馬利青,闞 威,黃金云,張立成,王小紅,切 環(huán),王貴元,李長云,李秀萍,簡瑩娜,胡 勇,王戈平,王光華

(1.青海大學(xué)畜牧獸醫(yī)科學(xué)院,青海省動物疾病病原診斷與綠色防控技術(shù)研究重點實驗室,青海 西寧 810016;2.青海省動物疫病控制中心,青海 西寧 810001;3.青海省貴南縣畜牧獸醫(yī)站,青海 貴南 813100;4.青海省貴德縣畜牧獸醫(yī)站,青海 貴德 811700;5.青海省天峻縣畜牧獸醫(yī)站,青海 天峻 817200; 6.青海省海晏縣畜牧獸醫(yī)站,青海 海晏 812200)

2022年8月,青海省部分牧區(qū)陸續(xù)出現(xiàn)羊只死亡病例。根據(jù)對患羊臨床癥狀的了解,在對送檢報告予以綜合分析的基礎(chǔ)上,通過剖檢、當(dāng)?shù)赜卸倦s草調(diào)研及實驗室檢測等,基本明確了死亡原因。綜合已有調(diào)查資料,根據(jù)對致病關(guān)鍵因素的分析,提出了防治措施,供發(fā)病地區(qū)防治參考。

1 基本情況

2022年8月,陸續(xù)收到海南藏族自治州貴德縣、貴南縣和興?？h,海北藏族自治州海晏縣,海西蒙古族藏族自治州天峻縣因出現(xiàn)羊只死亡而發(fā)出的診斷求助申請,部分地方也送檢了病料,實驗人員對送檢樣品進(jìn)行了檢驗,但未檢出可疑的致病原。2022年9月,應(yīng)青海省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳的要求前往貴南縣進(jìn)行現(xiàn)場調(diào)研,期間走訪了4戶牧民,其中過馬營鎮(zhèn)3戶,塔秀鎮(zhèn)1戶,剖檢了12只死亡羊只。

在對來自貴南縣、貴德縣、興海縣、天峻縣以及海晏縣的送檢報告進(jìn)行綜合分析后,將疾病發(fā)生情況匯總?cè)缦?疾病發(fā)生在從夏季牧場轉(zhuǎn)到秋季牧場后的1周左右,發(fā)病羊多為歐拉羊和當(dāng)?shù)夭叵稻d羊的雜交后代,膘情較好的生產(chǎn)母羊及當(dāng)年羔羊多發(fā)。病程大約在1～4周左右,發(fā)病初期表現(xiàn)為精神沉郁、視力模糊和運動障礙,后逐漸臥地不起、消瘦,直至死亡。發(fā)現(xiàn)早期為急性死亡,后期多為慢性死亡,表現(xiàn)為逐漸消瘦,發(fā)燒,體溫高達(dá)39.7℃～41.2℃,喜飲水,個別病羊死前腹中有水聲;部分羊只死前流涎水或舌頭外露[1],期間伴有視力模糊、運動障礙、臥地不起,個別羊呻吟、回看腹部、劃泳等[2];少數(shù)羊排黑色稀便,后期排便困難或排出干硬的糞便[3-5]。有1戶養(yǎng)殖戶的羊群發(fā)生了流產(chǎn),325只生產(chǎn)母羊中有45只發(fā)生流產(chǎn),流產(chǎn)胎兒均無被毛。

2 剖檢變化

對上述地區(qū)12只剖檢羊只情況進(jìn)行分析匯總?cè)缦?皮下出血,尤其在胸前和前肢肩胛骨肌肉處(10/12);心包膜出血(8/12),心包積液(4/12),心臟冠狀溝脂肪出血(11/12);肝臟腫大(11/12),質(zhì)地脆(11/12),土黃色(8/12);膽囊充盈(11/12);脾臟腫大(4/12),邊緣有梗死灶(9/12);肺臟氣腫(10/12),肺臟實變(7/17),小葉性肺炎(3/12);腎臟腫大(7/12),腎臟出血(4/12),腎盂腎炎(2/12);大網(wǎng)膜出血(8/12);十二指腸出血(8/12)及球狀部潰瘍(5/12);腸系膜出血(7/12),腸系膜淋巴結(jié)腫大(11/12),呈條索狀(6/12);小腸出血(5/12);大腸盲腸糞結(jié)(7/12);膀胱充盈(7/12);胃粘膜脫落(5/12),瓣胃干燥(4/12);氣管外環(huán)出血(5/12),氣管內(nèi)環(huán)出血(2/12)。

3 顯微鏡鏡檢

對上述組織進(jìn)行涂片,經(jīng)染色鏡檢,未觀察到可疑病原。

4 實驗室檢測

對來自貴德縣、天峻縣、海晏縣和貴南縣的送檢病料進(jìn)行細(xì)菌的分離培養(yǎng)和分子生物學(xué)檢測等實驗室檢驗,均未檢出可疑致病原。后收集瘤胃內(nèi)容物樣品送至西北高原生物研究所檢測中心進(jìn)行苦馬豆素含量的檢測,標(biāo)樣和樣品中苦馬豆素氣相色譜檢測圖詳見圖1、圖2,樣品中苦馬豆素含量的檢測結(jié)果詳見表1。

表1 樣品中苦馬豆素含量的檢測結(jié)果

圖1 標(biāo)樣中苦馬豆素檢測色譜圖

結(jié)果顯示,在被檢的12份樣品中均檢出了苦馬豆素峰值,至于引起羊只發(fā)病的具體數(shù)值本文未予探究,文中所用樣品均為已臨床發(fā)病或死亡的羊只,而非在實驗條件下所獲得的準(zhǔn)確數(shù)據(jù)?？囫R豆素是有毒雜草棘豆的主要有毒成份,在瘤胃內(nèi)容物中檢出苦馬豆素可以說明本次羊只死亡事件與羊只采食大量的有毒雜草棘豆有關(guān)。在今后的研究中需要建立有關(guān)苦馬豆素以及有毒雜草棘豆中毒的判定標(biāo)準(zhǔn)。

據(jù)張生民等[4]報道,自1960年至今青海已有化隆、祁連、貴南、同德、共和、剛察、天峻、烏蘭及都蘭9個縣發(fā)生馬匹棘豆中毒;祁連、剛察和天峻3個縣發(fā)生羊只棘豆中毒;此外天峻縣尚有個別牛發(fā)生棘豆中毒。趙寶玉等[6]采用現(xiàn)場調(diào)查和資料收集相結(jié)合的方法,對我國瘋草的種類、分布、危害及各地有關(guān)瘋草中毒防治對策進(jìn)行了調(diào)查研究。紀(jì)亞君等報道[7],青海草地共有17種棘豆屬植物,主要分布在黃南藏族自治州的澤庫縣、河南縣,玉樹藏族自治州的玉樹市、稱多縣、囊謙縣、雜多縣、治多縣和曲麻萊縣,海北藏族自治州的剛察縣、海晏縣和祁連縣,海南藏族自治州的興?？h、貴南縣、同德縣以及海東地區(qū)的湟中、化隆等縣。王凱等[5]對青海省海北、海西、海南和海東地區(qū)的棘豆種類和危害做過調(diào)查,認(rèn)為甘肅棘豆為主要的危害種。李洪業(yè)[8]報道,英得爾種羊場家畜棘豆中毒情況嚴(yán)重,20世紀(jì)90年代呈猛增趨勢,已嚴(yán)重影響畜牧業(yè)的發(fā)展。家畜棘豆中毒通常發(fā)生于每年的8-11月間,中毒家畜以綿羊和馬為主,青海半細(xì)毛羊?qū)怪卸居绕涿舾?。才朗?dāng)周等[9]對英得爾種羊場的放牧綿羊自然棘豆中毒羊群采用補飼法、輪牧法和應(yīng)用棘豆中毒預(yù)防藥物“棘防A號”“棘防B號”和“棘防E號”綜合措施預(yù)防綿羊棘豆中毒,使羊群因棘豆中毒引起的死亡和淘汰率明顯減少,產(chǎn)羔數(shù)及繁活數(shù)明顯增加。王春慶等[10]采用現(xiàn)場調(diào)查和資料收集相結(jié)合的方法,對青海省草原棘豆屬的種類、分布、危害及各地有關(guān)棘豆中毒防治對策進(jìn)行了調(diào)查。多杰措等[11]用采集自貴南縣的黃花棘豆,研究試驗性黃花棘豆中毒后各時期綿羊的血清總蛋白、白蛋白和球蛋白含量變化。在給羊只飼喂黃花棘豆粉后,第28 d采血后停止投服黃花棘豆,試驗羊中毒癥狀在2周內(nèi)全部消失。韓啟龍[12]對海北州毒草分布和防治歷程進(jìn)行了概述,并提出毒草治理措施。李秀萍等[13]用在天峻縣關(guān)角山隧道采集的黃花棘豆對小白鼠進(jìn)行了毒性試驗。蘇忠超等[14]采用15種不同方法對天峻縣的黃花棘豆進(jìn)行處理,檢測了不同處理后各組苦馬豆素的含量。王婭琳等[15]以貴南縣高寒草甸棘豆草等4種退化指示植物為研究對象,分析放牧干擾對葉片碳、氮、磷含量及其化學(xué)計量特征,探討了高寒草甸生態(tài)系統(tǒng)中退化植物對環(huán)境變化的響應(yīng)和適應(yīng)策略。

5 苦馬豆素毒性機制

5.1 抑制 α-甘露糖苷酶和高爾基氏體

苦馬豆素中的甘露糖苷酶Ⅱ可抑制細(xì)胞溶酶體α-甘露糖苷酶和高爾基氏體甘露糖苷酶Ⅱ活性,導(dǎo)致家畜體內(nèi)低聚糖代謝和糖蛋白合成出現(xiàn)障礙,引起中毒癥狀,苦馬豆素陽離子與甘露糖陽離子的半椅狀空間結(jié)構(gòu)相似,其對甘露糖苷酶有高度親和性,從而抑制α-甘露糖苷酶的活性,造成甘露糖蓄積,使動物出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和實質(zhì)器官的病變,臨床表現(xiàn)出一系列神經(jīng)癥狀、運動障礙和流產(chǎn)[16,17]。

5.2 苦馬豆素誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

我國學(xué)者在體外毒性試驗研究中證實,苦馬豆素可以通過死亡受體通路和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑誘導(dǎo) SD 大鼠腦組織和大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生凋亡[18,19]。另外,苦馬豆素引起的細(xì)胞損傷與自噬有關(guān)[19,20]。

6 防除

6.1 對有毒棘豆的防治措施

6.1.1嚴(yán)禁過度放牧,合理利用草場 過度放牧是造成草地退化和毒草繁衍的主要因素,優(yōu)良牧草的種類和數(shù)量減少,棘豆屬植物就會大量生長。因此,要以草定畜,制定合理的放牧利用制度,避開毒草的毒性高峰期,嚴(yán)禁超載過牧,合理利用草場[21]。

6.1.2應(yīng)用化學(xué)藥物進(jìn)行防除 化學(xué)藥物多為 2,4-D 丁酯、2-甲-4-氯、施它隆、百草隆等藥物[22]?；瘜W(xué)防除具有高效、速效和使用方便的特點。

6.1.3應(yīng)用物理方法進(jìn)行防除 物理方法包括人工挖除、用火焚燒、生物防治和去毒利用等方法。

6.2 對黃花棘豆的防治途徑

對于有損于生態(tài)平衡的動植物,都必須予以根除,嚴(yán)杜建等[23]的研究對黃花棘豆的防治方法進(jìn)行了分析和概括。

6.2.1使用除草劑進(jìn)行防治 因為這種植物的分布范圍比較廣泛、密度比較高,最為高效的方法就是使用滅草劑來進(jìn)行根除[24]。滅草劑的種類有很多種,如氟樂靈、乙苯胺、百草枯等。

6.2.2使用物理方法進(jìn)行防治 通過人工或者機器進(jìn)行割除也是一種有效的方式,具有效率高、見效快的特點,割下來的毒草經(jīng)加工后還可以當(dāng)作飼料[25]。

6.2.3訓(xùn)練外來牲畜的辨別能力 一般情況下,當(dāng)?shù)丶倚笾卸镜母怕适呛苄〉?原因是這些家畜在長時間的生存過程中對毒草產(chǎn)生了一定的辨別能力。出現(xiàn)誤食最多的就是新引進(jìn)來的品種,如伊犁馬、光中驢等。因此,可以將新引進(jìn)的牲畜與當(dāng)?shù)丶倚蠓旁谝黄鹑︷B(yǎng),使引進(jìn)牲畜在一段時間后逐漸產(chǎn)生對毒草的辨別能力。

6.2.4研究新產(chǎn)品,抑制其生長 大自然中的每一種植物或者動物都有天敵存在,因此要加大資金投入力度,對黃花棘豆的品性、生長狀態(tài)等進(jìn)行深入了解,研究開發(fā)用于防治的新產(chǎn)品,以抑制其生長,最終使黃花棘豆問題得到科學(xué)、合理、有效的解決。

致謝在對羊只發(fā)病情況進(jìn)行調(diào)研的過程中得到青海省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳的大力支持,在檢測方法的建立過程中得到西北農(nóng)林科技大學(xué)趙寶玉教授的幫助,在樣品采集過程中得到海南州、貴南縣、貴德縣、天峻縣、海晏縣政府的大力幫助,在此一并致謝。