高婷婷，高立明，王廣成，李婷，許艷秋

(1.成都市食品檢驗研究院，成都 611135；2.四川省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳植物保護站，成都 610041)

苯唑草酮(topramezone)又稱苯吡唑草酮，是一種對羥基苯基丙酮酸酯雙氧化酶(HPPD)類抑制劑，具有安全性高、選擇性好等特點，能有效防除玉米田一年生禾本科和闊葉雜草[1]。氯氟吡氧乙酸異辛酯(fluroxypyr-meptyl)是吡啶類內(nèi)吸傳導(dǎo)型苗后除草劑，其施用后能被植物葉片和根迅速吸收和快速傳導(dǎo)，使敏感作物出現(xiàn)典型的激素類除草劑反應(yīng)，導(dǎo)致植株畸形、扭曲，最終枯死，主要用于防除闊葉類雜草，對禾本雜草無效[2]。因此，苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯混配不僅可以達到同時防除禾本科和闊葉類雜草的效果，還可提高藥效，延緩雜草抗藥性的產(chǎn)生。目前，關(guān)于苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯的檢測方法已有文獻報道[2-4]，但2 種藥劑混配的分析方法未見報道。基于此，本文采用反相高效液相色譜法對20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑進行同時測定，在選定的色譜條件下2 種有效成分與雜質(zhì)可以完全分離，此方法簡便、快速、準確，能同時測定2 種有效成分的含量，是一種理想的分析方法。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

Agilent 1260 型高效液相色譜儀配二極管陣列檢測器(美國安捷倫科技有限公司)；AB204-S 電子天平[梅特勒-托利多貿(mào)易(上海)有限公司]；KH-500E 超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；過濾器：濾膜孔徑0.45 μm(天津津騰實驗設(shè)備有限公司)。

苯唑草酮標準品(≥98.0%，Dr.Ehrenstorfer)；氯氟吡氧乙酸異辛酯標準品[≥98.0%，國家農(nóng)藥質(zhì)檢中心(沈陽)]；20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑；甲醇(色譜純，飛世爾科技公司)；磷酸(分析純，四川西隴化工有限公司)。

1.2 色譜條件

色譜柱：ZORBAXSB-C18不銹鋼柱(5μm，4.6mm×150 mm；流動相：甲醇+0.1%磷酸溶液；梯度洗脫條件如表1 所示；流量：1.0 mL/min；柱溫：(30±2)℃；檢測波長240 nm；進樣體積：3.0μL。在該色譜條件下，苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯的保留時間分別約為5.7、15.1 min。典型色譜圖見圖1。此外，實驗中可根據(jù)儀器特點適當(dāng)調(diào)整色譜操作條件以獲得最佳效果。

圖1 20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑樣品的高效液相色譜圖

表1 流動相梯度淋洗表

1.3 測定步驟

1.3.1 標準品溶液的配制

準確稱取苯唑草酮標準品0.04g(精確至0.0002 g)、氯氟吡氧乙酸異辛酯標準品0.06 g(精確至0.000 2 g)，置于50 mL 容量瓶中，先用10 mL 二氯甲烷溶解，超聲5 min，加入25 mL 甲醇超聲溶解10 min，恢復(fù)至室溫后，用甲醇定容，備用。

1.3.2 樣品溶液的配制

準確稱取20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑樣品0.5 g(精確至0.000 2 g)，置于50 mL 容量瓶中，先用10 mL 二氯甲烷溶解，超聲5 min，加入25 mL 甲醇超聲溶解10 min，恢復(fù)至室溫后，用甲醇定容，經(jīng)0.45μm 孔徑濾膜過濾，收集濾液備用。

1.3.3 測定

儀器于前文所述色譜條件下穩(wěn)定，待基線穩(wěn)定后，連續(xù)進標準品溶液數(shù)針至相鄰2 針峰面積變化小于1.5%，按照標準品溶液、樣品溶液、樣品溶液、標準品溶液的順序進樣測定。

1.3.4 計算

將標準品和樣品溶液中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)的峰面積帶入下式計算，試樣中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)的質(zhì)量分數(shù)為ω(%)。

式中：A1為標準品溶液中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)峰面積的平均值；A2為樣品溶液中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)峰面積的平均值；m1為稱取苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)標準品的質(zhì)量(g)；m2為稱取樣品的質(zhì)量(g)；ω1為標準品中苯唑草酮(氯氟吡氧乙酸異辛酯)的質(zhì)量分數(shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 溶劑的選擇

苯唑草酮微溶于水，在有機溶劑中的溶解度(g/L，20 ℃)：二氯甲烷25～29，DMF 114～133，丙酮、乙腈、乙酸乙酯、正庚烷、異丙醇、甲醇、正辛醇、甲苯＜10；氯氟吡氧乙酸異辛酯于27.7°C 時在水中溶解度0.9 mg/L，在丙酮中大于4%，在氯仿和二氯甲烷中大于50%。因該2 種有效成分在二氯甲烷中均具有滿足需求的溶解度，且二氯甲烷與甲醇能互溶，故選擇二氯甲烷作為有效成分的溶解溶劑，甲醇作為稀釋定容溶劑。

2.2 流動相的選擇

選擇常用的反相填料ZORBAX SB-C18不銹鋼色譜柱，依據(jù)有效成分的理化性質(zhì)選擇甲醇水體系為流動相。因2 種物質(zhì)極性差異較大，當(dāng)甲醇+水=40+60(體積比)時，苯唑草酮出峰時間約為6 min，但氯氟吡氧乙酸異辛酯的出峰時間大于40 min；當(dāng)甲醇+水=80+20(體積比)時，氯氟吡氧乙酸異辛酯出峰時間約為10 min，但苯唑草酮出峰時間小于2 min。為保證目標物峰形對稱，出峰時間適中，最終選擇1.2 節(jié)所述的梯度洗脫條件進行檢測。

2.3 檢測波長的確定

采用DAD 檢測器，對苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯標準品在200～400 nm 波長下進行掃描，紫外吸收圖見圖2。苯唑草酮的主吸收波長為200、285 nm，氯氟吡氧乙酸異辛酯的主吸收波長在200、240 nm，2 種物質(zhì)的紫外曲線最大交叉點為215 nm。在215 nm波長下干擾明顯，因此選擇波長240 nm 為檢測波長，在該波長條件下氯氟吡氧乙酸異辛酯有吸收平臺，苯唑草酮有較大吸收，且無雜質(zhì)干擾。

圖2 苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯標準品的紫外掃描圖

2.4 線性關(guān)系的測定

分別稱取98%苯唑草酮標樣(0.019 7、0.032 3、0.043 5、0.0553 1、0.075 2 g)置于50 mL 的容量瓶中，按上述方法配制成5 個不同質(zhì)量濃度的苯唑草酮標準品溶液(0.386 1、0.633 1、0.852 6、1.084 1、1.473 9 mg/mL)，按上文所述條件測定，以苯唑草酮質(zhì)量濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得工作曲線(圖3)。苯唑草酮標樣的質(zhì)量濃度(x)與峰面積(y)滿足線性關(guān)系y=5 518.7x-80.651，線性決定系數(shù)R2=0.999 9。

圖3 苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯質(zhì)量濃度與其響應(yīng)值之間的線性關(guān)系圖

分別稱取98%氯氟吡氧乙酸異辛酯標樣(0.029 8、0.048 9、0.065 8、0.083 7、0.113 9 g)置于50 mL 的容量瓶中，按上述方法配制成5 個不同質(zhì)量濃度的氯氟吡氧乙酸異辛酯標準品溶液(0.584 1、0.958 4、1.289 7、1.640 5、2.232 4 mg/mL)，按上文所述條件測定，以氯氟吡氧乙酸異辛酯質(zhì)量濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得工作曲線(圖3)。氯氟吡氧乙酸異辛酯標樣質(zhì)量濃度(x)與峰面積(y)滿足線性關(guān)系y=3 893.8x-29.951，線性決定系數(shù)R2=1.000 0。

2.5 方法精密度

對同一20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑樣品按上述方法進行6 次平行測定，計算其標準偏差及變異系數(shù)。根據(jù)CIPAC 方法驗證指南，當(dāng)精密度測定中的RSD 小于修改的Horwitz公式2(1-0.51ogC)×0.67 計算結(jié)果，表明方法精密度測定結(jié)果符合要求。精密度測定結(jié)果見表2，苯唑草酮和氯氟吡氧乙酸異辛酯的質(zhì)量分數(shù)平均值分別為8.05%和12.16%，方法的標準偏差分別為0.026 8 和0.061 5，變異系數(shù)(RSD)分別為0.33%和0.51%。2 者RSD 均小于修改的Horwitz 公式計算值，表明該方法精密度的測定結(jié)果符合要求。

表2 分析方法的精密度測定

2.6 方法準確度

準確稱取98%苯唑草酮標準品0.212 9 g、98%氯氟吡氧乙酸異辛酯標準品0.322 6 g(精確至0.000 2 g)于100 mL 的容量瓶中，按上述方法配制得到所設(shè)計的苯唑草酮(2.086 mg/mL)與氯氟吡氧乙酸異辛酯(3.161 mg/mL)的混合標準溶液。平行稱取6 份20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑樣品，準確加入苯唑草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯混合標準溶液10.0 mL，按上述方法測定其回收率，結(jié)果見表3。可見，苯唑草酮酯的添加回收率為99.17%～100.17%，平均回收率為99.65%；氯氟吡氧乙酸異辛酯的添加回收率為99.09%～100.56%，平均回收率為99.87%。說明該方法可滿足產(chǎn)品中苯唑草酮、氯氟吡氧乙酸異辛酯的檢測要求。

表3 分析方法的準確度測定

3 結(jié)論

本文采用反相高效液相色譜法建立了同時測定20%苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯可分散油懸浮劑有效成分的方法，表現(xiàn)出簡便、快速、準確及分離效果好等優(yōu)點。該方法重現(xiàn)性好、準確度高、線性關(guān)系良好，是苯唑草酮·氯氟吡氧乙酸異辛酯混配制劑中有效成分質(zhì)量分數(shù)檢測的有效方法，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制和檢測。