董旭 尹利端 杜芬 劉楚怡

摘要［目的］評價(jià)松花粉青梅復(fù)合提取液對功能性消化不良動物模型的作用。［方法］建立功能性消化不良小鼠的動物模型，并利用該模型考察松花粉青梅復(fù)合提取液對消化系統(tǒng)的促進(jìn)能力。綜合評價(jià)松花粉青梅復(fù)合提取液對動物的食物利用率、小腸運(yùn)動情況、消化酶分泌情況和胃排空試驗(yàn)的影響。［結(jié)果］松花粉青梅復(fù)合提取液對體重增重、攝食量和食物利用率都有明顯促進(jìn)作用，且能夠增加消化不良模型小鼠的墨汁推進(jìn)率，增加胃蛋白酶活性和模型小鼠的胃排空率。［結(jié)論］松花粉青梅復(fù)合提取液能夠明顯提升小鼠的胃腸運(yùn)動功能。

關(guān)鍵詞功能性消化不良；松花粉青梅復(fù)合提取液；動物模型；墨汁推進(jìn)率

中圖分類號R 284文獻(xiàn)標(biāo)識碼A

文章編號0517-6611（2023）24-0170-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.24.038

Study on Digestionpromoting Function of Compound Extract of Pine Pollen and Greengage

DONG Xu1，YIN Liduan2，DU Fen3 et al

（1.Key Laboratory of Marine Drugs，Ministry of Education，School of Medicine and Pharmacy，Ocean University of China，Qingdao，Shandong 266003;2.Yantai New Era Health Industry Chemical Co.，Ltd.，Yantai，Shandong 264006;3.Marine Biomedical Research Institute of Qingdao，Qingdao，Shandong 266001）

Abstract［Objective］To evaluate the effect of compound extract of pine pollen and greengage on digestive function of animal model.［Method］The animal model of functional dyspepsia in mice was established and used to investigate the promoting effect of compound extract of pine pollen and greengage on digestive system.The effects of pine pollen and greengage compound extract on food utilization，movement of small intestine，secretion of digestive enzymes and gastric emptying in rats were evaluated comprehensively.［Result］The compound extract of pine pollen and greengage had a significant promoting effect on weight gain，food intake and food utilization rate，and could increase the ink propulsion rate of dyspeptic mice，pepsin activity and gastric emptying rate of model mice.［Conclusion］The compound extract of pine pollen and greengage can significantly enhance the gastrointestinal motility of mice.

Key wordsFunctional dyspepsia;Compound extract of pine pollen and greengage;Animal model;Ink propulsive rate

近年來，隨著生活節(jié)奏的加快、飲食結(jié)構(gòu)的變化，使得當(dāng)今社會人們消化功能紊亂等疾病的發(fā)病率顯著上升。消化不良主要表現(xiàn)是由消化功能減弱、內(nèi)部功能紊亂所引發(fā)的胃腸道不適的系統(tǒng)性疾?。?］。功能性消化不良疾病起源于胃十二指腸區(qū)域，表現(xiàn)為上腹部存在不適或慢性和復(fù)發(fā)性疼痛，是最常見的消化系統(tǒng)綜合征［2-3］。有數(shù)據(jù)顯示，目前門診疾病中消化內(nèi)科疾病發(fā)病率高達(dá)23%［4-5］。

針對這類消化系統(tǒng)疾病，臨床上主要使用H2受體拮抗劑、促胃腸動力藥和質(zhì)子泵抑制劑等合成藥［6］，長期治療副作用大，效果卻不理想［7-8］。從天然藥食同源植物中探索副作用小且具有促消化功能的原材料，進(jìn)行有效配伍，并結(jié)合現(xiàn)代制劑技術(shù)開發(fā)產(chǎn)品，越來越受到人們的關(guān)注，具有良好的市場前景和較高的社會價(jià)值［9-10］。

松花粉多糖具有良好的免疫調(diào)節(jié)［11］以及降血糖、降血脂功能［12］，也被廣泛應(yīng)用于功能制品中。前期研究發(fā)現(xiàn)松花粉也具有一定的促消化作用，并將其與青梅提取物進(jìn)行最適比例的復(fù)配，獲得具有良好性狀與活性的復(fù)配提取物［13-14］。該研究旨在建立功能性消化不良動物模型，并利用該模型研究松花粉青梅復(fù)合提取物對功能性消化不良動物食物利用率、小腸運(yùn)動情況、消化酶分泌情況和胃排空的影響，考察其促消化功能。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

松花粉青梅復(fù)合提取液，煙臺新時(shí)代健康產(chǎn)業(yè)有限公司；乙醇、鹽酸、檸檬酸、乙醚北、淀粉、葡萄糖、羧甲基纖維素鈉，北京化學(xué)試劑公司；磷酸鹽緩沖液（PBS）、胃蛋白酶活性檢測試劑盒，索來寶公司；阿托品，Sigma公司；墨汁，榮寶齋；奶粉，飛鶴集團(tuán)公司；生理鹽水；小鼠（18～22 g）、SD大鼠（120～150 g），濟(jì)南鵬悅動物繁育公司。

1.2試驗(yàn)設(shè)備

SY21-NI4V恒溫水浴鍋，北京長風(fēng)儀器儀表公司；GL-20B高速冷凍離心機(jī)，上海安亭實(shí)驗(yàn)儀器廠；TS-1 渦旋振蕩器，其林貝爾儀器制造有限公司；AY220電子分析天平，日本島津公司；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠； pHS-3C精密pH計(jì)，上海精密科學(xué)儀器有限公司；紫外可見分光光度計(jì)，UNICO公司；96孔培養(yǎng)板（平底），Gibico公司。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1松花粉青梅復(fù)合提取液的制備。

將干燥松花粉按料液比1∶25（g∶mL）與純化水混合，經(jīng)浸提、超聲處理后，過濾、濃縮得松花粉提取液；八成熟新鮮青梅果經(jīng)清洗、熱燙、去核處理后，打漿，離心，過濾，得青梅汁；將松花粉提取液與青梅汁按照1∶1重量比混合，即得松花粉青梅復(fù)合提取液。

1.3.2松花粉青梅復(fù)合提取液對大鼠食物利用率的影響。

選用同性別120～150 g SD大鼠，每組8只，分為陰性對照組、松花粉青梅復(fù)合提取液人體推薦劑量5倍、10倍和20倍劑量組，經(jīng)口給予對應(yīng)受試樣品30 d，每7 d測2次體重和食物攝入量，計(jì)算體重增重、攝食量和食物利用率。

1.3.3松花粉青梅復(fù)合提取液促進(jìn)大鼠消化酶分泌試驗(yàn)。經(jīng)口給予各組大鼠對應(yīng)受試樣品30 d后，乙醚麻醉大鼠，幽門結(jié)扎法收集胃液，測定單位時(shí)間內(nèi)胃液量和胃蛋白酶活，按以下公式計(jì)算胃蛋白酶排出量。

胃蛋白酶排出量（U/h）=胃蛋白酶活性×每小時(shí)胃液量

1.3.4松花粉青梅復(fù)合提取液促進(jìn)小鼠小腸運(yùn)動試驗(yàn)。

選用體重在18～22 g同性別小鼠，每組10只，除空白組外，模型組和低、中、高劑量樣品組均用0.05%復(fù)方地芬諾酯造模，經(jīng)口給予對應(yīng)受試樣品30 d。最后一次給予受試樣品30 min 后給予復(fù)方地芬諾酯，30 min后再給予墨汁指示劑，25 min后處死動物，按以下公式計(jì)算墨汁推進(jìn)率。

墨汁推進(jìn)率=墨汁推進(jìn)長度/小腸總長度×100%

1.3.5松花粉青梅復(fù)合提取液促進(jìn)小鼠胃排空試驗(yàn)。

經(jīng)口給予各組大鼠對應(yīng)受試樣品30 d后，各組小鼠腹腔注射1 mg/kg 阿托品，20 min 后每只灌胃0.8 mL半固體營養(yǎng)糊（10 g 羧甲基纖維素鈉、16 g 奶粉、8 g 糖、8 g 淀粉和 2 g 活性炭溶于 250 mL 蒸餾水），20 min 后脫頸處死小鼠，迅速剖腹進(jìn)行全胃切除稱重，并洗去胃內(nèi)容物后稱胃凈重，按以下公式計(jì)算胃內(nèi)殘留率和排空率。

胃殘留率=（胃全重-胃凈重）/半固體營養(yǎng)糊質(zhì)量×100%

胃排空率=1-胃殘留率

1.4數(shù)據(jù)分析

采用Microsoft Office Excel 2003 進(jìn)行繪圖，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用 SPSS 19.0軟件進(jìn)行，以 t 檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析，P<0.05 時(shí)表示有顯著性差異，P<0.01時(shí)表示有極顯著差異。所有數(shù)據(jù)均以±S表示。

2結(jié)果與分析

2.1松花粉青梅復(fù)合提取液對大鼠食物利用率的影響

試驗(yàn)過程中，各試驗(yàn)組大鼠在30 d內(nèi)體重變化統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表1所示。從表1可以看出，試驗(yàn)過程中，各試驗(yàn)組動物均未出現(xiàn)拒食現(xiàn)象，體重均呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢。前21 d，與對照組相比各組大鼠體重均不存在顯著差異；但自24 d后，中、高劑量組與對照組相比體重呈現(xiàn)顯著差異；27 d后，各劑量組與對照組相比體重均呈現(xiàn)極顯著差異，說明松花粉青梅復(fù)合提取液對大鼠的體重增加有顯著作用。

對大鼠體重增重、攝食量和食物利用率分析結(jié)果見表2。從體重增重來看，與對照組相比，低、中、高劑量組大鼠體重增重均極顯著增加（P＜0.01），但不同劑量試驗(yàn)組間不存在顯著差異（P＞0.05），說明松花粉青梅復(fù)合提取液對大鼠體重增加會產(chǎn)生顯著影響，但在設(shè)定的試驗(yàn)劑量范圍內(nèi)不存在劑量依賴關(guān)系。

在攝食量方面，與對照組相比，低、中、高劑量組攝食量均極顯著增加（P＜0.01），且隨著松花粉青梅復(fù)合提取液攝入劑量的增加，大鼠的食物攝入量也逐漸增加，這說明松花粉青梅復(fù)合提取液能夠顯著增加大鼠食欲且增加攝食量。松花粉青梅復(fù)合提取液組大鼠食物利用率與對照組相比均有所增加，其中低劑量組能夠極顯著提高其食物利用率（P＜0.01），但與攝入量不存在線性關(guān)系，且不同劑量試驗(yàn)組間不存在顯著差異（P＞0.05）。

2.2松花粉青梅復(fù)合提取液對小鼠小腸運(yùn)動的影響

松花粉青梅復(fù)合提取液對小鼠小腸運(yùn)動影響結(jié)果如表 3所示。與對照組相比，模型組的墨汁推進(jìn)率明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），表明小鼠在灌胃給予復(fù)方地芬諾酯后，腸蠕動抑制模型建立成功。在模型成立的條件下，松花粉青梅復(fù)合提取液的高、中、低劑量給藥組墨汁推進(jìn)率與模型組比較均具有顯著差異（P<0.01），表明松花粉青梅復(fù)合提取液能增加小鼠小腸的蠕動。

2.3松花粉青梅復(fù)合提取液對大鼠消化酶分泌的影響

從表4可以看出，與對照組相比，低、中、高劑量組大鼠的胃蛋白酶活性、胃液量和胃蛋白酶排出量均有所增加（P＜0.05），且不同劑量試驗(yàn)組間不存在顯著差異（P＞0.05）。說明促消化功能產(chǎn)品會增加大鼠的胃蛋白酶活性和胃液分泌，能夠較好地促進(jìn)動物消化。

參照《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范（2020 版）》規(guī)定，動物體重、體重增重、攝食量，小腸運(yùn)動試驗(yàn)和消化酶測定指標(biāo)中任2個(gè)結(jié)果陽性即可判定該受試樣品結(jié)果陽性。因此，松花粉青梅復(fù)合提取液具有促消化功能。

安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)2023年

2.4松花粉青梅復(fù)合提取液對小鼠胃排空的影響

功能性消化與胃排空障礙和胃容受性舒張功能紊亂密切相關(guān)［7-8］，因此，該研究增加了胃排空試驗(yàn)考察松花粉青梅復(fù)合提取液對胃腸道功能障礙的影響。從表5可以看出，對照組、模型組小鼠的胃排空率分別為61.61%、38.12%，對照組的胃排空率極顯著高于模型組（P<0.01），表明小鼠胃動力抑制模型建立成功。而與模型組相比，松花粉青梅復(fù)合提取液低、中、高劑量組小鼠固體食物胃排空率均有極顯著增加（ P＜0.01），且隨著添加劑量增加，胃排空率逐漸增高。這說明松花粉青梅復(fù)合提取液可顯著提升小鼠的胃運(yùn)動功能。

3結(jié)論

該研究建立了功能性消化不良大鼠動物模型及小鼠動物模型，并利用該模型研究了松花粉青梅復(fù)合提取液對消化功能的促進(jìn)能力。松花粉青梅復(fù)合提取液對大鼠的體重增重、攝食量和食物利用率都有明顯促進(jìn)作用，對大鼠的胃蛋白酶活性和胃液分泌有顯著促進(jìn)作用，且能夠增加消化不良模型小鼠的墨汁推進(jìn)率和胃排空率，說明松花粉青梅復(fù)合提取液能夠明顯提升小鼠的胃腸運(yùn)動功能。

參考文獻(xiàn)

［1］劉夢雅，成映霞，白敏，等.香砂六君子湯調(diào)控RhoA/ROCK2/MYPT1信號通路改善功能性消化不良大鼠胃動力的機(jī)制［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2023，29（4）：1-8.

［2］ 吳柏瑤，張法燦，梁列新.功能性消化不良的流行病學(xué)［J］.胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志，2013，22（1）：85-90.

［3］ 安曉霞，梁堯，王振剛，等.中醫(yī)藥治療功能性消化不良的臨床研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2018，46（4）：123-127.

［4］ 仝甲釗，曲波，王蓓蓓，等.功能性消化不良的發(fā)病機(jī)制［J］.世界華人消化雜志，2013，21（9）：785-790.

［5］ 張聲生，趙魯卿.功能性消化不良中醫(yī)診療專家共識意見（2017）［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2017，32（6）：2595-2598.

［6］ 吳毓謙，汪龍德，牛媛媛，等.十二指腸低度炎癥在功能性消化不良中的研究進(jìn)展［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2023，31（1）：68-71，76.

［7］ 黃倩，周柏，蔡婷，等.功能性消化不良治療方案的研究進(jìn)展［J］.中國實(shí)用內(nèi)科雜志，2021，41（12）：1064-1068.

［8］李軍祥，陳誩，李巖.功能性消化不良中西醫(yī)結(jié)合診療共識意見（2017年）［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2017，25（12）：889-894.

［9］ 傅曼琴，肖更生，吳繼軍，等.廣陳皮促消化功能物質(zhì)基礎(chǔ)的研究［J］.中國食品學(xué)報(bào)，2018，18（1）：56-64.

［10］ 姚莉，鞠洋.窄葉鮮卑花促消化作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2009，17（6）：376-378.

［11］ 周玉蕾，樸泓潔.松花粉多糖對免疫調(diào)節(jié)作用的影響研究［J］.生物化工，2021，7（4）：135-137.

［12］ 常智堯，劉其聳，李全宏.松花粉功能作用及其加工利用研究進(jìn)展［J］.糧食與油脂，2020，33（4）：20-22.

［13］ 余洋洋，徐玉娟，余元善，等.青梅的營養(yǎng)健康效應(yīng)研究進(jìn)展［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2020（23）：215-218.

［14］ 戴承恩，何小平，鄭芬芬，等.松花粉主要活性成分及保健作用的研究進(jìn)展［J］.食品研究與開發(fā)，2019，40（8）：212-219.