畢珂瑤,李赫妍,蘇景超,陶樹琴,唐巍

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué),合肥 230038;2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)針灸經(jīng)絡(luò)研究所,合肥 230012)

血管性癡呆(vascular dementia, VD)是由腦血管受損引起的一種以慢性進(jìn)行性認(rèn)知能力下降為特征的功能障礙綜合征[1]?；颊叨啾憩F(xiàn)為記憶功能、計算能力、人格、情緒情感、視空間能力等一系列的精神活動受損,執(zhí)行功能障礙,信息處理速度遲緩。繼阿爾茨海默病之后,VD是世界上最普遍的癡呆原因之一,約占所有癡呆癥的20%,且發(fā)病率不斷攀升[2]。目前,針灸被廣泛應(yīng)用于VD的臨床治療,且療效顯著[3-6]。針刺還可抑制慢性腦灌注不足導(dǎo)致的氧化損傷與炎癥反應(yīng),提升體內(nèi)抗氧化物水平,降低炎性因子表達(dá),抑制神經(jīng)損傷[7]。其中,電針通過電流對特定穴位產(chǎn)生刺激,起到改善腦血管損傷并促進(jìn)認(rèn)知恢復(fù)的作用[8],對VD治療效果顯著,安全性高且不良反應(yīng)小,可控性高于單純針刺[9]。大量醫(yī)學(xué)研究[10]均表明,磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)/哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)通路在控制血管生成、調(diào)節(jié)神經(jīng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖、代謝和凋亡等多種生理作用過程活動中發(fā)揮不可被忽視的作用,參與缺血性腦損傷、神經(jīng)退行性疾病等一系列腦部疾病的發(fā)生發(fā)展。PI3K/AKT/mTOR信號通路由針刺激活后,可促進(jìn)卒中大鼠血管、神經(jīng)元和突觸的再生,保護(hù)神經(jīng)血管單元[11]。但電針是否能通過調(diào)控PI3K/AKT/mTOR信號通路而改善VD患者海馬神經(jīng)元損傷還需進(jìn)一步證實(shí)。本研究基于PI3K/AKT/mTOR通路,探討電針百會與足三里對VD大鼠的海馬神經(jīng)功能異常的改善作用以及可否降低體內(nèi)炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激水平,為臨床電針治療VD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

選取12～15周齡清潔級雄性SD大鼠45只,體質(zhì)量為(250±20)g,購自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動物繁育有限公司,實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(魯)2019-0003。飼養(yǎng)環(huán)境為(23±3)℃、濕度45%～55%,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,術(shù)前禁食不禁水。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會批準(zhǔn)(倫理號為AHUCM-rats-2021096)。

1.2 主要試劑和儀器

大鼠白介素6(intertleukin 6, IL-6)(JYM0646Ra,南京建成生物工程研究院)、IL-1β(interleukin 1β, IL-1β)(JYM0419Ra,南京建成生物工程研究院)、大鼠谷胱甘肽-過氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(JYM1138Ra,南京建成生物工程研究院)、丙二醛(malonaldehyde, MDA)(A003-1-1,南京建成生物工程研究院)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)(A001-3-1,南京建成生物工程研究院)檢測試劑盒、Nissl染色試劑盒(焦油紫法)(B031,上海碧云天生物技術(shù)有限公司)、RIPA細(xì)胞裂解液(強(qiáng))(P0013B,上海碧云天生物技術(shù)有限公司)、一抗二抗去除液(P0025,上海碧云天生物技術(shù)有限公司)、山羊抗兔IgG(ZB-2301,北京中杉金橋生物有限公司)、預(yù)染蛋白Marker(26616,美國Thermo)、ECL(enhanced chemi luminescence, ECL)超敏發(fā)光試劑盒(340958,美國Thermo)、PI3K(ab86714,英國Abcam)、p-PI3K(ab182651,英國Abcam)、AKT(4691s,美國CST)、p-AKT(4060s,美國CST)、mTOR(2972s,美國CST)、p-mTOR(5536s,美國CST)、兔抗和辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗(ZB-2301,北京中杉金橋生物有限公司)、抗小鼠/兔二步法檢測試劑盒(B001,安徽欣樂生物技術(shù)有限公司)、DAB顯色試劑盒(B011,安徽欣樂生物技術(shù)有限公司)。一次性使用針灸針(0.25 mm×13 mm,蘇州天協(xié)針灸器械有限公司)、華佗牌SDZ-Ⅴ型多功能電針治療儀(蘇州醫(yī)療用品廠有限公司)、UV-1800型紫外可見分光光度計(上海菁華科技儀器有限公司)、CX41型顯微鏡(日本OLYMPUS)、EPS300型電泳儀、VE-186型轉(zhuǎn)膜儀(上海天能科技有限公司,Tanon)、JS-1070P型自動曝光儀(上海培清科技有限公司)。

1.3 造模方法及分組

隨機(jī)選取30只大鼠使用雙側(cè)頸動脈結(jié)扎法(2-VO)制備VD大鼠模型[12]。大鼠進(jìn)行麻醉后正中切開頸部皮膚,鈍性分離出雙側(cè)頸動脈,仔細(xì)剝離其迷走神經(jīng)。將清理過的雙側(cè)頸總動脈用5-0絲線雙重結(jié)扎,縫合后為預(yù)防感染,使用碘伏消毒。造模后第3天開始水迷宮試驗(yàn),每日4次,每次2 min,共5 d。測試第3天,開始記錄成績,如測試第5天,逃避潛伏期仍超過20 s即定為血管性癡呆模型[13]。造模成功后,將這30只大鼠隨機(jī)分為模型組、電針組,每組15只。剩余15只大鼠為假手術(shù)組,僅分離頸動脈不結(jié)扎。

1.4 干預(yù)方法

造模成功后第3天對電針組大鼠進(jìn)行治療。參考華興邦《大鼠穴位圖譜的研制》[14],電針大鼠負(fù)極“百會”(頂骨正中,向后斜刺3～4 mm)、右單側(cè)正極“足三里”(膝關(guān)節(jié)后外側(cè),在腓骨小頭下約5 mm處,左右各一穴,直刺7 mm)。為防止大鼠掙扎時電針脫落,使用大鼠平板式固定器將其固定。電針頻率4 Hz/ 20 Hz,強(qiáng)度1～2 mA,以大鼠安靜耐受為度,電針20 min;每日1次,連續(xù)2周,第7天和第14天間斷治療。其余組不進(jìn)行電針治療,相同時間給予等量捉抓刺激。

1.5 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)

電針治療結(jié)束后第2天,各組大鼠同時進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)。水迷宮選用直徑150 cm、深度50 cm、水深30 cm的圓形黑色水池。將水池等分為4個象限,將1個直徑為10 cm的透明平臺放置于其中一象限。將水池注滿水,確保平臺高于水面1 cm,讓水溫平衡至室溫。前4 d為定向航行實(shí)驗(yàn),將大鼠隨機(jī)由剩余3個象限入水,登上平臺停留10 s記為尋臺成功,逃避潛伏期記為大鼠入水至尋臺成功的時間;若大鼠尋臺時間超出60 s,則人工將其放置平臺上停留10 s,記錄逃避潛伏期為60 s。第5天為空間探索實(shí)驗(yàn),平臺撤除后,在剩余3個象限內(nèi),將大鼠隨機(jī)入水,在60 s內(nèi),記錄大鼠首次穿越原平臺的時間。

1.6 取材與指標(biāo)檢測

水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠,將麻醉后大鼠仰臥固定,做腹正中縱切口,分離腸管,暴露腹主動脈,從腹主動脈采血。每組取5只大鼠的海馬雙側(cè)組織由4%多聚甲醛進(jìn)行固定,其余海馬組織-80 ℃冰箱進(jìn)行保存。

1.6.1 Nissl染色法觀察海馬區(qū)神經(jīng)元狀態(tài)

將海馬切片固定包埋后脫蠟沖洗,浸染于56 ℃焦油紫染液中。沖洗干凈后再將其靜置于Nissl分化液中浸泡數(shù)秒(背景接近于無色時停止分化)。脫水后二甲苯透明后封片。光學(xué)顯微鏡下觀察,尼氏體示紫色、細(xì)胞核示淡紫色。

1.6.2 酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測血清GSH-Px、IL-1β和IL-6含量

抽取的大鼠腹主動脈血于室溫下放置15 min后,3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心20 min,分離上清液,參考GSH-Px和IL-1β、IL-6 酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒的使用說明書,采用波長450 nm酶標(biāo)儀讀取,得到標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和吸光度值后,制成吸光度值標(biāo)準(zhǔn)曲線,使用得出的公式計算IL-1β、IL-6和GSH-Px的含量。

1.6.3 生化檢測法檢測海馬區(qū)MDA和SOD含量

根據(jù)化學(xué)檢測試劑盒說明書進(jìn)行腦勻漿的制備及測定。將各組大鼠斷頭取腦后稱得海馬重量,加入符合比例的預(yù)冷生理鹽水(4 ℃),將組織勻漿器勻漿出的勻漿液以3 000 r/min離心10 min,冷凍保存上清液制成10%的組織勻漿。參考MDA、SOD試劑盒說明書分別對勻漿中MDA和SOD含量進(jìn)行測定。MDA檢測將0.5 mL離心管中加入0.2 mL MDA工作液和0.1 mL上清液,蓋上管蓋,蓋上用針扎一小孔,旋渦混勻器混勻,95 ℃水浴40 min后,沖洗冷卻,3 500～4 000 r/min離心10 min,測量上清液532 nm處吸光度。SOD檢測將配制后的工作液加入樣品中,混合均勻,37 ℃孵育20 min,450 nm處酶標(biāo)儀讀數(shù)。

1.6.4 Western blot法檢測海馬組織中PI3K、AKT、mTOR、p-PI3K、p-AKT及p-mTOR蛋白表達(dá)水平

裂解海馬組織,提取總蛋白,BCA蛋白定量,對提取總蛋白進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)、轉(zhuǎn)膜、抗體封閉,加入GAPDH、PI3K、AKT、mTOR、p-PI3K、p-AKT及p-mTOR一抗工作液(除p-AKT1:2 000外,其余均為1:1 000),在4 ℃下孵育過夜。以二抗(1:20 000)室溫孵育l.2 h后,ECL發(fā)光試劑盒檢測,凝膠成像儀拍照,GAPDH作為內(nèi)參,Image J軟件進(jìn)行條帶灰度值的分析。

1.6.5 免疫組化法檢測海馬區(qū)mTOR陽性表達(dá)水平

取上述制備好的海馬切片,固定包埋后脫蠟沖洗,高壓修復(fù)抗原后,室溫在3% H2O2溶液中孵育,PBST沖洗3次。滴入山羊血清,37 ℃封閉20 min。滴加一抗mTOR(1:500),4 ℃緩慢搖動孵育過夜。PBST沖洗3次。滴入二抗,37 ℃孵育20 min,PBST沖洗3次。DAB顯色后蘇木素溶液復(fù)染,脫水后封片,光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果。使用Image-Pro Plus軟件分析海馬區(qū)mTOR免疫組化染色的平均光密度。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS22.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,多組比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)(方差齊時)或Dunnett’s T3(方差不齊時);不符合正態(tài)分布比較采用秩和檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組大鼠空間記憶和學(xué)習(xí)能力比較

與假手術(shù)組比較,模型組逃避潛伏期和空間探索首次跨越秒數(shù)明顯延長(P＜0.01);與模型組比較,電針組逃避潛伏期和空間探索首次跨越秒數(shù)明顯縮短(P＜0.01)。詳見表1。

表1 3組大鼠平均潛伏期比較(±s) 單位:s

表1 3組大鼠平均潛伏期比較(±s) 單位:s

注:與假手術(shù)組比較1)P＜0.01;與模型組比較2)P＜0.01。

組別 n 逃避潛伏期 首次跨越時間假手術(shù)組 15 21.37±3.62 13.39±2.17模型組 15 42.15±6.771) 46.72±8.621)電針組 15 31.61±4.672) 25.25±5.872)

2.2 3組大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)比較

Nissl染色結(jié)果可見,假手術(shù)組神經(jīng)細(xì)胞無明顯損傷,尼氏小體清晰可見。與假手術(shù)組比較,模型組大鼠神經(jīng)細(xì)胞緊縮,呈空泡性,尼氏小體溶解破碎,數(shù)量減少,胞漿深染。與模型組比較,電針組尼氏小體數(shù)量增多,細(xì)胞固縮減少溶解破碎減輕且形態(tài)較好。詳見圖1。

圖1 3組大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)比較(×400)

2.3 3組大鼠血清IL-1β、IL-6和GSH-Px含量比較

與假手術(shù)組比較,模型組大鼠血清因子IL-1β和IL-6含量顯著升高(P＜0.01),GSH-Px含量顯著下降(P＜0.01),與模型組比較,電針組大鼠血清LL-1β和IL-6含量顯著降低(P＜0.01),GSH-Px含量顯著升高(P＜0.01)。詳見圖2。

圖2 3組大鼠血清IL-1β、IL-6和GSH-Px含量比較(±s, n＝15)

2.4 3組大鼠海馬MDA和SOD含量比較

與假手術(shù)組比較,模型組大鼠海馬區(qū)MDA含量顯著升高,SOD含量顯著下降(P＜0.01)。與模型組比較,電針干預(yù)組大鼠海馬區(qū)MDA含量顯著下降(P＜0.01),SOD含量顯著升高(P＜0.01)。詳見圖3。

圖3 3組大鼠海馬MDA和SOD含量比較(±s, n＝10)

2.5 3組大鼠海馬區(qū)p-PI3K、p-AKT及p-mTOR蛋白表達(dá)水平比較

與假手術(shù)組比較,模型組大鼠海馬區(qū)p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表達(dá)水平顯著降低(P＜0.01)。與模型組比較,電針組大鼠海馬區(qū)p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表達(dá)水平顯著升高(P＜0.01)。詳見圖4。

圖4 3組大鼠海馬組織中p-PI3K、p-AKT及p-mTOR蛋白表達(dá)水平比較(±s, n＝10)

2.6 3組大鼠海馬組織mTOR蛋白表達(dá)比較

鏡下可見,mTOR在免疫組織化學(xué)染色后顯示為棕色或淺黃色,位于細(xì)胞質(zhì)中。mTOR蛋白陽性表達(dá)在假手術(shù)組大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞散在可見。與假手術(shù)組比較,模型組mTOR的蛋白表達(dá)下降(P＜0.01);與模型組比較,電針組mTOR蛋白表達(dá)上升(P＜0.01)。詳見圖5。

圖5 3組大鼠海馬組織mTOR表達(dá)比較(×500,±s, n＝5)

3 討論

血管性癡呆(VD)屬中醫(yī)學(xué)“癡呆”范疇,疾病表現(xiàn)為本虛標(biāo)實(shí),虛實(shí)夾雜,其本為腎精不足,以致腦失滋養(yǎng),腦髓空虛,其標(biāo)為氣血津液逆亂,以致痰濁蒙竅,瘀阻腦絡(luò)。標(biāo)本錯雜交互,互為因果。督脈和足陽明胃經(jīng)皆循行于腦?！鹅`樞·經(jīng)脈》:“胃足陽明之脈……循發(fā)際,至額顱。”《素問·骨空論》:“督脈者……上額交巔上,入絡(luò)腦?！彼^經(jīng)脈所過,主治所及。督脈為“陽脈之海”,上絡(luò)于腦,可補(bǔ)腦髓之充盈。百會位于巔頂,屬督脈之要穴,為百脈之會,素有醒神益智、充養(yǎng)腦髓之效;足三里屬足陽明胃經(jīng)要穴,可補(bǔ)后天之脾胃以滋先天之腎精。故本實(shí)驗(yàn)選取足三里與百會相配可達(dá)到標(biāo)本兼治、養(yǎng)精益髓、清濁開竅之效。VD若經(jīng)過早期有效的治療,具有一定可逆性[15]。

近年來研究[16]表明,針刺可從多方面改善VD病理進(jìn)程,抑制大腦神經(jīng)元的凋亡,緩解腦損傷后的氧化應(yīng)激和神經(jīng)元炎性損傷,調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)和葡萄糖的代謝,一定程度提升認(rèn)知功能,恢復(fù)大腦血管功能和突觸可塑性。其中,有學(xué)者認(rèn)為血管病變會導(dǎo)致認(rèn)知能力下降[17],VD大鼠多伴有認(rèn)知和記憶障礙。由游離核糖體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)構(gòu)成的尼氏小體位于神經(jīng)元的胞體和樹突內(nèi),是神經(jīng)元功能狀態(tài)的參考標(biāo)志[18]。VD大鼠的血管損傷是神經(jīng)元損失和突觸解體的主要原因,導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)評分降低并增加梗塞體積、DNA損傷和神經(jīng)元凋亡[19]。SHANG N等[20]發(fā)現(xiàn)長期鋁暴露導(dǎo)致神經(jīng)毒性積累和神經(jīng)細(xì)胞壞死誘發(fā)的認(rèn)知障礙,可以通過上調(diào)PI3K/AKT/mTOR通路緩解,mTOR活性是發(fā)揮該通路作用的關(guān)鍵因素。PI3K/AKT/mTOR是由PI3K和其下游分子絲氨酸/蘇氨酸AKT組成的重要通路[21]。激活的PI3K在細(xì)胞膜上產(chǎn)生第二信使磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸,在細(xì)胞中與AKT結(jié)合。AKT由細(xì)胞膜轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)內(nèi)部,被磷酸化和激活,隨后其再磷酸化細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的一系列底物,其中mTOR是最重要的底物之一[22]。磷酸化的mTOR可直接反應(yīng)mTOR的活性,mTOR可作用于下游的諸多因子并且調(diào)節(jié)機(jī)體多種細(xì)胞過程,如細(xì)胞自噬、細(xì)胞周期、細(xì)胞存活、細(xì)胞生長等[23]。有研究[24]發(fā)現(xiàn)雷帕霉素可能通過調(diào)控PI3K/ AKT/mTOR信號通路抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡和促進(jìn)線粒體吞噬而發(fā)揮改善血管性癡呆后的認(rèn)知障礙作用。CHEN S等[25]研究發(fā)現(xiàn),通過apoE模擬肽激活腦出血小鼠髓系細(xì)胞觸發(fā)受體,調(diào)控下游靶點(diǎn)PI3K/AKT信號通路,可抑制神經(jīng)炎癥和細(xì)胞凋亡。本研究Nssil染色結(jié)果可見,VD大鼠神經(jīng)細(xì)胞固縮,尼氏小體破碎溶解;電針后神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)得到明顯改善,尼氏小體清晰可見且數(shù)量增多,表明大鼠神經(jīng)元損傷的改善可能與電針上調(diào)PI3K/ AKT/mTOR信號通路有關(guān)。Morris水迷宮可以測試大鼠海馬依賴性學(xué)習(xí),包括獲得空間記憶和長期空間記憶[26]。本研究顯示,電針組大鼠逃避潛伏期和空間探索實(shí)驗(yàn)首次跨越秒數(shù)顯著縮短,表明電針可促進(jìn)VD大鼠空間記憶和學(xué)習(xí)能力的恢復(fù)。

PI3K/AKT/mTOR信號通路可參與調(diào)控腦損傷后的神經(jīng)元功能障礙,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用[27]。WANG Y等[28]發(fā)現(xiàn)嗅三針干預(yù)阿爾茲海默癥大鼠,上調(diào)PI3K/AKT/mTOR信號通路,可保護(hù)海馬突觸可塑性功能,緩解神經(jīng)炎癥反應(yīng)和神經(jīng)細(xì)胞凋亡。VD患者血管組織損傷及神經(jīng)變性影響其先天免疫,激活白細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞,加劇炎癥反應(yīng)[19]。海馬神經(jīng)炎癥是導(dǎo)致VD患者的缺血性損傷的過程之一[29]。IL-1β、IL-6為典型促炎細(xì)胞因子,長期產(chǎn)生可在神經(jīng)細(xì)胞與神經(jīng)纖維束之間的炎癥過程中引起細(xì)胞毒性作用[30]。此外,研究發(fā)現(xiàn)百會透曲鬢頭針療法可減輕大鼠腦出血后血腫周圍的炎癥反應(yīng),顯著降低IL-1β、IL-6含量[31]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),電針上調(diào)VD大鼠PI3K/AKT/mTOR信號通路后可顯著降低其血清IL-1β、IL-6含量,緩解腦部血管受損后的炎性反應(yīng)。

氧化應(yīng)激也是腦缺血類疾病的一個關(guān)鍵特征,內(nèi)皮一氧化氮合酶和活性氧的結(jié)合導(dǎo)致脂質(zhì)的異常分解,致使有毒產(chǎn)物的沉積,促進(jìn)了DNA損傷和細(xì)胞凋亡[32]。MDA是多不飽和脂肪酸的最終產(chǎn)物[33]。SOD是反映清除氧自由基能力的關(guān)鍵酶。GSH-Px是一種非蛋白質(zhì)抗氧化劑,經(jīng)常被用作脂質(zhì)過氧化物的指標(biāo)[34]。研究[35]發(fā)現(xiàn),N-金剛烷基-4-甲基噻唑-2-胺通過PI3K/AKT/mTOR信號通路可抑制皮層神經(jīng)元中自噬細(xì)胞死亡,此通路對增強(qiáng)皮層神經(jīng)元抗氧化酶活性,降低活性氧導(dǎo)致的一系列氧化應(yīng)激損傷發(fā)揮相對的調(diào)控作用。慢性腦灌注不足期間腦循環(huán)減少可誘導(dǎo)線粒體損傷和功能障礙,提高氧化應(yīng)激水平[19]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),電針組大鼠海馬區(qū)MDA含量降低,SOD、GSH-PX含量增加,氧化損傷得到明顯改善;VD大鼠海馬區(qū)p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表達(dá)水平顯著降低,電針后大鼠p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表達(dá)水平顯著升高。VD大鼠電針治療后,海馬區(qū)mTOR蛋白表達(dá)水平顯著增加?？梢娡ㄟ^激活PI3K/Akt從而激活mTOR,可緩解VD大鼠海馬損傷并改善其認(rèn)知功能。本實(shí)驗(yàn)因未設(shè)置通路抑制劑組作為對照,電針對VD大鼠PI3K/AKT/mTOR信號通路的調(diào)控作用仍不夠確切,稍顯欠缺,實(shí)驗(yàn)設(shè)計仍有較大進(jìn)步空間。

綜上所述,電針可通過上調(diào)PI3K/AKT/mTOR通路,保護(hù)VD大鼠海馬神經(jīng)元,降低氧化應(yīng)激與炎癥水平,為臨床治療VD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。