高麗艷，楊曉燕，臺(tái)曉媛，喻永福，張俊雄，李繼明，段 綱，李本能，李學(xué)德，陳關(guān)雄

（1. 石林彝族自治縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南石林 652200；2. 云南鑫德順畜牧有限公司，云南石林 652200；3. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，云南昆明 650201；4. 會(huì)澤縣待補(bǔ)鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務(wù)中心，云南會(huì)澤 654216）

口蹄疫（foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）和小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）被我國(guó)列為一類(lèi)動(dòng)物疫病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（World Organization for Animal Health，WOAH）列為須通報(bào)動(dòng)物疫病[1-2]，是危害山羊養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要疫病。FMD 是由口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，也是可快速遠(yuǎn)距離傳播的動(dòng)物疫病[3]。FMDV 有7 個(gè)血清型，包括O 型、A 型、C 型、亞洲I 型以及南非1～3 型[4]。目前，F(xiàn)MDV 在我國(guó)以O(shè) 型和A 型流行為主，不同血清型間無(wú)交叉免疫保護(hù)[5]。PPR 是由小反芻獸疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）引起的一種急性接觸性傳染病，山羊、綿羊和其他野生小反芻動(dòng)物對(duì)其均易感[6]，其中山羊?qū)ζ涓叨纫赘?，而幼齡山羊以及哺乳期山羊易感程度更高，發(fā)病率可達(dá)80%～90%，病死率可達(dá)50%～100%[7-9]。我國(guó)對(duì)FMD 和PPR 的綜合防控措施以撲殺和免疫為主，在《國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫指導(dǎo)意見(jiàn)（2022—2025年）》中，二者均被列為強(qiáng)制免疫疫病。在基層動(dòng)物防疫過(guò)程中，F(xiàn)MD 和PPR 免疫工作主要集中于春、秋兩季，分2 個(gè)階段進(jìn)行。春、秋兩季是母羊配種及分娩的主要時(shí)期，完成兩種疫苗免疫需耗時(shí)半個(gè)月至1 個(gè)月，嚴(yán)重影響著能繁母羊的配種工作，且因免疫工作量大、免疫過(guò)程繁瑣、山羊應(yīng)激大等問(wèn)題，基層動(dòng)物防疫員和養(yǎng)殖戶(hù)對(duì)兩種疫病免疫的接受程度低。

為探究一種適合基層同時(shí)開(kāi)展山羊FMD 和PPR 免疫的方法和劑量，解決基層免疫工作量大、工作效率低、過(guò)程繁瑣、周期較長(zhǎng)以及接受程度低等問(wèn)題，使山羊在免疫保護(hù)期內(nèi)維持較高的抗體水平，盡量降低疫苗接種對(duì)羊群生產(chǎn)性能的影響，本研究將FMD和PPR疫苗進(jìn)行一次性同步分點(diǎn)注射，通過(guò)比較不同免疫劑量疫苗接種后的抗體水平，尋找FMD 和PPR 疫苗一次性分點(diǎn)同步注射的最佳免疫劑量，以期為基層開(kāi)展免疫工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 4 月齡左右、斷奶2 周以上的山羊64 只，由云南鑫德順畜牧有限公司自繁自養(yǎng)，且FMDV、PPRV 抗體和核酸檢測(cè)均為陰性。

1.1.2 疫苗 FMD O 型、A 型二價(jià)滅活疫苗（OHM/02 株+AKT-Ⅲ株，批號(hào)2022049）、PPR活疫苗（Clonge9 株，批號(hào)2021034-2）和疫苗稀釋液（批號(hào)100/2022014），均為新疆天康生物制藥有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 主要試劑及儀器 FMDV O 型競(jìng)爭(zhēng)ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒（ 批號(hào)20092301）、FMDV A 型競(jìng)爭(zhēng)ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒（批號(hào)20072206）、PPRV 阻斷ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒（批號(hào)20172214），均購(gòu)自青島立見(jiàn)生物科技有限公司。酶標(biāo)儀（型號(hào)ELX-800）、洗板機(jī)（型號(hào)50TS），為美國(guó)伯騰儀器有限公司產(chǎn)品；恒溫培養(yǎng)箱（型號(hào)GSP-9080MBE），購(gòu)自上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；移液器，為德國(guó)Epprndorf公司產(chǎn)品；電動(dòng)離心機(jī)（型號(hào)TDL-80-28），購(gòu)自上海安亭科學(xué)儀器廠。

1.1.4 試驗(yàn)場(chǎng)地及時(shí)間 本試驗(yàn)在云南省石林縣云南鑫德順畜牧有限公司進(jìn)行，試驗(yàn)時(shí)間為2023年3—8 月。

1.2 免疫方案

本試驗(yàn)共分4 個(gè)組，每組試驗(yàn)山羊16 只。

第1 組：對(duì)照組（常規(guī)免疫組）。先在試驗(yàn)山羊左側(cè)頸部肌肉注射FMD O 型、A 型二價(jià)滅活疫苗1.0 頭份（1.0 mL），2 周后于左側(cè)頸靜脈采血檢測(cè)FMDV 抗體，同時(shí)在右側(cè)頸部皮下注射用疫苗稀釋液稀釋的PPR 活疫苗1.0 頭份（1.0 mL）。

第2～4組為試驗(yàn)組，即1.0、1.2、1.5頭份劑量組。于對(duì)照組山羊FMD 疫苗接種當(dāng)日，在不同試驗(yàn)組山羊左側(cè)頸部肌肉分別注射FMD O 型、A 型二價(jià)滅活疫苗1.0、1. 2、1.5 頭份（1.0、1.2、1.5 mL），同時(shí)在右側(cè)頸部皮下注射用疫苗稀釋液稀釋的PPR活疫苗1.0、1.2、1.5 頭份（1.0、1.2、1.5 mL）。

1.3 試驗(yàn)觀察

免疫注射結(jié)束后，對(duì)各組試驗(yàn)山羊觀察48 h，主要觀察體溫、精神狀態(tài)、飲食狀況和排泄情況等有無(wú)異常。

1.4 血液樣品采集

分別于各疫苗接種后14、28、42、56、70、100 和160 d，對(duì)各組山羊采血，分離血清后檢測(cè)FMDV O 型、A 型和PPRV 抗體情況。

1.5 抗體檢測(cè)

分別采用FMDV O 型、A 型競(jìng)爭(zhēng)ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒以及PPRV 阻斷ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒，對(duì)采集的血液樣品進(jìn)行檢測(cè)。

1.6 數(shù)據(jù)分析

對(duì)檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)用SPSS19 軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分析各組檢測(cè)結(jié)果的差異性。P＞0.05 為差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P≤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 試驗(yàn)山羊健康情況及免疫應(yīng)激反應(yīng)

所有試驗(yàn)山羊（64 只）在疫苗接種后48 h 內(nèi)均未出現(xiàn)體溫升高、精神沉郁、厭食情況，采食和排泄均正常，未出現(xiàn)免疫應(yīng)激反應(yīng)。接種后36 d，第4 組1 只山羊死亡，其余各組山羊在試驗(yàn)期間均未出現(xiàn)異常情況。

2.2 FMDV O 型抗體檢測(cè)

結(jié)果（表1）顯示：接種后14 d，各組山羊FMDV O 型抗體陽(yáng)性率可達(dá)87.50%以上，分別為100%、87.50%、100%、93.75%；接種后28 d，各組山羊FMDV O 型抗體陽(yáng)性率均達(dá)到100%，并維持至接種后56 d；接種后70 d，第2 組有1 只山羊抗體轉(zhuǎn)陰；接種后100 d，第2 組有2 只山羊抗體轉(zhuǎn)陰，第3 組有1 只山羊抗體轉(zhuǎn)陰。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組山羊在接種后14、28、42、56、70、100、160 d 之間的檢測(cè)數(shù)據(jù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 1，P＞0.05）。

表1 FMDV O 型抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 FMDV A 型抗體檢測(cè)

結(jié)果（表2）顯示：接種后14 d，第1 組山羊FMDV A 型抗體陽(yáng)性率為87.50%，其余各組均可達(dá)到100%，并維持至接種后100 d；接種后160 d，除第2 組抗體陽(yáng)性率降至93.75%外，其余3 組均仍保持在100%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組山羊在接種后14、28、42、56、70、100、160 d 之間的檢測(cè)數(shù)據(jù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 1，P＞0.05）。

表2 FMDV A 型抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 PPRV 抗體檢測(cè)

結(jié)果（表3）顯示，接種后14 d，各組山羊PPRV 抗體陽(yáng)性率即達(dá)到100%，且一直保持至接種后160 d。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各組山羊在接種后14、28、42、56、70、100、160 d 之間的檢測(cè)數(shù)據(jù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 1，P＞0.05）。

表3 PPRV 抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

FMD 和PPR 均屬于我國(guó)一類(lèi)動(dòng)物疫病，嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展[10]，而預(yù)防接種是有效防控二者的重要措施之一[11-12]。本研究通過(guò)將不同免疫劑量的FMD 和PPR 疫苗一次性同步分點(diǎn)分組接種山羊，在接種后持續(xù)48 h 觀察試驗(yàn)山羊的體溫、精神狀態(tài)、采食、排泄等體征，發(fā)現(xiàn)各組山羊在接種兩種疫苗后均未表現(xiàn)出免疫應(yīng)激反應(yīng)，表明在試驗(yàn)免疫劑量范圍內(nèi)可開(kāi)展山羊FMD 和PPR 疫苗一次性分點(diǎn)同步免疫接種工作。

本試驗(yàn)將不同接種方式和不同接種劑量的兩種疫苗，分別采用常規(guī)免疫和一次性分點(diǎn)同步接種方式接種山羊，探究疫苗免疫后抗體陽(yáng)性率變化情況，尋找FMD 和PPR 疫苗一次性分點(diǎn)同步注射的最佳免疫劑量。結(jié)果顯示：FMD 和PPR 疫苗在接種后14、28、42、56、70、100、160 d 各組的抗體檢測(cè)數(shù)據(jù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。但是接種后14 d，1.0 頭份劑量組（第2 組）山羊FMDV O 型抗體陽(yáng)性率僅為87.50%，1.5 頭份劑量組（第4 組）為93.75%，均低于1.2 頭份劑量組（第3 組）的100%；對(duì)照組（第1 組）山羊FMDV A型免疫抗體陽(yáng)性率為87.50%，低于其他免疫劑量試驗(yàn)組；接種后70 d，1.0 頭份劑量組（第2 組）有1 只山羊FMDV O 型抗體轉(zhuǎn)陰；接種后100 d，1.0 頭份劑量組（第2 組）有2 只山羊FMDV O型抗體轉(zhuǎn)陰，1.2 頭份劑量組（第3 組）有1 只山羊FMDV O 型抗體轉(zhuǎn)陰；接種后160 d，1.0 頭份劑量組（第2 組）有1 只山羊FMDV A 型抗體轉(zhuǎn)陰；其余不同劑量組山羊免疫抗體陽(yáng)性率均保持在100%。分析以上數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，在免疫后14 d，1.5 頭份劑量組FMDV O 型抗體陽(yáng)性率反而沒(méi)有1.2 頭份劑量組高，推測(cè)這可能與山羊個(gè)體差異或接種大劑量疫苗抑制了機(jī)體前期的免疫反應(yīng)有關(guān)，需進(jìn)一步研究分析；采用一次性分點(diǎn)同步注射免疫方法以不同的疫苗劑量接種山羊后，在前期1.2 頭份劑量組山羊免疫抗體陽(yáng)性率較高，而后期1.5 頭份劑量組抗體陽(yáng)性率維持時(shí)間較長(zhǎng)；常規(guī)免疫方法與一次性分點(diǎn)同步注射免疫方法在免疫抗體產(chǎn)生及維持時(shí)間上無(wú)差異。此外，各組PPRV 抗體陽(yáng)性率均在接種后14 d 達(dá)到100%，并持續(xù)保持至接種后160 d，表明PPR 疫苗免疫源性好、免疫效期長(zhǎng)。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，將FMD 和PPR 疫苗以不同劑量一次性分點(diǎn)同步接種山羊，雖然接種后檢測(cè)數(shù)據(jù)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但前期FMD 疫苗1.2頭份劑量組免疫抗體陽(yáng)性率高于1.0 和1.5 頭份劑量組。因此，基層在開(kāi)展山羊FMD 和PPR 疫苗一次性分點(diǎn)同步免疫時(shí)，建議FMD疫苗使用1.2頭份，PPR 疫苗使用1.0 頭份，且于接種后14 d 開(kāi)展免疫效果監(jiān)測(cè)為佳。