胡澤坤, 晏婷婷, 李改云, 秦嘉惠, 吳新文, 陳 媛*

(1.中國林業(yè)科學(xué)研究院 木材工業(yè)研究所,北京 100091; 2.海南那大農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司,海南 儋州 571724)

沉香是一味名貴中藥,具有抗菌、抗氧化、消炎、助眠、止咳等藥理作用[1-3],基于沉香開發(fā)的中成藥有上百種,衍生的系列產(chǎn)品在中醫(yī)藥、康養(yǎng)保健等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。白木香(Aquilariasinensis(Lour.)Gilg)是我國唯一的生產(chǎn)沉香的基源植物[4],主要產(chǎn)于我國海南、廣東、廣西等地。奇楠沉香(奇楠,QN)被認(rèn)為是最高品質(zhì)的沉香,國產(chǎn)奇楠的基源植物仍為白木香[5]?；瘜W(xué)成分決定著沉香的品質(zhì)與特征,也是沉香具有多種生物活性的物質(zhì)基礎(chǔ),其主要化學(xué)成分為倍半萜類化合物和2-(2-苯乙基)色酮類化合物。根據(jù)色酮類化合物的骨架結(jié)構(gòu),可將其分為5,6,7,8-四氫-2-(2-苯乙基)色酮(THPECs)、單環(huán)氧-2-(2-苯乙基)色酮(EPECs)、雙環(huán)氧-2-(2-苯乙基)色酮(DEPECs)和Flidersia型2-(2-苯乙基)色酮(FTPECs)這4類[6]。QN與傳統(tǒng)沉香(TA)化學(xué)成分存在顯著差異,QN中含有大量的2-[2-(4-甲氧基苯)乙基]色酮和2-(2-苯乙基)色酮[7-8],而TA中沉香四醇含量豐富[9]。此外,化學(xué)成分的有效提取對于沉香的合理利用至關(guān)重要。乙醇具有來源廣泛、價(jià)格低、毒性弱以及提取效率高等優(yōu)點(diǎn),被認(rèn)為是沉香提取溶劑的理想選擇,多項(xiàng)研究表明乙醇體積分?jǐn)?shù)會影響提取物的化學(xué)成分種類和含量[10-11],進(jìn)而可能會影響其生物活性。為進(jìn)一步探究奇楠與傳統(tǒng)沉香內(nèi)在成分差異,本研究以奇楠和傳統(tǒng)沉香為對象,探討了熱提法(HE)、冷提法(CE)以及乙醇體積分?jǐn)?shù)對二者提取物化學(xué)成分種類和含量的影響。此外,還分析了不同提取物的ABTS自由基清除能力和鐵離子還原能力,以及對大腸桿菌、白色念珠菌的抑制能力,以期為奇楠的進(jìn)一步開發(fā)利用和潛在價(jià)值挖掘提供理論依據(jù)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 原料、試劑與儀器

奇楠沉香(QN)與傳統(tǒng)沉香(TA)樣品均產(chǎn)自廣東省,奇楠樣品結(jié)香樹齡4年,結(jié)香時(shí)間15個(gè)月;傳統(tǒng)沉香樣品結(jié)香樹齡12年,結(jié)香時(shí)間36個(gè)月,經(jīng)鑒定兩者均為瑞香科沉香屬。大腸桿菌(Escherichiacoil)CICC 10899和白色念珠菌(Candidaalbicans)CICC 32380,購于中國工業(yè)微生物菌種保藏中心。2,2’-聯(lián)氮雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(ABTS)法總抗氧化能力(T-AOC)檢測試劑盒、Fe3+還原能力(FRAP)法T-AOC檢測試劑盒,購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司;沉香四醇(純度≥98%)、異沉香四醇(純度≥98%),購于成都菲德生物技術(shù)有限公司;4’-甲氧基沉香四醇(純度≥90%)、 6-羥基-2-(2-苯乙基)色酮(純度≥98%)、 6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮(純度≥98%)、 2-(2-苯乙基)色酮(純度≥98%),購于成都普思生物科技股份有限公司;α-石竹烯(純度≥93%),購于阿拉丁試劑有限公司;藍(lán)桉醇(純度≥85%),購于上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司。

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;LC-20A型高效液相色譜(HPLC)儀、QP2010型氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用儀,日本SHIMADZU公司;G6510型超高效液相色譜-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-Q-Tof-MS),美國Agilent公司;SpectraMax 190型酶標(biāo)儀,美國Molecular Devices公司。

1.2 奇楠與傳統(tǒng)沉香特征成分的提取

1.2.1熱提(HE)法 取樣品粉末2.000 g(精確至0.001)于250 mL圓底燒瓶中,加入100 mL乙醇,稱質(zhì)量,常溫靜置1 h。連接冷凝回流裝置,加熱并保持微沸60 min。冷卻至室溫后再次稱質(zhì)量,用相應(yīng)的提取溶劑補(bǔ)足質(zhì)量,濾紙過濾。

1.2.2冷提(CE)法 取樣品粉末2.000 g(精確至0.001)置于300 mL錐形瓶中,加入100 mL乙醇,同時(shí)加入轉(zhuǎn)子,磁力攪拌6 h(轉(zhuǎn)速400 r/min),然后再靜置18 h,搖勻后過濾。

1.2.3提取物得率測定 乙醇體積分?jǐn)?shù)分別為0%(即水)、 35%、 45%、 55%、 65%、 75%和85%,提取物含量的測定參照《藥典》附錄[12]中浸出物含量測定方法。取濾液25 mL于已干燥至質(zhì)量恒定(m1)的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,103 ℃鼓風(fēng)烘箱干燥3 h。干燥后的蒸發(fā)皿于干燥器中冷卻至室溫,稱質(zhì)量(m2),每組測試重復(fù)3次取平均值。提取物得率(X)按照式(1)進(jìn)行計(jì)算。

(1)

式中:m1—蒸發(fā)皿的質(zhì)量,g;m2—提取物與蒸發(fā)皿質(zhì)量之和,g;ms—樣品質(zhì)量,g;W—樣品含水率[13],%。

1.3 倍半萜類化合物分析

1.3.1樣品制備 取1.2節(jié)中樣品濾液25 mL,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮至約5 mL,加入25 mL無水乙醚萃取,連續(xù)萃取4次,合并萃取液并將溶劑揮干,并用乙酸乙酯定容至5 mL,過0.45 μm濾膜,制得水提取樣品,備用。取10 mL樣品濾液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮,將溶劑揮干,采用乙酸乙酯定容至2 mL,過0.45 μm濾膜,制得乙醇提取樣品,備用。

1.3.2GC-MS測試條件 選用DB-5HT色譜柱,載氣(99.999%高純氦氣)流速為0.5 mL/min,進(jìn)樣量1 μL,分流比20∶1,色譜柱升溫程序?yàn)?0 ℃保持1 min,以2.0 ℃/min的速率升溫至150 ℃并保持5 min,最后以2.0 ℃/min速率升溫至280 ℃并保持10 min。MS條件:離子源溫度230 ℃,電離能70 eV,全掃描模式,m/z掃描范圍50～500。采用同一程序?qū)φ龢?gòu)烷烴混標(biāo)(C9～C40)對照品進(jìn)行分析。

1.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將藍(lán)桉醇和α-石竹烯對照品配制成不同質(zhì)量濃度溶液,進(jìn)行GC-MS分析,以質(zhì)量濃度為自變量,峰面積為因變量,計(jì)算2個(gè)對照品的線性方程。其中,藍(lán)桉醇線性回歸方程為y=38 242x-521 484,線性范圍22.5～360 mg/L,R2=0.999 4;α-石竹烯線性回歸方程為y=40 329x-500 100,線性范圍20～320 mg/L,R2=0.998 4。

1.4 色酮類化合物分析

1.4.1測試條件 HPLC分析選用Phenomenex luna C18色譜柱(250 mm×4.6 mm, i.d.0.1 μm),流動(dòng)相為乙腈/0.1%甲酸溶液。HPLC程序按照課題組前期建立的方法[6]進(jìn)行。UPLC-Q-Tof-MS定性分析的色譜條件與HPLC分析方法相同,質(zhì)譜條件按照文獻(xiàn)[14]方法進(jìn)行。

1.4.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取沉香四醇、 4’-甲氧基沉香四醇、異沉香四醇、 6-羥基-2-(2-苯乙基)色酮、 6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮、 2-(2-苯乙基)色酮6個(gè)對照品,配制成不同質(zhì)量濃度對照品溶液,按照1.4.1節(jié)中的程序進(jìn)行HPLC分析,以質(zhì)量濃度為自變量,峰面積為因變量,計(jì)算6個(gè)對照品的線性回歸方程(表1)。

表1 對照品的線性回歸方程

1.5 抗氧化活性測試

1.5.1樣品 選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為0%、 35%、 55%的HE法QN與TA樣品濾液進(jìn)行抗氧化活性分析。

1.5.2ABTS自由基清除率 測定方法參考文獻(xiàn)[2]進(jìn)行。將試劑盒中氧化劑溶液和ABTS溶液按照1∶1比例混合制成ABTS工作母液,錫箔紙遮光,室溫反應(yīng)12 h,使ABTS自由基(ABTS·)產(chǎn)生完全。用80%乙醇將ABTS工作母液稀釋,使其在734 nm處的吸光度為(0.70±0.05),制成測試溶液。將10 μL樣品溶液或空白對照液(80%乙醇)與200 μL的ABTS·溶液加入96孔酶標(biāo)板中,室溫反應(yīng)6 min,采用酶標(biāo)儀測定溶液吸光度(734 nm)。以Trolox為陽性對照。試驗(yàn)重復(fù)3次取平均值,ABTS·清除率(W)計(jì)算如式(2)所示:

W=(A0-A)/A0×100%

(2)

式中:A0—空白對照液加入ABTS·溶液后的吸光度;A—樣品溶液加入ABTS·溶液后的吸光度。

1.5.3總抗氧化能力 參照文獻(xiàn)[15]采用FRAP法分析奇楠和傳統(tǒng)沉香的總抗氧化能力。采用FeSO4·7H2O標(biāo)準(zhǔn)品繪制Fe2+濃度(0.15～1.5 mmol/L)與吸光度(593 nm)之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程y=0.474 7x+0.086 7,R2=0.994。取5 μL樣品溶液或?qū)瞻渍找?80%乙醇)與180 μL的FRAP工作液(37 ℃孵育)加入96孔酶標(biāo)板中,室溫反應(yīng)5 min,采用酶標(biāo)儀記錄反應(yīng)體系的吸光度(593 nm)。最后,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算反應(yīng)溶液中的Fe2+濃度,測試重復(fù)3次取平均值。以Trolox為陽性對照。

1.6 抑菌活性測試

1.6.1樣品制備 選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)為0%、 35%、 55%的HE法QN與TA樣品濾液,取50 mL減壓濃縮成浸膏后用DMSO溶解,制成樣品溶液。

1.6.2菌懸液的制備 將大腸桿菌接種于溶菌肉湯(LB)培養(yǎng)基中,白色念珠菌接種于沙式葡萄糖液體(SDB)培養(yǎng)基中,大腸桿菌置于37 ℃搖床中培養(yǎng),白色念珠菌置于28 ℃搖床中培養(yǎng),搖床轉(zhuǎn)速200 r/min,培養(yǎng)時(shí)間10 h。通過與0.5 mol/L麥?zhǔn)媳葷峁軐Ρ葷岫?用無菌水將菌液稀釋至1×108cfu/mL,再將菌懸液稀釋100倍即為試驗(yàn)用菌懸液(1×106cfu/mL)。

現(xiàn)階段的企業(yè)競爭是人、錢、物、信息、時(shí)間的綜合競爭，尤其以時(shí)間為競爭的核心。豐田公司很早就意識到了這點(diǎn)，并將時(shí)間要素統(tǒng)籌考慮進(jìn)生產(chǎn)系統(tǒng)中。在豐田公司，生產(chǎn)時(shí)間的范圍相對較寬，從取得材料到制成產(chǎn)品，再到獲得現(xiàn)金收益，不僅包括加工產(chǎn)品的時(shí)間，而且包括產(chǎn)品停滯的時(shí)間，如產(chǎn)品在各個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)的停頓以及庫存時(shí)間。

1.6.3抑菌圈的測定 大腸桿菌采用LB平板培養(yǎng)基培養(yǎng),白色念珠菌采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基培養(yǎng)。首先用6 mm打孔器在瓊脂平板培養(yǎng)基上均勻打4個(gè)孔,用移液槍分別吸取樣品溶液或空白對照溶液(蒸餾水)20 μL于各孔中。將帶有大腸桿菌的平板培養(yǎng)基置于37 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng),帶有白色念珠菌的平板培養(yǎng)基置于28 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間24～48 h,之后用游標(biāo)卡尺從4個(gè)不同方向測量抑菌圈直徑。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取方法和乙醇體積分?jǐn)?shù)的影響

2.1.1提取物得率 提取物得率是評價(jià)化學(xué)成分有效提取的重要指標(biāo),提取方法和乙醇體積分?jǐn)?shù)對提取物得率的影響如圖1所示。采用單因素方差分析乙醇體積分?jǐn)?shù)對提取物得率的影響,結(jié)果表明:乙醇體積分?jǐn)?shù)相同時(shí),奇楠(QN)和傳統(tǒng)沉香(TA)的熱提(HE)法提取物得率大于冷提(CE)法。采用熱提法時(shí),乙醇體積分?jǐn)?shù)在0%(即水)～55%范圍內(nèi),乙醇體積分?jǐn)?shù)越高,奇楠和傳統(tǒng)沉香的提取物得率越高,且提取物得率與乙醇體積分?jǐn)?shù)具有顯著相關(guān)性(p<0.05);但乙醇體積分?jǐn)?shù)在55%～75%范圍內(nèi),提取物得率與乙醇體積分?jǐn)?shù)不具有顯著相關(guān)性。采用冷提法時(shí),乙醇體積分?jǐn)?shù)在0～75%范圍內(nèi),乙醇體積分?jǐn)?shù)越高,奇楠和傳統(tǒng)沉香的提取物得率越高,且提取物得率與乙醇體積分?jǐn)?shù)具有顯著的相關(guān)性(p<0.05);但當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)在75%～85%范圍內(nèi),提取物得率與乙醇體積分?jǐn)?shù)不具有顯著相關(guān)性。

圖1 奇楠和傳統(tǒng)沉香不同提取方法的提取物得率Fig.1 The yield of extracts of Qinan and traditional agarwood in different extraction methods

當(dāng)提取溶劑為水時(shí),無論是熱提法還是冷提法,傳統(tǒng)沉香的提取物得率均大于奇楠,這是因?yàn)樗崛∥锒酁闃O性化合物,而奇楠的主成分2-(2-苯乙基)色酮難以通過水溶液提取出來。隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高,奇楠提取物得率逐漸大于傳統(tǒng)沉香。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為35%時(shí),熱提法奇楠的提取物得率仍然低于傳統(tǒng)沉香,但是冷提法奇楠的提取物得率已經(jīng)高于傳統(tǒng)沉香。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)高于35%時(shí),相同的提取條件下奇楠的提取物得率始終高于傳統(tǒng)沉香,這說明相比于傳統(tǒng)沉香,奇楠具有乙醇提取物得率高的明顯優(yōu)勢[14]。

2.1.2倍半萜類化合物 對奇楠和傳統(tǒng)沉香提取物進(jìn)行GC-MS分析。通過“一標(biāo)多測”的方法[14,16],對主要色譜峰進(jìn)行定性、定量分析,其中烯類倍半萜采用α-石竹烯進(jìn)行半定量,烯類倍半萜衍生物包括醇類和醛類倍半萜采用藍(lán)桉醇進(jìn)行半定量,結(jié)果如表2和表3所示。

表2 奇楠提取物中倍半萜類化合物的GC-MS分析1)

表3 傳統(tǒng)沉香提取物中倍半萜類化合物的GC-MS分析

1)tR:保留時(shí)間retention time; 35%ET:提取溶劑為體積分?jǐn)?shù)35%乙醇the extraction solvent was volume fraction 35% ethanol; 55%ET:提取溶劑為體積分?jǐn)?shù)55%乙醇the extraction solvent was volume fraction 55% ethanol;:α-石竹烯定量quantification withα-caryophyllene,其余以藍(lán)桉醇定量others were quantified as globulol;下同similarly hereinafter

由表可知,奇楠和傳統(tǒng)沉香水提取物中倍半萜類化合物的種類與含量顯著低于乙醇提取物,在水提取物中僅鑒定出少量的倍半萜類化合物,如epi-γ-桉油烯醇、香橙烯等。隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高,倍半萜類化合物的種類與含量逐漸增加,35%乙醇和55%乙醇提取物化學(xué)成分的種類差異較小,但含量存在顯著差異。55%乙醇提取物化學(xué)成分含量高于35%乙醇提取物,同時(shí)熱提法提取物化學(xué)成分的含量高于冷提法,采用55%乙醇熱提時(shí)倍半萜類化合物的含量達(dá)到最大。這是因?yàn)楸栋胼祁惢衔飿O性中等,易溶于乙醇而不易溶于水[17],因而奇楠與傳統(tǒng)沉香水提取物中倍半萜類化合物含量較低。

2.1.3色酮類化合物 圖2為不同提取條件下奇楠和傳統(tǒng)沉香提取物的HPLC分析結(jié)果。

a.55% ET,HE; b.55% ET,CE; c.35% ET,HE; d.35% ET,CE; e.H2O,HE; f.H2O,CE

根據(jù)色酮化合物的結(jié)構(gòu),可將其分為3部分,其中保留時(shí)間在5～17 min主要為5,6,7,8-四氫-2-(2-苯乙基)色酮(THPECs),18～36 min主要為雙環(huán)氧-2-(2-苯乙基)色酮(DEPECs)和單環(huán)氧-2-(2-苯乙基)色酮(EPECs),37～85 min主要為Flidersia型2-(2-苯乙基)色酮(FTPECs)。通過與相應(yīng)對照品的保留時(shí)間比對,鑒定出沉香四醇、 4-甲氧基沉香四醇、異沉香四醇、 6-羥基-2-(2-苯乙基)色酮、 6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮、 2-(2-苯乙基)色酮6個(gè)化合物,并對這6種化合物采用外標(biāo)法定量,標(biāo)準(zhǔn)曲線如表1所示。此外,通過質(zhì)譜離子碎片信息并結(jié)合文獻(xiàn)[18]鑒定出7個(gè)化合物,色酮類化合物結(jié)構(gòu)具有相似性,因此以沉香四醇為內(nèi)參物采用“一線多評法”[14]對這7個(gè)化合物進(jìn)行半定量,結(jié)果見表4、表5。

表4 奇楠提取物中2-(2-苯乙基)色酮類化合物

由表4可知,奇楠水提取物中基本不含色酮類化合物。隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高,奇楠中DEPECs、EPECs以及FTPECs色酮含量逐漸增加,尤其是出現(xiàn)了2-(2-苯乙基)色酮與2-[2-(4-甲氧基苯)乙基]色酮2個(gè)含量極高的FTPECs色酮,當(dāng)熱提法乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到55%時(shí),2-(2-苯乙基)色酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到10.87%,2-[2-(4-甲氧基苯)乙基]色酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到4.80%。究其原因,奇楠中易被水提取的極性較大的THPECs型色酮含量極低,而極性較小的FTPECs型色酮,如2-(2-苯乙基)色酮和2-[2-(4-甲氧基苯)乙基]色酮雖然含量高,但是易溶于乙醇而不易溶于水,因而導(dǎo)致奇楠水提取物中色酮類化合物含量極低,且隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高奇楠乙醇提取物中色酮類化合物含量增加。

由表5可知,相比于奇楠,傳統(tǒng)沉香提取物中THPECs型色酮含量豐富,并鑒別出其中的3個(gè)THPECs型色酮分別為沉香四醇、 4’-甲氧基沉香四醇、異沉香四醇。3個(gè)化合物在傳統(tǒng)沉香熱提法水提取物中質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高,分別為1.50%、 0.26%、 0.17%,而55%乙醇熱提法提取時(shí),3個(gè)化合物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1.23%、 0.20%、 0.16%?？梢园l(fā)現(xiàn)水提取物中THPECs型色酮的含量高于乙醇提取物,因此水提法適用于提取THPECs型色酮[19]。然而,奇楠中不存在4-甲氧基沉香四醇、異沉香四醇,僅檢測到微量的沉香四醇。相比于奇楠,傳統(tǒng)沉香提取物中FTPECs型色酮含量較低,奇楠中含量較高的2-(2-苯乙基)色酮和2-[2-(4-甲氧基苯)乙基]色酮在傳統(tǒng)沉香中最高質(zhì)量分?jǐn)?shù)僅為0.70%和0.44%。

2.2 提取物的抗氧化活性

2.2.1ABTS自由基清除率 乙醇體積分?jǐn)?shù)越高,奇楠和傳統(tǒng)沉香提取物對ABTS·的清除率也越高,但二者對ABTS·的清除率有一定差異。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)分別為0%(即水)、 35%和55%時(shí),奇楠熱提法提取物對ABTS·的清除率分別為40.1%、 82.4%和94.0%,傳統(tǒng)沉香的清除率分別為66.1%、 76.8%和88.2%。提取溶劑為水時(shí),傳統(tǒng)沉香提取物對ABTS·的清除率要高于奇楠,當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)分別為35%和55%時(shí),奇楠提取物對ABTS·的清除率要高于傳統(tǒng)沉香,與提取物得率關(guān)系一致,這說明對ABTS·的清除率與提取物得率存在正相關(guān)。

2.2.2總抗氧化能力 奇楠與傳統(tǒng)沉香提取物鐵原子還原能力結(jié)果表明:0%(即水)、 35%乙醇和55%乙醇的奇楠熱提法提取物對鐵離子的還原能力分別為0.36、 1.50和3.45 mmol/L,傳統(tǒng)沉香為0.64、 1.17和1.35 mmol/L。奇楠和傳統(tǒng)沉香提取物的鐵離子還原能力隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加而增加,這說明對鐵離子還原能力也與提取物得率存在正相關(guān)。

乙醇體積分?jǐn)?shù)對奇楠和傳統(tǒng)沉香提取物中化學(xué)成分的種類和含量產(chǎn)生影響,進(jìn)而導(dǎo)致其抗氧化能力的不同。倍半萜類化合物和色酮類化合物被認(rèn)為是沉香具有抗氧化活性的主要成分,以倍半萜為主要成分的沉香精油在一定濃度下具有較好的抗氧化活性[20],且研究表明萜烯類化合物在抗氧化活性上具有一定的協(xié)同作用[21]。此外,奇楠與傳統(tǒng)沉香中的部分色酮類化合物如6-羥基-2-[2-(4-羥基-3-甲氧基苯)乙基]色酮也具有抗氧化活性[22]。奇楠水提取中未檢測到此物質(zhì),但其存在于傳統(tǒng)沉香水提取物中,并且奇楠醇提物中6-羥基-2-[2-(4-羥基-3-甲氧基苯)乙基]色酮的含量高于傳統(tǒng)沉香,這可能也是傳統(tǒng)沉香水提取物抗氧化活性高于奇楠,但是醇提取物抗氧化活性低于奇楠的重要原因。

2.3 提取物的抑菌活性

采用瓊脂打孔法對奇楠和傳統(tǒng)沉香0%(即水)、 35%乙醇、 55%乙醇的熱提法提取物抑菌活性進(jìn)行評價(jià),結(jié)果表明:奇楠與傳統(tǒng)沉香提取物對大腸桿菌均未顯示出抑菌活性,與Wetwitayaklung等[23]研究結(jié)果一致。對于白色念珠菌,奇楠和傳統(tǒng)沉香水提取物均具有抑制作用,抑菌圈直徑分別為11.13和12.82 mm,傳統(tǒng)沉香水提取物的抑制效果優(yōu)于奇楠。但是奇楠和傳統(tǒng)沉香乙醇提取物對白色念珠菌均未顯示出抑制效果,楊德蘭[24]同樣發(fā)現(xiàn)國產(chǎn)綠奇楠的乙醚提取物和乙醇提取物對白色念珠菌未顯示出抑菌活性,與本研究的結(jié)果一致。由此可見,沉香提取物具有抑菌活性[1,25],但不具有廣譜抑菌性,因此后續(xù)研究需要進(jìn)一步明確奇楠和傳統(tǒng)沉香提取物對不同細(xì)菌和真菌的抑菌活性。

3 結(jié) 論

3.1采用熱提法提取時(shí),乙醇體積分?jǐn)?shù)在0%～55%范圍內(nèi),提取物得率與乙醇體積分?jǐn)?shù)具有顯著的相關(guān)性;采用冷提法提取時(shí),乙醇體積分?jǐn)?shù)在0%～75%范圍內(nèi),提取物得率與乙醇體積分?jǐn)?shù)具有顯著的相關(guān)性;傳統(tǒng)沉香的水提取物得率高于奇楠,隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加,奇楠提取物得率逐漸高于傳統(tǒng)沉香。

3.2奇楠提取物中倍半萜類化合物的種類少于傳統(tǒng)沉香,但是兩者共有的倍半萜類化合物含量奇楠高于傳統(tǒng)沉香。奇楠提取物中基本不含THPECs,主要為FTPECs,其中2-(2-苯乙基)色酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)可達(dá)10.87%,2-[2-(4-甲氧基苯)乙基]色酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.80%。傳統(tǒng)沉香提取物中THPECs種類和含量豐富,沉香四醇質(zhì)量分?jǐn)?shù)可達(dá)1.50%。

3.3熱提法奇楠與傳統(tǒng)沉香提取物均具有顯著的抗氧化活性,且ABTS自由基清除能力和鐵離子還原能力都隨乙醇體積分?jǐn)?shù)提高而增加。奇楠水提取物的抗氧化活性低于傳統(tǒng)沉香,但乙醇提取物抗氧化活性高于傳統(tǒng)沉香。

3.4奇楠與傳統(tǒng)沉香水提取物和乙醇提取物均對大腸桿菌無顯著的抑菌活性,奇楠和傳統(tǒng)沉香水提取物對白色念珠具有抑菌活性,但乙醇提取物對白色念珠菌無明顯抑制作用。