3級，病斑面積占總?cè)~面積的1/3～? 1/2；4級，病斑面積占總?cè)~面積的1/2～2/3；? 5級，葉片幾乎全部發(fā)病。

1.5 溫室盆栽試驗(yàn)測試

密花香薷種子用1%的 NaClO消毒3 min，無菌水沖洗3次，25 ℃催芽至露白，播種于營養(yǎng)缽中，每盆30株，出苗后保留20株。待密花香薷幼苗長出 4～6片真葉后，噴霧接種各真菌菌株孢子懸浮液（濃度為104個/mL，含0.5 mL吐溫-80），接種量為30 mL/盆。以清水加0.5 mL吐? 溫-80作為對照。每處理重復(fù)3次。接種后幼苗置于溫度（25±1） ℃，RH（60±10）%，光周期L/D=16 h/8 h環(huán)境下，常規(guī)方式管理。于接種后7 d觀察發(fā)病情況，計算發(fā)病率、病情指數(shù)和鮮質(zhì)量防效。參照文獻(xiàn)[19]進(jìn)行病情分級。1級，無病或者幾乎沒有?。?級，葉片上有零星的斑點(diǎn)；3級，1/4以上的葉片出現(xiàn)病斑，植株生長受到抑制；4級，2/3以上的葉片出現(xiàn)病斑，植株生長受到嚴(yán)重抑制；5級，3/4以上的葉片出現(xiàn)病斑，植株將近死亡或死亡。

發(fā)病率=發(fā)病植株數(shù)/調(diào)查植株總數(shù)×100%

病情指數(shù)=Σ（病級株數(shù)×對應(yīng)級數(shù)）/（調(diào)查總株數(shù)×最高級值）×100

鮮質(zhì)量防效=（對照組鮮質(zhì)量-處理組鮮質(zhì)量）/對照組鮮質(zhì)量×100%

1.6 不同濃度的菌株DT-XRKA孢子懸浮液對密花香薷的致病性測定

利用“1.3”中的方法配備菌株DT-XRKA孢子懸浮液，然后梯度稀釋至濃度為1.47×101、? 1.47×102、1.47×103個/mL以及1.47×104個/mL的孢子懸浮液。參照“1.5”的方法對密花香薷進(jìn)行致病性測定。

1.7 作物安全性評價

將作物種子用1%的NaClO消毒后，25 ℃催芽至露白，播種于培養(yǎng)缽中，每缽點(diǎn)播20粒種子，覆土厚度約為1 cm。待長至3～4葉期時，用濃度為1.47×104個/mL的DT-XRKA孢子懸浮液接種，接種量為30 mL/盆。每個處理重復(fù)? 3次，對照組以清水加0.5 mL吐溫-80進(jìn)行噴施。接種后將幼苗置于溫度（25±1） ℃，RH? （60±10）%，光周期L/D＝16 h/8 h環(huán)境下，常規(guī)方式管理。接種7 d后觀察作物發(fā)病情況，計算發(fā)病率和病情指數(shù)。病情分級標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[20]并稍加修改。1級：無癥狀，植株葉片無任何病斑；? 2級：輕微反應(yīng)，植株葉片上有零星病斑分布；? 3級：中等感病，植株1/4～1/2的葉片死亡，生長受抑制；4級：嚴(yán)重感病，植株1/2～3/4葉片死亡，生長較嚴(yán)重受抑制。當(dāng)0≤病情指數(shù)＜5時，安全性等級為安全無癥狀（no symptom，NS）；當(dāng)5≤病情指數(shù)＜10時，安全性等級為輕微反應(yīng)（lightly susceptible，LS）；當(dāng)10≤病情指? 數(shù)＜50時，安全性等級為中等感?。╩oderately susceptible，MS）；當(dāng)病情指數(shù)＞50時，安全性等級為嚴(yán)重感?。╯everely susceptible，SS）。

1.8 病原菌的鑒定

1.8.1 形態(tài)學(xué)鑒定 將菌株DT-XRKA在PDA平板培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中觀察菌落形態(tài)，在光學(xué)顯微鏡下觀察菌絲和分生孢子以及是否在PDA培養(yǎng)基上產(chǎn)生色素沉著，同時參考《真菌鑒定手冊》對其進(jìn)行鑒定[21]。

1.8.2 分子生物學(xué)鑒定 DT-XRKA采用真菌DNA提取試劑盒提取其菌株DT-XRKA基因組DNA，分別采用引物ITS1/ITS4和Alt a 1-F/Alt a 1-R（表1）對該菌株基因組的核糖體DNA內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS）和鏈格孢菌過敏原基因（Alt a1）基因序列進(jìn)行擴(kuò)增。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。25 μL反應(yīng)體系：2×PCR? Master Mix12.5 μL、10 μmol/L上、下游引物各1.0 μL、50 ng/μL DNA模板1.0 μL、ddH2O補(bǔ)足25 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，57 ℃退火30 s，72 ℃延伸90 s，共30個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，陽性樣品送至生工生物工程（上海）股份有限公司測序，將測序所得序列提交GenBank并進(jìn)行BLAST序列同源性比對，采用MEGA 7.0軟件以鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，進(jìn)行1 000次bootstraps檢驗(yàn)，比較生防菌株與其他近緣菌株的親緣關(guān)系。

1.9 數(shù)據(jù)分析

利用SPSS 18.0軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 離體葉片致病性測定結(jié)果

采用組織分離法，從自然感病的植物葉片中分離獲得真菌7株，編號分別為DT-04A2、DT-YSB1、DT-XRKA、DT-DYLC、DT-14A2、DT-08C和DT-QKBD004A。以密花香薷為靶標(biāo)雜草，采用離體葉片法對7株真菌進(jìn)行致病性測定。菌餅致病性測定結(jié)果表明：接種7 d后，7株菌株對密花香薷離體葉片均表現(xiàn)不同的致病性。菌株DT-DYLC接種后，接種部位出現(xiàn)褐色病斑并向外逐步擴(kuò)展，中心腐爛，有明顯的褐色輪紋病斑，病斑覆蓋面積占整個葉面積的40%左右，病級為4級。菌株DT-XRKA接種后，接種部位中心黑色，邊緣褐色，并逐步向菌餅四周呈放射狀擴(kuò)散，病斑面積達(dá)到菌餅的3～4倍，發(fā)病面積占葉面積50%以上，病級為5級。菌株DT-YSB1、DT-QKBD004A、DT-08C和DT-14A2接種后，接種部位逐步變黃失綠，菌絲開始逐步侵染，接種部位出現(xiàn)褐色病斑，并逐漸向外擴(kuò)展，病斑面積為菌餅大小，病級為2級。菌株DT-04A2接種后，葉片出現(xiàn)少量的不規(guī)則病斑，病級為1級。

2.2 溫室盆栽防效結(jié)果

如圖1所示，噴施DT-DYLC菌株孢子懸浮液后7 d，密花香薷上部植株葉片出現(xiàn)病斑，生長受到抑制。發(fā)病率為69.38%。噴施DT-XRKA菌株孢子懸浮液后，密花香薷葉片由葉緣向中心，逐步出現(xiàn)深淺不一的褐色病斑，植株下部葉片布滿病斑部分植株發(fā)病枯死，生長受到嚴(yán)重抑制。接種7 d后，3/4以上的葉片出現(xiàn)深褐色病斑，發(fā)病率為88.97%。噴施DT-QKBD004A和DT-08C菌株孢子懸浮液后，葉尖部分發(fā)病枯萎植株出現(xiàn)萎蔫現(xiàn)象，生長受到抑制。發(fā)病率為? 55.82%和58.33%。噴施DT-YSB1和DT-04A2菌株孢子懸浮液后，植株葉片出現(xiàn)零星的斑點(diǎn)，對密花香薷的致病作用不明顯。發(fā)病率僅為19.89%和33.51%。噴施DT-14A2菌株孢子懸浮液后，密花香薷葉片出現(xiàn)零星病斑，病斑面積逐步擴(kuò)展，7 d后，2/3以上的葉片出現(xiàn)病斑，植株生長受到嚴(yán)重抑制。發(fā)病率為80.54%。

結(jié)合發(fā)病率、病情指數(shù)和鮮質(zhì)量防效綜合分析（表2），接種7株菌株孢子懸浮液對密花香薷致病力不同。菌株DT-XRKA、DT-14A2與DT-DYLC、DT-08C、DT-QKBD004A、DT-04A2、和DT-YSB1發(fā)病率和病情指數(shù)相比，差異顯著? （P＜0.05），鮮質(zhì)量防效菌株DT-XRKA與其他5株菌株相比差異顯著（P＜0.05）。綜上，由離體葉片致病性和盆栽致病性測試結(jié)果發(fā)現(xiàn)，7株菌株對密花香薷的致病性高低排序?yàn)椋篋T-XRKA＞DT-14A2＞DT-DYLC＞DT-08C＞DT-QKBD004A＞DT-04A2＞DT-YSB1，篩選出對密花香薷致病性最好的菌株為DT-XRKA。在接下來的試驗(yàn)中，將以菌株DT-XRKA作為防除密花香薷的優(yōu)勢菌株，進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)研究。

2.3 菌株DT-XRKA不同孢子懸浮液濃度對密花香薷的盆栽防效

由圖2可見，噴施菌株DT-XRKA孢子懸浮液7 d后，?? 1.47×104個/mL濃度處理的密花香薷植株將近全部死亡。孢子懸浮液濃度為? 1.47×103個/mL處理的植株葉片發(fā)黃，莖稈倒伏，發(fā)病部位主要集中于根部和中部葉片，3/4以上植株發(fā)病枯死，植株生長受到嚴(yán)重抑制。? 1.47×102個/mL濃度處理的植株有部分葉片出現(xiàn)褐色病斑并有逐步擴(kuò)大跡象，部分葉片出現(xiàn)卷曲死亡現(xiàn)象并伴隨倒伏，生長受到抑制。而? 1.47×101個/mL孢子懸浮液濃度處理的幼苗部分葉片失綠，發(fā)病枯萎，1/4上的葉片出現(xiàn)斑點(diǎn)，有倒伏現(xiàn)象，生長受到抑制。

由表3可見，1.47×104個/mL濃度孢子懸浮液對密花香薷發(fā)病率、病情指數(shù)和鮮質(zhì)量防效分別達(dá)96.42%、97.97和? 82.67%，1.47×101個/mL孢子懸浮液對密花香薷的發(fā)病率、病情指數(shù)和鮮質(zhì)量防效分別為? 67.84%、51.11和? 52.44%。1.47×104個/mL處理的發(fā)病率與其他3個濃度處理相比，達(dá)到顯著差異（P＜0.05）。在病情指數(shù)和鮮質(zhì)量防效比較，1.47×104? 個/mL與1.47×102個/mL和? 1.47×101個/mL處理相比，達(dá)到顯著差異（P＜? 0.05）。

2.4 作物安全性測試

將濃度為1.47×104個/mL的菌株DT-XRKA孢子懸浮液噴在測試作物上，接種7 d后，調(diào)查作物的發(fā)病情況，結(jié)果如圖3和表4所示。油菜與對照相比，在長勢和葉色上均無癥狀，植株葉片無任何病斑發(fā)病率和病情指數(shù)為0，安全等級為NS；豌豆和蠶豆有輕微卷葉現(xiàn)象，植株葉片上有零星病斑分布，發(fā)病率為10.73%和10.16%，安全等級為MS；對小麥和青稞有輕微的致病性，在接種的葉片頂端有少量梭形黃斑，葉片有輕微發(fā)黃現(xiàn)象，后期病斑不擴(kuò)展，發(fā)病率為19.45%和30.55%，安全等級為MS；玉米與對照相比，葉尖部位有少量梭形黃斑，葉片有輕微卷葉現(xiàn)象，后期病斑不擴(kuò)展，發(fā)病率和病情指數(shù)為5.76%和? 9.77，安全等級為LS；白菜、番茄、黃瓜和辣椒與對照相比，在長勢和葉色上均無癥狀，植株葉片無任何病斑發(fā)病率和病情指數(shù)為0，安全等級為NS；菠菜植株1/2以上的葉片出現(xiàn)病斑，葉片失綠變黃，植株生長受到抑制，發(fā)病率和病情指數(shù)為53.18%和51.46，安全等級為SS；蘿卜植株3/4以上的葉片出現(xiàn)病斑，植株生長受到嚴(yán)重抑制，發(fā)病率和病情指數(shù)為72.63%和74.18，安全等級為SS。

2.5 病原菌鑒定

2.5.1 形態(tài)學(xué)鑒定 菌株在 PDA培養(yǎng)基上，菌落白色，中間褐色，背面中間灰褐色，邊緣不規(guī)則，呈放射狀，稀松，菌落表面凹凸不平，菌絲毛絨狀，質(zhì)地較?。▓D4-a）。菌絲灰白色，具橫隔膜，有分支（圖4-b）。分生孢子褐色，倒棍棒狀，具3～6個橫隔膜，1～3個豎隔膜，長10～30 μm，寬2～6 μm（圖4-c）。根據(jù)形態(tài)學(xué)特征，將分離的病原菌初步鑒定為鏈格孢屬Alternaria sp.。

2.5.2 分子生物學(xué)鑒定 擴(kuò)增獲得DT-XRKA菌株的ITS和Alt a1序列長度分別為545 bp和422 bp，GenBank登錄號為OP404082和OP413739?；贗TS基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果表明，DT-XRKA菌株與多株Alternaria alternata相似性達(dá)到99%，并與登錄號為OP161643.1和ON827299.1的Alternaria alternata系統(tǒng)發(fā)育樹的最小分支（圖5-A）?；贏lt a1基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果表明，DT-XRKA菌株與登錄號為MW308146.1的處于系統(tǒng)發(fā)育樹的同一最小分支（圖5-B）。結(jié)合其形態(tài)學(xué)特征及基于ITS基因序列的系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果，將DT-XRKA鑒定為鏈格孢菌（Alternaria alternata），命名為A. alternata DT-XRKA。

3 結(jié)論與討論

開發(fā)和利用微生物資源作為生物除草劑，是微生物研究的重要目的之一[22]。植物病原菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物在雜草防治中發(fā)揮著巨大的作用，從植物病原菌中生產(chǎn)生物除草劑是已被證實(shí)控制雜草最有效的方法之一[23]。TeA是從Alternaria屬和其他致病菌分離研制而出的微乳液，主要用來防除紫荊澤蘭、馬唐草、反枝莧和旱蓮等多種植物，具有較高的除草活性[24]。CASST是從Alternaria cassiae J.和A. Khan配置的制劑，對于控制大豆和花生作物田中的決明子效果顯著[25]。另外將狹卵鏈格孢菌AAEC05和莧鏈格孢菌-3等比例混合成孢子粉，對大豆田中四葉齡以下的稗草和反枝莧的防除效果可達(dá)到70%[26]。本研究以密花香薷作為靶標(biāo)雜草通過離體葉片測定進(jìn)行初篩，從7株真菌中篩選到具有生防潛力的1株真菌，然后通過盆栽試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)篩，篩選到1株對密花香薷防除效果較好的菌株DT-XRKA，該菌株對密花香薷的鮮質(zhì)量防效達(dá)到? 85.99%。

確定使用范圍是高效開發(fā)生物除草劑的重要步驟[27]。除草劑候選菌株的主要標(biāo)準(zhǔn)是對廣泛的雜草具有致病性，同時對作物具有安全性[28]。本研究對測試作物進(jìn)行安全性評價發(fā)現(xiàn)菌株DT-XRKA孢子懸浮液對油菜、白菜、番茄、黃瓜和辣椒安全，可以在以密花香薷為優(yōu)勢雜草的黃瓜、十字花科和茄科田中安全使用。然而本研究僅對12種作物進(jìn)行了安全性評價，下一步有必要對其他作物的安全性進(jìn)行研究，以確定其安全性水平和寄主范圍。

Alternaria物種由于其世界性的性質(zhì)和對大量植物引起疾病的能力，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中變得越來越具有重要的意義[29]。已報道用于農(nóng)田雜草防除的鏈格孢菌種類主要有A. sonchi、A. alternata、A. pellucida、A. macrospora以及? A.cassiae等[30-33]。本研究通過形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)鑒定，最終確定菌株DT-XRKA為Alternaria alternata。

微生物對寄主雜草的生物防治能力受生理、形態(tài)、生態(tài)相互作用和環(huán)境因素的影響[34]。本研究在控制環(huán)境下對菌株DT-XRKA的生物防治效果進(jìn)行了評價，但是還需要進(jìn)一步研究菌株DT-XRKA作為生物除草劑的潛力，包括田間藥效評價和環(huán)境因素對病原菌鏈格孢菌防治雜草作用的影響。

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Herbicidal? Activity and Crop Safety of Alternaria alternata DT-XRKA

Abstract Fungal strains were isolated from the leaves? of naturally diseased plants collected from the farmland of Dalong village，Datong county，Qinghai? province. Among these strains，the antagonistic strain DT-XRKA exhibited effective herbicidal activities against Elsholtzia densa through detached leaves，greenhouse pot experiments，and crop safety evaluation. The results showed that grayish-black patches covering more than 50% of leaf area appeared on the detached leaves after 7 days inoculation，resulting in 3-4 times more than fungus plugs. Massive grayish-black hyphae with concentric blackish and brown margins were observed at the inoculation sites. As the disease progressed，chlorosis and the yellowish area increased，reaching a disease grade of 5. The spore suspension of strain DT-XRKA，with different concentrations ranging from 1.47×101? to? 1.47×104 spores/mL，exhibied an incidence rate of 67.84% to 96.42%，a disease index ranging from 51.11 to 97.97，and a fresh? mass? control effect between 52.44% and 82.67%. Crop safety evaluation of strain DT-XRKA showed that its spore suspension was safe to rape，cabbage，tomato，cucumber and pepper. DT-XRKA was identified as Alternaria alternata by? morphology and rDNA-ITS sequence analysis.

Key words Weeds; Herbicidal activity; Crop safety; Biological control