汪雪娟，高 翀，龐懷林

(1.上海泰禾化工有限公司,上海 201615；2.南通泰禾化工股份有限公司，南通 226407)

氟咯草酮(fluorochloridone)是原美國(guó)施多福公司(Staufer Chemical Co.) 20世紀(jì)70年代末開發(fā)、80年代中期投產(chǎn)的吡咯烷酮類旱田除草劑，其主要通過(guò)抑制植物體內(nèi)類胡蘿卜素的生物合成而發(fā)揮除草效果[1-3]，主要登記用于小麥、冬黑麥、馬鈴薯、向日葵等作物田防除各種闊葉雜草[4-6]。目前有關(guān)于氟咯草酮原藥的分析方法[7]和氟咯草酮乳油制劑的GC-MS方法的報(bào)道[8]，但是氟咯草酮乳油制劑HPLC分析方法尚未見公開報(bào)道。氟咯草酮乳油是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)實(shí)際中使用最多最常見的一種劑型。為了確保該產(chǎn)品生產(chǎn)質(zhì)量及其防治效果，建立一種穩(wěn)定、準(zhǔn)確、可靠、快速的250 g/L氟咯草酮乳油HPLC分析方法尤為重要。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

LC-20AD高效液相色譜儀配可調(diào)波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器：島津SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器及色譜工作站Labsolution (日本島津)；ML204型電子天平(瑞士梅特勒托利多集團(tuán))；2200T型超聲波清洗儀(上海安譜科學(xué)儀器有限公司)；0.45 μm有機(jī)相濾膜(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)。

甲醇：色譜純(上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)；新蒸二次蒸餾水；氟咯草酮標(biāo)樣，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0% (沈陽(yáng)化工研究院)；250 g/L氟咯草酮乳油(南通泰禾化工股份有限公司)。

1.2 色譜條件

色譜柱為ZORBAX Eclipse XDB-C18柱 (250 mm×4.6 mm，內(nèi)裝5 μm填充物)；流動(dòng)相為甲醇-水(體積比64∶36)，經(jīng)濾膜過(guò)濾，脫氣；流速為1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm；柱溫為(30±2) ℃；進(jìn)樣體積為10 μL。在上述色譜操作條件下，保留時(shí)間：順式氟咯草酮約15.3 min，反式氟咯草酮約16.3 min。氟咯草酮標(biāo)樣和試樣的高效液相色譜圖見圖1和圖2。

圖1 氟咯草酮標(biāo)樣的高效液相色譜圖

圖2 250 g/L氟咯草酮乳油的高效液相色譜圖

1.3 溶液的配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取約0.1 g (精確至0.000 1 g)氟咯草酮標(biāo)樣于50 mL容量瓶中，加入約 30 mL甲醇，超聲振蕩10 min，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻；用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

1.3.2 試樣溶液的制備

稱取含0.1 g (精確至0.000 1 g) 250g/L氟咯草酮乳油試樣于50 mL容量瓶中，加入約30 mL甲醇，超聲振蕩10 min，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻；用移液管移取上述溶液5 mL于50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

1.4 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待相鄰2針?lè)┎萃姆迕娣e相對(duì)變化小于1.0%，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.5 計(jì)算

試樣中氟咯草酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)按式⑴計(jì)算，氟咯草酮的質(zhì)量濃度按式⑵計(jì)算：

式中：X1為試樣中氟咯草酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)；X2為試樣中氟咯草酮的質(zhì)量濃度(g/L)；m1為氟咯草酮標(biāo)樣的質(zhì)量(g)；A2為試樣溶液中順式與反式氟咯草酮峰面積總和的平均值；P為氟咯草酮標(biāo)樣的純度(%)；m2為試樣質(zhì)量(g)；為試樣前后2針標(biāo)樣溶液中順式與反式氟咯草酮峰面積總和的平均值；ρ為20 ℃時(shí)250 g/L氟咯草酮乳油的密度值(g/mL)。

2 結(jié)果和分析

2.1 分析方法特異性

本試驗(yàn)采用 HPLC-DAD峰純度分析法來(lái)鑒別氟咯草酮。氟咯草酮標(biāo)樣、250 g/L氟咯草酮乳油中的氟咯草酮 HPLC-DAD峰純度中均顯示未檢測(cè)到不純物，最小峰純度指數(shù)均為正數(shù)，說(shuō)明有效成分處無(wú)其他物質(zhì)干擾，符合定量分析要求。峰純度如圖3、圖4所示。

圖3 氟咯草酮標(biāo)樣中目標(biāo)峰純度

圖4 250 g/L氟咯草酮試樣中目標(biāo)峰純度

2.2 分析方法的線性相關(guān)性測(cè)定

稱取約0.1 g (精確至0.000 1 g)氟咯草酮標(biāo)樣于50 mL容量瓶中，加入約 30 mL甲醇，超聲振蕩10 min，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，此為標(biāo)樣儲(chǔ)備液。

用移液管分別移取3、4、5、6、7、8 mL的標(biāo)樣儲(chǔ)備液至6個(gè)50 mL中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。按照本方法所確定的操作條件，待儀器穩(wěn)定后，按照質(zhì)量濃度遞增順序測(cè)定每個(gè)溶液中氟咯草酮的峰面積，取2次測(cè)定的平均結(jié)果，結(jié)果見表 1。以氟咯草酮質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖 5。由圖 5可見，氟咯草酮質(zhì)量濃度(x)與其對(duì)應(yīng)的峰面積相應(yīng)值(y)之間呈現(xiàn)出良好的線性相關(guān)，其線性回歸方程為y=19 122.809 9x+5 660.828 6，相關(guān)系數(shù)R2=1.000 0。

表1 氟咯草酮線性范圍的測(cè)定

圖5 氟咯草酮峰面積與質(zhì)量濃度之間的線性關(guān)系圖

2.3 分析方法的精密度試驗(yàn)

在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，對(duì)同一250 g/L氟咯草酮乳油試樣平行測(cè)定6次，結(jié)果見表2?？梢?，氟咯草酮的標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)分別為0.02和0.09%。

表2 250 g/L氟咯草酮乳油的精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)

稱取約0.1 g (精確至0.000 1 g) 氟咯草酮標(biāo)樣至50 mL容量瓶中，加入約30 mL甲醇，超聲振蕩10 min，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，此為標(biāo)樣儲(chǔ)備液。

按250 g/L氟咯草酮乳油配方比例要求，將除原藥以外的所有助劑混勻作制劑空白，稱取6份0.03 g(精確至0.000 01g)制劑空白于 50 mL容量瓶中，加入約30 mL甲醇，再移取5 mL上述標(biāo)樣儲(chǔ)備液至稱有制劑空白的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，備用。在上述操作條件下分別進(jìn)行分析測(cè)定，結(jié)果見表 3。可見，氟咯草酮的平均回收率為99.80%。

表3 250 g/L氟咯草酮乳油的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié) 論

本文采用高效液相色譜技術(shù)建立了一種快速測(cè)定250 g/L氟咯草酮乳油中有效成分氟咯草酮的分析方法。采用 C18不銹鋼色譜柱(250 mm×4.6 mm i.d.×5 μm)和紫外檢測(cè)器，以甲醇-水(體積比 64∶36)為流動(dòng)相，測(cè)得有效成分的精密度和準(zhǔn)確度高、線性關(guān)系良好。該方法具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)過(guò)程穩(wěn)定、結(jié)果準(zhǔn)確、分離效果好等特點(diǎn)，可用于250 g/L氟咯草酮乳油生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)品的檢測(cè)。