李洪坤 王芳芳 于占晶 侯曉杰 梁魁景

收稿日期：2023-07-10中文收稿日期

基金項目：衡水市科技計劃資助項目（2022014026Z）；河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系梨產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊建設(shè)衡水綜合試驗推廣站（HBCT2021210402）;河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究項目（ZC2023143）。

第一作者簡介：李洪坤（1986-），男，本科，助理實驗師，主要從事園林植物病蟲害防治等研究工作。

*通信作者：于占晶（1984-），女，農(nóng)學(xué)碩士，講師，主要從事植物病蟲害研究工作。E-mail：yu_zhanjing@126.com

摘? 要：【目的】梨樹的病蟲害嚴(yán)重影響著梨產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，由鏈格孢真菌侵染引起的梨黑斑病是侵染梨樹的主要病害之一，為篩選出預(yù)防和治療梨黑斑病的高效化學(xué)藥劑，開展了5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病菌的室內(nèi)防效試驗?！痉椒ā繌某Ｓ玫乃巹┲刑暨x10%中生·寡糖素、1.26%辛菌胺醋酸鹽、15%絡(luò)氨銅、20%吡唑醚菌酯和60%多菌靈5種化學(xué)藥劑，采用體外接種法對梨黑斑病進(jìn)行室內(nèi)防治效果研究。【結(jié)果】5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病的生長都有一定的防治作用，但預(yù)防和治療的效果不同。其中預(yù)防效果最好的是20%吡唑醚菌酯，在濃度為1 000 mg/L時，其病斑平均直徑為0.12 mm，防效達(dá)到94.8%，EC50為3.312 01 mg/L；其次為1.26%辛菌胺醋酸鹽、15%絡(luò)氨銅和60%多菌靈，在濃度1 000 mg/L時，防效分別為90.1%、69.1%和60.1%；預(yù)防作用最差的是10%中生·寡糖素，在濃度62.5 mg/L時，其病斑平均直徑為1.67 mm，防效僅為28.3%，EC50為334.470 mg/L。治療效果最好的為20%吡唑醚菌酯，在濃度1 000 mg/L時，其菌落生長量平均直徑為0.27 mm，抑制率達(dá)到了77.5%；最差的是60%多菌靈，在濃度62.5 mg/L時，抑制率為-6.7%?！窘Y(jié)論】試驗篩選出對梨黑斑病防治效果最好的藥劑為20%的吡唑醚菌酯。

關(guān)鍵詞：梨黑斑?。换瘜W(xué)藥劑；防治效果

文章編號：2096-8108（2023）06-0023-05? 中圖分類號：S436.612.1+4中圖分類號? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文獻(xiàn)標(biāo)志碼

Research on Prevention and Control of Five Chemical Agents Against Alternaria sp.

LI? Hongkun，WANG? Fangfang，YU? Zhanjing*，HOU? Xiaojie，LIANG? Kuijing

（Hengshui College， Hengshui Hebei 053000，China）

Abstract： 【Objective】Pear diseases and insect pests seriously affect the development of pear industry. Pear black spot disease caused by Alternaria sp. Infection，which is one of the main diseases infected pear trees in order to screen out high-efficiency chemical agents for preventing and controlling Alternaria sp.【Methods】The Five chemical agents were selected and identified from commonly used pesticides （10% Zhongsheng·Oligosaccharin， 1.26% siminamine acetate， 15% copper citrate， 20% pyraclostrobin and 60% carbendazim）. In vitro inoculation method was used to study the indoor control effect of Alternaria sp. disease. 【Results】The results showed that the five chemical agents had certain control effects on the growth of Alternaria sp.， but the effects of prevention and treatment were different. Among them， the best preventive effect was 20% pyraclostrobin. When the concentration was 1000 mg/L， the average diameter of the lesion was 0.12 mm， the control effect was 94.8%， and the EC50 was 3.312 01 mg/L; the control effects were 90.1%， 69.1% and 60.1% at the concentration of 1 000 mg/L， respectively， followed by 1.26% octylamine acetate， 15% complex ammonia copper and 60% carbendazim. The worst preventive effect was 10%. At the concentration of 62.5 mg/L， the average diameter of the lesion was 1.67 mm， the control effect was only 28.3%， and the EC50 was 334.470 mg/L. The best therapeutic effect was 20% pyraclostrobin. When the concentration was 1 000 mg/L， the average diameter of colony growth was 0.27 mm， and the inhibition rate reached 77.5%. The worst was 60% carbendazim， at a concentration of 62.5 mg/L， the inhibition rate was -6.7%.【Conclusion】The 20% pyraclostrobin has the best control effect on Alternaria sp.

Keywords：Alternaria sp.; chemical agent; control effect

梨是中國主要的栽培果樹，栽培面積和產(chǎn)量僅次于蘋果。

國家統(tǒng)計局?jǐn)?shù)據(jù)顯示，近年來我國梨種植面積保持穩(wěn)定，面積約100萬hm2，總產(chǎn)量約1 600萬t。2020年我國梨產(chǎn)量為1 781.53萬t，相比2019年的1 731.35萬t，年產(chǎn)量增長50.18萬t，增幅約2.9%［1］。其中，安徽、河北、山東、遼寧等四省是中國梨的集中生產(chǎn)區(qū)，栽培面積約占全國梨種植面積的1/2左右，產(chǎn)量超過60%。

由鏈格孢真菌（Alternaria kikuchiana Tanaka.）侵染引起的梨樹黑斑病是梨樹上重要的病害之一，在中國主要梨區(qū)普遍發(fā)生［2］。病原體在被侵染的枝條、葉片、果實上與分生孢子和菌絲體一起越冬。第2年春季產(chǎn)生的分生孢子通過風(fēng)雨傳播并侵入宿主組織，導(dǎo)致初始感染［3］。在最初的感染后，病原體可以在田間引起再感染。一般病害的發(fā)生始于4月下旬，如果6月-7月遇雨，病害的發(fā)生會更加嚴(yán)重，地形低、肥料不足、修剪不合理、樹木枯竭以及其他病蟲害的發(fā)生等不利因素都可能加劇梨黑斑病病害的流行。

目前，控制梨黑斑病的方法是使用苯醚甲環(huán)唑、甲基苯硫脲和代森錳鋅等化學(xué)試劑?；瘜W(xué)藥劑使用不當(dāng)，不僅會引起病原菌的抗藥性，還可能會污染環(huán)境和危害人類健康 ［4-6］。因此，科研人員從梨黑斑病的癥狀、病原菌、品種抗性和防治方法等方面對梨黑斑病進(jìn)行了全面的研究［7］。

目前，梨黑斑病僅在梨種植面積大的區(qū)域局部發(fā)生，但危害較大，直接導(dǎo)致梨產(chǎn)量嚴(yán)重下降［8］。試驗選擇10% 中生·寡糖素、1.26% 辛菌胺醋酸鹽、15% 絡(luò)氨銅、20% 吡唑醚菌酯和60%多菌靈5種化學(xué)藥劑，采用體外接種法對梨黑斑病進(jìn)行室內(nèi)防治研究，以期為梨黑斑病的深入研究和綜合防治提供參考。

1? 材料與方法

1.1? 試驗材料

測試藥劑：10%中生·寡糖素（江蘇明德立達(dá)作物科技有限公司）、1.26%辛菌胺醋酸鹽（煙臺綠云生物科技有限公司）、15%絡(luò)氨銅（上海滬聯(lián)生物藥業(yè)有限公司）、60%多菌靈（山東省煙臺市金峰化工有限公司）、20%吡唑醚菌酯（青島星牌作物科學(xué)有限公司）。

測試病菌：梨黑斑病菌（Alternaria kikuchiana Tanaka.），由衡水學(xué)院園林植物學(xué)實驗室保存并提供。

1.2? 試驗方法

1.2.1? PDA 培養(yǎng)基的制備

準(zhǔn)備工作：準(zhǔn)備三角瓶、燒杯、電子天平、土豆瓊脂粉、葡萄糖和蒸餾水。

制備過程：將土豆用清水洗凈、去皮，切成大約1 cm3的小土豆塊，使用電子天平稱量200 g土豆塊，放于鍋內(nèi)，倒入1000 ml蒸餾水，放于電磁爐上煮大約15 min。用兩層紗布包裹土豆塊，置于1000 ml燒杯口上，用力擠壓土豆，得到濾液，濾液補(bǔ)充蒸餾水到1000 ml。將得到的液體再重新加熱，沸騰后加入17 g瓊脂粉，同時用玻璃棒快速攪拌以防瓊脂結(jié)塊。再稱量20 g葡萄糖加入鍋內(nèi)攪拌，瓊脂粉和葡萄糖充分溶解后關(guān)火，將PDA培養(yǎng)基分裝在250 ml三角瓶里，每個三角瓶100 ml，立即封口。

滅菌處理：將需要滅菌的器皿和裝有PDA培養(yǎng)基的三角瓶放入高壓滅菌鍋，0.103 MPa、121 ℃下高壓蒸汽滅菌20 min。將滅菌冷卻后的培養(yǎng)基放入25 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)48 h，若培養(yǎng)基上無雜菌生長，放在低溫通風(fēng)干凈的地方待用。

1.2.2? PDA 培養(yǎng)基的活化培養(yǎng)

各菌株在 PDA培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)至菌落直徑接近2/3培養(yǎng)皿直徑時，用打孔器在菌落邊緣打取直徑6 mm的菌餅［9］。

1.2.3? 5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病的預(yù)防作用研究

將測試果實放入濃度分別為62.5、125、250、500、1000 mg/L的5種化學(xué)藥劑中浸泡約10 min，晾干，用細(xì)針在梨果表面扎3個傷口，將梨黑斑病菌菌餅（=6.0 mm）接在經(jīng)過受傷處理的梨表面，每個處理重復(fù)3次，未經(jīng)藥劑處理的梨作為對照。用脫脂棉固定、保持濕度，再用塑料膠布固定脫脂棉，標(biāo)記藥劑名稱和濃度，用保鮮膜密封。25 ℃光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)3 d、5 d、7 d后用十字交叉法測量病斑的直徑，計算抑菌率。

1.2.4? 5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病的治療作用研究

將測試果實接入預(yù)先培養(yǎng)好的梨黑斑病原菌菌餅（=6.0 mm），每個處理 3次重復(fù)，用脫脂棉固定、保持濕度，然后用塑料膠布固定脫脂棉，標(biāo)記藥劑名稱和濃度，用保鮮膜密封。3 d后揭下脫脂棉，將測試果實分別用濃度為62.5、125、250、500和1000 mg/L的5種殺菌劑浸泡約10 min，晾干，用保鮮膜密封，未經(jīng)處理的梨作為對照，測量3 d、5 d和7 d病斑直徑，計算抑菌率。

病斑生長抑制率（%） = （對照病斑直徑-處理病斑直徑）/對照病斑直徑×100［10］。

1.3? 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel2010軟件和SPSS軟件處理。通過SPSS軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行方差統(tǒng)計分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病的預(yù)防作用

2.1.1? 5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病病斑生長的抑制作用

5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病的預(yù)防效果見表1。5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病都有一定的預(yù)防效果，但是不同的化學(xué)藥劑或同一藥劑不同濃度的防效作用不同。20%吡唑醚菌酯具有最好的防效，在濃度為1000 mg/L時，其病斑平均直徑為0.12 mm，防效達(dá)到94.8%；其次為辛菌胺醋酸鹽，在濃度1000 mg/L時，其病斑平均直徑為0.23 mm，防效在90%以上；效果最差的是10%中生·寡糖素，在濃度為62.5 mg/L時，其菌落平均直徑為1.67 mm，防效僅為28.3%。

差異性分析表明，與對照相比，5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病菌方面都有一定的防效。10%中生·寡糖素在不同濃度下抑制作用有明顯的差異性；1.26%辛菌胺醋酸鹽、15%絡(luò)氨銅、20%吡唑醚菌酯、60%多菌靈在不同濃度下對梨黑斑病的防效差異性不顯著。

2.1.2? 5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病毒力測定

EC50是指殺死 50% 對照物的藥劑濃度，通過抑制梨黑斑病菌的強(qiáng)度來測量化學(xué)藥劑毒力的強(qiáng)度，其數(shù)值越小則相應(yīng)化學(xué)藥劑的毒力就越強(qiáng)［11］。由表2可知，20%吡唑醚菌酯的抑制作用最好，EC50為 3.312 mg/L；其次為1.26%辛菌胺醋酸鹽，與20%吡唑醚菌酯的抑制效果差異性不大，EC50為5.675 mg/L；抑制效果一般的化學(xué)藥劑是15%絡(luò)氨銅和60%多菌靈，二者的抑制作用幾乎接近，EC50分別為為 54.298042 mg/L和55.259 mg/L；抑制效果最差的殺菌劑是10%中生·寡糖素，EC50為 334.470 mg/L。

2.2? 5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病的治療作用

2.2.1? 5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病病斑生長的抑制作用

5種化學(xué)對梨黑斑病治療效果結(jié)果見表3，結(jié)果表明：抑制效果最好的為20%吡唑醚菌酯，在濃度1000 mg/L時，其菌落生長量平均直徑為0.27 mm，抑制率達(dá)到了77.5%；最差的是60%多菌靈，在濃度62.5 mg/L時，抑制率為-6.7%。

差異性分析表明，10%中生·寡糖素在濃度62.5 mg/L時與其他濃度在防治病斑方面有著顯著性差異；1.26%辛菌胺醋酸鹽在濃度62.5 mg/L時與其他濃度有著顯著性差異，在125 mg/L和250 mg/L時、500 mg/L和1000 mg/L時并沒有顯著差異；15%絡(luò)氨銅、20%吡唑醚菌酯和60%多菌靈在濃度62.5 mg/L時與其他濃度治療效果有著顯著差異。

2.2.2? 5種化學(xué)藥劑對梨黑斑病毒力測定

由表4的可以看出5種化學(xué)藥劑中20%吡唑醚菌酯的治療效果最好，EC50為25.782 mg/L；其次為10%中生·寡糖素、1.26%辛菌胺醋酸鹽和60%的多菌靈；其中抑制效果最差的是15%絡(luò)氨銅，EC50為190.750 mg/L。

3? 討論與結(jié)論

試驗從預(yù)防和治療兩個角度，研究了不同濃度的5種化學(xué)殺菌劑對梨黑斑病菌的室內(nèi)防治效果，研究結(jié)果如下。

1）5種化學(xué)藥劑在預(yù)防和治療梨黑斑病方面都有一定的作用，但是不同的化學(xué)藥劑具有不同抑制作用，同一藥劑的不同濃度對于梨黑斑病的抑制作用也有顯著差異［12］。

2）預(yù)防研究結(jié)果表明，20%吡唑醚菌酯具有最好的抑制作用，在濃度1000 mg/L時，其菌落生長量平均直徑為0.08 mm，抑制率達(dá)到了93.3%，EC50為 3.312 mg/L；其次為1.26%辛菌胺醋酸鹽、15%絡(luò)氨銅和60%多菌靈；抑制效果最差的是10%中生·寡糖素，在濃度為62.5 mg/L時，其菌落生長量平均直徑為1.67 mm，抑制率僅為28.3%，EC50為 334.470 mg/L。

3）治療研究數(shù)據(jù)表明，最佳抑制效果仍為1000 mg/L的20%吡唑醚菌酯，菌落生長的平均直徑為0.27 mm，其抑制率達(dá)到77.5％，EC50為25.782 mg/L；其次為10%中生·寡糖素、1.26%辛菌胺醋酸鹽和15%絡(luò)氨銅；治療抑制效果最差的60%多菌靈在濃度62.5 mg/L時，抑制率為-6.7%，說明在60%多菌靈抑制病菌上產(chǎn)生了抗藥性。在治療梨黑斑病時，盡量少用或不用60%多菌靈，避免加重病害發(fā)生的程度。

4）同一藥劑在不同濃度下防治效果差異不顯著的情況下，應(yīng)選擇較低濃度，既節(jié)省了防治成本，也可減少樹體抗藥性和化學(xué)藥劑對生態(tài)環(huán)境危害。

5）綜上所述，在預(yù)防和治療梨黑斑病時我們可以選用20%吡唑醚菌酯，不論預(yù)防或者治療都有很好的作用。在預(yù)防時，要少用10%中生·寡糖素，避免預(yù)防效果不好，造成經(jīng)濟(jì)損失。在治療時，盡量少用60%多菌靈，減少不必要的投入。

試驗所用殺菌劑均兼有保護(hù)和防治功能。雖然化學(xué)藥劑對梨黑斑病有一定防治效果，但容易造成化學(xué)污染，其過度使用會造成果實農(nóng)藥殘留超標(biāo)，對生態(tài)環(huán)境造成污染。因此，梨黑斑病應(yīng)堅持“預(yù)防為主，綜合防治”的方針，以農(nóng)業(yè)防治、物理防治和生物防治為主，化學(xué)防治為輔［13-15］，從而保證較好的果實品質(zhì)，獲得較高的經(jīng)濟(jì)收益。試驗中20%吡唑醚菌酯的防治效果最佳，但不宜與其他化學(xué)藥劑混合使用，且使用濃度不能高于規(guī)定濃度，以免發(fā)生藥害［16］。

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