何立群，張舒云，袁婧，呂艷婷

諸暨市人民醫(yī)院病理科，浙江諸暨 311800

甲狀腺癌是目前內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，女性發(fā)生率高于男性，生長緩慢，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，根據(jù)其病理可分為4類：包括乳頭狀癌、濾泡狀癌、未分化癌和髓樣癌，其中以乳頭狀癌最為常見，臨床癥狀不明顯，多數(shù)患者在體檢時通過甲狀腺觸診發(fā)現(xiàn)甲狀腺小腫塊，確診時已是中晚期，預(yù)后普遍不良，已成為困擾我國居民健康的重要問題[1-2]。吲哚胺-2,3?雙加氧酶1（indoleamine 2,3-dioxygenase1，IDO-1）是存在于細胞內(nèi)的含亞鐵血紅蛋白的單體蛋白質(zhì)類酶，它通過降解色氨酸營造色氨酸饑餓環(huán)境來調(diào)節(jié)腫瘤免疫；AT豐富結(jié)合域1A（AT-rich interaction domain 1A，ARID1A）基因位于人類染色體的 1p35.3位置，在多種惡性腫瘤中表達異常[3-4]。核因子κB（nuclear factor- kappa B，NF-κB）是一種核轉(zhuǎn)錄因子，可能參與多種炎癥因子表達過程，其表達異常與病毒感染、惡性腫瘤等多種疾病有關(guān)[5]。IDO-1、ARID1A及NF-κB均與多種惡性腫瘤關(guān)系密切，但在甲狀腺癌中的表達尚不明確。本研究旨在觀察IDO-1、ARID1A及NF-κB在甲狀腺癌中的表達，并分析其與預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2020年1月至2022年1月諸暨市人民醫(yī)院收治的甲狀腺癌患者86例的組織標本進行研究，設(shè)為病例組，其中男45例，女41例，年齡32～73歲，平均年齡（52.61±7.47）歲，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移57例，未轉(zhuǎn)移29例，根據(jù)臨床分期分為Ⅰ+Ⅱ期20例、Ⅲ+Ⅳ期66例；根據(jù)預(yù)后情況分為死亡組21例，存活組65例。并選取同期諸暨市人民醫(yī)院非甲狀腺癌甲狀腺手術(shù)75例組織標本設(shè)為對照組，其中排除消化系統(tǒng)疾病者、腸上皮化生者，男35例，女40例，年齡28～70歲，平均年齡（52.39±7.13）歲，兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。納入標準：①符合《甲狀腺癌診療規(guī)范》[6]診斷標準；②預(yù)計生存期≥3個月；③腫瘤未累及臨近臟器；④均簽署知情同意書。排除標準：①合并嚴重臟器功能受損患者；②先天免疫性疾病者；③溝通障礙者；④有嚴重血流動力學(xué)不穩(wěn)定者；⑤哺乳期婦女；⑥近期使用糖皮質(zhì)激素者；⑦依從性較差者；⑧對本次藥物過敏者；⑨凝血功能障礙及血液系統(tǒng)病變者；⑩手術(shù)不耐受者。研究已獲得諸暨市人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準（倫理審批號：[2023]醫(yī)倫第（0117）號）。

1.2 主要試劑

S-P試劑盒、DAB顯色試劑盒購自丹麥DaKo公司，IDO-1、ARID1A及NF-κB多克隆抗體購自廣州安必平醫(yī)藥科技有限公司。

1.3 實驗方法

所有組織標本石蠟包埋標本采用免疫組織化學(xué)（SP）染色，按試劑盒說明操作，主要包括切片脫蠟水化，微波修復(fù)抗原，山羊血清封閉，分別滴加IDO-1、ARID1A及NF-κB單克隆抗體，以生物素標記，DAB顯色，蘇木精襯染，中性樹膠封片，顯微鏡觀察[7]。

1.4 結(jié)果判斷

免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判斷：細胞質(zhì)或細胞核存在棕黃色顆粒即定義為陽性細胞。表達水平判定：在光鏡下觀察，將每一張切片中棕黃色陽性細胞數(shù)>10%定義為表達陽性，陽性細胞數(shù)≤10%定義表達陰性（圖1）。

圖1 IDO-1、ARID1A、NF-κB表達水平判定（SP染色）

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 24.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理分析。計數(shù)資料以例數(shù)（百分比）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組IDO-1、ARID1A及NF-κB表達情況比較

病例組患者IDO-1的陽性表達率為69.77%（60/86），明顯高于對照組33.33%（25/75）；病例組患者ARID1A的陽性表達率為47.67%（41/86），明顯低于對照組的78.67%（59/86），病例組患者NF-κB的陽性表達率為87.21%（75/86），明顯高于對照組21.33%（16/86），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01，表1）。

表1 兩組IDO-1、ARID1A及NF-κB表達情況比較[n（%）]

2.2 IDO-1、ARID1A及NF-κB表達與甲狀腺癌臨床病理的關(guān)系

所有患者性別、不同年齡段、包膜侵犯的IDO-1、ARID1A及NF-κB表達水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理類型的IDO-1、ARID1A及NF-κB表達水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，表2）。

表2 IDO-1、ARID1A及NF-κB表達與甲狀腺癌臨床病理的關(guān)系[n（%）]

2.3 不同預(yù)后結(jié)局IDO-1、ARID1A及NF-κB表達情況比較

死亡組IDO-1、NF-κB陽性表達率均顯著高于存活組，ARID1A陽性表達率均顯著低于存活組（P<0.05，表3）。

表3 不同預(yù)后結(jié)局IDO-1、ARID1A及NF-κB表達情況比較[n（%）]

2.4 IDO-1、ARID1A及NF-κB與甲狀腺癌臨床病理和預(yù)后的相關(guān)性分析

IDO-1、NF-κB與甲狀腺癌患者腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理類型及預(yù)后之間均呈正相關(guān)，ARID1A與甲狀腺癌患者腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理類型及預(yù)后之間均呈負相關(guān)，（P<0.05，表4）。

表4 IDO-1、ARID1A及NF-κB與甲狀腺癌臨床病理和預(yù)后的相關(guān)性分析

3 討論

甲狀腺位于人體頸部甲狀軟骨下，而甲狀腺癌是最常見的甲狀腺惡性腫瘤，主要表現(xiàn)為甲狀腺內(nèi)發(fā)現(xiàn)腫塊，腫塊增長明顯，晚期可出現(xiàn)呼吸及吞咽障礙，還可侵犯周圍組織，發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，嚴重威脅患者生命[8]。甲狀腺癌發(fā)生率較高，約占全身惡性腫瘤的1%，多發(fā)生于青春后期和絕經(jīng)期女性，近年來其發(fā)生率呈上升趨勢，對人類生命健康造成了極大威脅[9]。因此，尋找與疾病相關(guān)的細胞因子進行早期預(yù)測對改善患者預(yù)后有重要意義。目前臨床多使用超聲檢查診斷疾病，但超聲易被漏診和誤診，故尋找其他簡單、準確鑒別疾病的方法有重要意義。

IDO-1是一種高效的免疫調(diào)節(jié)酶，廣泛分布于包括胎盤、結(jié)腸、脾臟、肝臟、腎臟等器官中，在人體成纖維細胞、B淋巴細胞中均有表達，研究顯示，IDO-1可在腫瘤細胞及宿主的抗原提呈細胞中表達，營造一個免疫抑制的微環(huán)境來阻斷宿主抗腫瘤的免疫反應(yīng)[10]。本研究結(jié)果顯示，甲狀腺癌患者IDO-1的陽性表達率高于健康人群，可隨著腫瘤分期而發(fā)生變化，死亡組陽性表達率均顯著高于存活組。結(jié)果提示，IDO-1在甲狀腺癌中表達較高，參與疾病的發(fā)展。ARID1A是個重要的抑癌基因，在細胞的增殖、分化，腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移等方面發(fā)揮了重要的作用，被證實在食管癌、膽管癌、胰腺癌等癌癥中表達降低[11]。病例組患者ARID1A的陽性表達率較健康人群低，且死亡組ARID1A陽性表達率均顯著低于存活組，提示ARID1A在甲狀腺癌中表達較低，可作為預(yù)測疾病的標志物。馮凌飛等[12]研究顯示，ARID1A能促使腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，其過表達會抑制癌細胞形成，可能是與ARID1A通過影響AKT的磷酸化，影響癌細胞增殖和分化有關(guān)。

NF-κB是一類核蛋白因子，正常情況下以非活性形式存在于胞質(zhì)中，被激活后轉(zhuǎn)到細胞核，與細胞增殖和凋亡密切相關(guān)[13]。研究顯示，NF-κB能抑制細胞死亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，使細胞對凋亡信息產(chǎn)生抗性；且其水平升高可促使細胞周期向S期轉(zhuǎn)化，細胞增殖旺盛[14]。本研究結(jié)果顯示，病例組患者NF-κB的陽性表達率明顯較健康人群高，且死亡組NF-κB陽性表達率均顯著高于存活組。張凡等[15]研究也顯示，NF-κB 被不恰當激活，功能異常增高，可導(dǎo)致正常信號轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)生改變，促進細胞癌變，在甲狀腺癌中呈高表達，參與疾病的發(fā)生與發(fā)展，與本研究結(jié)果相似。分析其原因可能是因為NF-κB異常升高可導(dǎo)致細胞的正常信號轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)生改變，促進細胞癌變，從而參與甲狀腺癌的發(fā)生。本研究進一步相關(guān)性分析顯示，IDO-1、NF-κB與甲狀腺癌患者腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理類型及預(yù)后之間均呈正相關(guān)，ARID1A與甲狀腺癌患者腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、病理類型及預(yù)后之間均呈負相關(guān)。

綜上所述，甲狀腺癌組織中IDO-1、ARID1A及NF-κB陽性表達率異常，可能協(xié)同參與了甲狀腺癌的發(fā)生、發(fā)展，可預(yù)測患者預(yù)后情況。