陳紫昱,徐 璐,夏應(yīng)菊,宋新宇,劉業(yè)兵

(中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所國(guó)家豬瘟參考實(shí)驗(yàn)室,北京 100081)

豬瘟(Classical Swine Fever,CSF)是由豬瘟病毒(Classical Swine Fever Virus,CSFV)引起的豬最重要的傳染病之一,給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失,是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織規(guī)定的必須上報(bào)的豬病之一,我國(guó)2022年將其調(diào)整為二類(lèi)動(dòng)物疫病。CSFV屬于黃病毒科瘟病毒屬,為二十面體的囊膜病毒,具有約12.3kb的單股正鏈RNA基因組。其基因組包含一個(gè)開(kāi)放閱讀框(ORF),5’端和3’端各有一個(gè)非編碼區(qū)(UTR)。病毒顆粒由4種結(jié)構(gòu)蛋白(核心蛋白C、包膜糖蛋白Erns、E1和E2)以及8種非結(jié)構(gòu)蛋白(Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)組成[1]。針對(duì)CSF的防控,由強(qiáng)毒株致弱制成的減毒活疫苗是應(yīng)用最為廣泛的。弱毒疫苗Thiverval株是OIE推薦的疫苗,該疫苗株是從原始強(qiáng)毒Alfort毒株衍生的減毒疫苗株,具有可靠的保護(hù)效力和快速的保護(hù)能力。除此之外,還有日本的減毒疫苗株GPE菌株,GPE菌株是由高毒性菌株ALD先在豬睪丸細(xì)胞中的142次傳代、在牛睪丸細(xì)胞中的36次傳代和在原代豚鼠腎(pGPK)細(xì)胞中的32次傳代獲得的,該疫苗株使得日本在20世紀(jì)免受CSF的困擾。菲律賓的Lapinized Philippines Coronel(LPC)疫苗也是一種減毒的CSFV毒株,是預(yù)防和控制CSFV感染的重要工具,在CSF流行區(qū)廣泛使用。20世紀(jì)五十年代,中國(guó)科學(xué)家經(jīng)過(guò)兔體連續(xù)傳代和系統(tǒng)測(cè)試,培育出了一株適應(yīng)于家兔的 CSFV兔化弱毒株(Hog Cholera Lapinized Virus,HCLV)。豬體試驗(yàn)表明該毒株不僅對(duì)豬安全,還保持了優(yōu)良的免疫原性。用該毒株免疫豬 4 天即可產(chǎn)生免疫保護(hù)力,一次接種產(chǎn)生的免疫保護(hù)期可達(dá)一年以上。該毒株于1956年用于生產(chǎn)弱毒疫苗,并在全國(guó)推廣使用。同年,中國(guó)政府將該毒株以先進(jìn)科技成果先后無(wú)償贈(zèng)送給前蘇聯(lián)、匈牙利、羅馬尼亞、朝鮮、保加利亞及越南等當(dāng)時(shí)的社會(huì)主義友好國(guó)家。匈牙利應(yīng)用證明,來(lái)自北京的兔化弱毒株優(yōu)于美英當(dāng)時(shí)的Rovac及SFV等商品弱毒苗,它對(duì)種豬、乳豬無(wú)殘余毒力。HCLV種毒之后被傳到大部分歐洲國(guó)家及一些拉美國(guó)家,并且該疫苗榮獲 1983 年國(guó)家發(fā)明一等獎(jiǎng)。時(shí)至今日這一毒株仍在我國(guó)和世界上許多國(guó)家廣泛使用,是國(guó)際上公認(rèn)最安全有效的豬瘟弱毒疫苗,因此國(guó)際上通常將該疫苗株稱(chēng)為“C”株,即“中國(guó)”株。有研究表明,CSFV通過(guò)兔體傳代,導(dǎo)致E2基因關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)突變,促進(jìn)豬瘟病毒侵入家兔脾臟淋巴細(xì)胞,進(jìn)而賦予CSFV對(duì)家兔的適應(yīng)性[2]。豬瘟兔化弱毒疫苗應(yīng)用已有多年的歷史,但其毒力致弱的分子機(jī)制還尚未完全明確。并且目前使用的減毒活疫苗會(huì)干擾血清學(xué)診斷,使得鑒別診斷存在困難,因此繼續(xù)研發(fā)新的診斷工具和新型疫苗十分必要。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,對(duì)CSFV的毒力基因有了更為深入的研究。本文從病毒結(jié)構(gòu)角度對(duì)CSFV致弱機(jī)制的國(guó)內(nèi)外研究成果進(jìn)行綜述,以期為后續(xù)的研究以及候選疫苗的開(kāi)發(fā)提供參考。

1 基于結(jié)構(gòu)蛋白E2的致弱機(jī)制研究

E2蛋白位于病毒囊膜表面,是一種功能重要的糖蛋白,分子量大小約為55kDa,其空間結(jié)構(gòu)由三個(gè)疏水區(qū)和三個(gè)氨基端的鏈內(nèi)二硫鍵構(gòu)成。在靠近E2蛋白氨基端上游有一段信號(hào)肽序列,羧基端有一段跨膜區(qū),E2蛋白由A、B、C、D四個(gè)抗原結(jié)構(gòu)域組成(圖1)。E2蛋白是CSFV毒力的決定因子之一,也是免疫原性最好的結(jié)構(gòu)蛋白,能誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生[3]。

圖1 圖1 E2蛋白基因結(jié)構(gòu)圖Fig 1 The structure diagram of E2 protein

早在2005年,Risatti等用疫苗株E2基因替換強(qiáng)毒株中的E2基因,構(gòu)建的嵌合病毒在豬體內(nèi)的毒力明顯降低,從而證明E2基因與毒力致弱直接相關(guān)。更加深入的研究發(fā)現(xiàn),E2蛋白羧基端882-1032之間存在一段12個(gè)氨基酸的取代(T886M、P889L、Q892R、S927L、T928A、H955R、D958G、A975E、R979S、A988T、R994K和I1032V)可以降低病毒致病性[4]。研究表明,與C株同為1.1亞型的經(jīng)典強(qiáng)毒株石門(mén)株在E2基因上存在差異位點(diǎn),這一結(jié)果提示E2基因可能是導(dǎo)致C株致弱的原因之一。E2蛋白與宿主蛋白DCTN6之間的相互作用也可以影響病毒毒力,介導(dǎo)與DCTN6相互作用的關(guān)鍵E2位點(diǎn)突變后的重組突變體E2ΔcDCTN6v在豬中被完全減毒[5]。E2蛋白與核糖體蛋白的相互作用也會(huì)影響病毒毒力,敲除核糖體蛋白R(shí)PLP1基因可以使病毒滴度降低[6]。E2蛋白的糖基化位點(diǎn)是影響CSFV毒力的重要因素,研究發(fā)現(xiàn)C株E2蛋白在序列基序986 NYT988位點(diǎn)有獨(dú)特的糖基化,這可能是C株毒力減弱和提供完全保護(hù)的原因[7]。

E2糖蛋白對(duì)CSFV的免疫原性同樣有著十分重要的作用,它不僅可以誘導(dǎo)抗體的產(chǎn)生,而且也是誘導(dǎo)特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)應(yīng)答的主要蛋白?；贓2蛋白的免疫原性,將E2蛋白和CD154抗原結(jié)合制成的改良疫苗具有良好的保護(hù)效力[8],并且國(guó)內(nèi)外也有商品化的豬瘟E2蛋白亞單位疫苗上市。最近的研究表明,E2蛋白CD結(jié)構(gòu)域邊界鑒定出新的線性表位P33,具有中和活性并且可用于CSFV與牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)的鑒別診斷[9],但其對(duì)病毒致弱的作用有待進(jìn)一步的探究。

E2蛋白和CSFV的其他區(qū)域存在相互作用,共同調(diào)控CSFV的感染過(guò)程。孫永科等[10]利用構(gòu)建重組腺病毒的方法,對(duì)不同處理組的豬進(jìn)行了觀察,發(fā)現(xiàn)E2和Erns結(jié)合的重組病毒可以對(duì)豬只提供保護(hù)。仇華吉等[11]研究發(fā)現(xiàn)表達(dá)C株Erns-E1-E2、Erns-E2或E1-E2的嵌合病毒,在兔子脾臟中可檢測(cè)到與C株相類(lèi)似的病毒復(fù)制水平,這表明E2蛋白和Erns或E1協(xié)同作用很有可能是C株致弱的原因之一。更加深入的研究顯示,E2結(jié)構(gòu)域I中的氨基酸P108和T109對(duì)于C株在家兔體內(nèi)的致弱是關(guān)鍵的[2]。最近的研究表明,用石門(mén)株中的Erns或E2替代C株的相應(yīng)部位構(gòu)建的嵌合體病毒誘導(dǎo)輕度的發(fā)熱反應(yīng),而E2和Erns均被替換的嵌合體病毒則消除了發(fā)熱反應(yīng)并且在兔體內(nèi)沒(méi)有表現(xiàn)出適應(yīng)性[12],這同樣表明E2蛋白和Erns之間的相互作用是C株在家兔體內(nèi)致弱的關(guān)鍵。E2蛋白和3’UTR在減毒嵌合體病毒基因組的穩(wěn)定性方面表現(xiàn)出協(xié)同作用,E2或3’UTR的替代均可降低病毒的復(fù)制。E2蛋白是目前研究最為廣泛的蛋白,對(duì)E2蛋白關(guān)鍵位點(diǎn)的綜述,將為研制新型疫苗和診斷制劑提供理論基礎(chǔ)。深入研究E2蛋白與病毒致弱的關(guān)鍵位點(diǎn),有利于通過(guò)精準(zhǔn)的基因編輯來(lái)實(shí)現(xiàn)新的標(biāo)記疫苗的研發(fā)。

2 基于結(jié)構(gòu)蛋白Erns的致弱機(jī)制研究

Erns是分子量為44kDa的囊膜糖蛋白,由227個(gè)氨基酸組成,共有7個(gè)糖基化位點(diǎn)。Erns通常以二聚體形式存在,是CSFV毒力的必需因子。Erns也能夠刺激中和抗體的產(chǎn)生,但是單獨(dú)的Erns不能誘導(dǎo)保護(hù)性免疫反應(yīng),需要和E2蛋白共同存在[3]。

Erns對(duì)病毒的毒力有十分重要的意義,缺失Erns蛋白的糖基化位點(diǎn)能使病毒毒力減弱。Borca等[13]基于Brescia Erns基因構(gòu)建了一組糖基化突變體,發(fā)現(xiàn)N269糖基化位點(diǎn)使病毒毒力減弱,這表明Erns與CSFV毒力致弱直接相關(guān)。Tucakov等[14]的研究發(fā)現(xiàn)缺乏半胱氨酸171的CSFV突變體影響了Erns二聚體的形成從而在豬體內(nèi)被減弱;體內(nèi)自發(fā)補(bǔ)償突變使Erns二聚體恢復(fù)后CSFV恢復(fù)了毒力,這證實(shí)了Erns二聚體的形成對(duì)CSFV毒力的重要性。Erns還具有細(xì)胞毒性作用,它可以抑制淋巴細(xì)胞的增殖和蛋白質(zhì)的合成,并且尚未發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞毒性作用具有種屬特異性,這種細(xì)胞毒性作用有可能是Erns與毒力相關(guān)的另一原因。Erns對(duì)CSFV毒力的影響可能是因?yàn)樗哂泻颂呛怂崦?RNase)活性,而RNase具有神經(jīng)毒性、免疫抑制、抗蠕蟲(chóng)和抗腫瘤等作用。王苗苗等[15]構(gòu)建了一株基于低毒力野生型CSFV的缺乏RNase活性的cDNA克隆,Erns的RNase活性的缺失增強(qiáng)了仔豬體液免疫反應(yīng),降低了病毒的毒力、傳染性和持久性。與RNase活性有關(guān)的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)被取代后,CSFV的致病性減弱或喪失。Iqbal等[16]研究發(fā)現(xiàn),對(duì)CSFV和BVDV的Erns基因進(jìn)行修飾,使其喪失RNase活性后病毒致病性減弱,這表明RNase活性與毒力致弱直接相關(guān)。RNase活性還可以阻止ssRNA、dsRNA誘導(dǎo)的干擾素(IFN)表達(dá),在自然界發(fā)現(xiàn)的任何瘟病毒表達(dá)的Erns幾乎都是IFN的拮抗劑[17],影響RNase活性的突變(H30F、PR突變)會(huì)顯著減弱病毒對(duì)IFN表達(dá)的抑制作用[18]。Python等[19]構(gòu)建了無(wú)RNase活性的CSFV突變體,結(jié)果顯示,無(wú)RNase活性的突變體誘導(dǎo)的IFN-α含量是野生型CSFV誘導(dǎo)的10倍。而逃避IFN反應(yīng)很有可能是CSFV誘導(dǎo)持續(xù)性感染的核心因素[20],已有研究表明C株疫苗在接種的早期緩慢復(fù)制,避免了IFN-α和IFN-β的過(guò)早過(guò)度表達(dá),這種抑制IFN產(chǎn)生的特性可能是C株致弱的機(jī)制,這也表明Erns影響毒力的機(jī)制可能是其RNase活性對(duì)IFN表達(dá)的調(diào)控。Erns蛋白是決定病毒毒力的重要因素,更好的了解Erns與病毒復(fù)制以及病毒毒力的關(guān)系為開(kāi)發(fā)針對(duì)CSFV的DIVA疫苗提供了新的研究方向,從而有利于區(qū)分CSF與其他瘟疫病毒,并為有效控制和根除CSF做出貢獻(xiàn)。

3 基于非結(jié)構(gòu)蛋白的致弱機(jī)制研究

CSFV病毒顆粒包含8種非結(jié)構(gòu)蛋白(Npro、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B),這些非結(jié)構(gòu)蛋白在CSFV感染過(guò)程中發(fā)揮著各自的作用。Npro是CSFV特有的一種半胱氨酸樣蛋白,它可以從正在翻譯的多聚蛋白上斷裂并成熟,其分子量約為19kDa。Npro有可能與病毒毒力相關(guān),Mayer等[21]構(gòu)建了缺失Npro基因的突變體,發(fā)現(xiàn)中等毒力和強(qiáng)毒株突變體都導(dǎo)致毒力的減弱,這表明Npro與病毒毒力致弱相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn),Npro蛋白可以抑制宿主的免疫應(yīng)答,Npro既可以拮抗dsRNA介導(dǎo)的TRL3依賴(lài)和非依賴(lài)性途徑中Ⅰ型IFN的誘導(dǎo),又可以通過(guò)降解TRL3的蛋白酶體抑制I型IFN的誘導(dǎo)[22],同時(shí)還可以通過(guò)抑制干擾素調(diào)節(jié)因子(IRF1)的表達(dá)來(lái)抑制Ⅲ型IFN的產(chǎn)生[23]。Npro蛋白很有可能參與細(xì)胞蛋白的泛素化修飾,抑制細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)I型輔助性T淋巴細(xì)胞的凋亡。Npro還可以拮抗TRL3和視黃酸誘導(dǎo)基因蛋白Ⅰ(RIG1)介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,從而使病毒不易被清除,這可能是CSFV免疫逃避的一種機(jī)制[24],這種拮抗宿主對(duì)CSFV入侵的反應(yīng)是否是Npro影響毒力的原因還有待更加深入的研究。Npro與核糖體蛋白S20(U10)的相互作用可以阻止CSFV在體內(nèi)的復(fù)制,并且在CSFV感染過(guò)程中發(fā)揮抗病毒作用[25],然而S20降低病毒在體內(nèi)含量的機(jī)制尚不明確。Npro蛋白對(duì)病毒復(fù)制以及宿主免疫應(yīng)答的作用可能是缺失Npro基因的突變體毒力致弱的原因之一,但更深入的機(jī)制還值得更進(jìn)一步的研究。

P7蛋白是一種分子量約為6kDa～7kDa的疏水性小跨膜蛋白,在CSFV毒力中起著重要作用。Gladue等[26]通過(guò)丙氨酸掃描突變創(chuàng)建了一組在P7基因上含有3～6個(gè)連續(xù)氨基酸殘基替換的重組突變體,研究了接種動(dòng)物的臨床癥狀和體內(nèi)病毒滴度,發(fā)現(xiàn)P7蛋白與病毒毒力致弱直接相關(guān)。林志等[27]利用質(zhì)粒pEGFP-p7轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞,對(duì)IL-1β的mRNA蛋白含量進(jìn)行監(jiān)測(cè),發(fā)現(xiàn)P7可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌IL-1β,這表明P7蛋白參與CSFV在體內(nèi)介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),但其與病毒致弱的關(guān)系有待進(jìn)一步的研究。趙成等[28]的研究結(jié)果顯示,P7蛋白TM1區(qū)的3個(gè)氨基酸取代(p7TDI18/19/20AAA,p7EVV21/22/23AAA和p7YFY25/26/30AAA)抑制了感染性病毒的產(chǎn)生,病毒滴度顯著降低。P7可以與宿主蛋白CAMLG相互作用,破壞這種作用會(huì)影響CSFV在細(xì)胞培養(yǎng)中復(fù)制的能力[29],這為病毒毒力致弱機(jī)制的研究提供了一定的參考。

NS3蛋白在CSFV的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯以及病毒多聚蛋白的加工過(guò)程中起到重要作用[30]。朱洪昌等[31]用丙氨酸或天冬氨酸單取代或全部取代NS3蛋白上保守的四個(gè)堿性氨基酸殘基以破壞NS3蛋白上保守的帶正電荷的區(qū)域,結(jié)果顯示突變體VH24A、VR50A、VH24D、VR50D或VK74D的病毒滴度顯著降低,這表明 NS3是病毒致弱的潛在靶點(diǎn)。鄧少峰等[30]研究發(fā)現(xiàn)宿主蛋白PSMB10通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑刺激NS3蛋白降解來(lái)抑制CSFV增殖。李小蒙[32]等發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子5(TRAF5)與NS3相互作用,TRAF5通過(guò)激活p38 MAPK通路促進(jìn)CSFV復(fù)制。NS3與病毒復(fù)制密切相關(guān),然而關(guān)于是否可以突變NS3抑制病毒復(fù)制,從而降低病毒滴度,導(dǎo)致病毒對(duì)豬體毒力下降的研究還需深入的探索。

非結(jié)構(gòu)蛋白NS4A、NS4B、NS5A、NS5B通常與病毒復(fù)制與合成相關(guān),影響病毒復(fù)制的位點(diǎn)是影響毒力的潛在位點(diǎn)。病毒在豬體內(nèi)復(fù)制效率下降,可能會(huì)導(dǎo)致病毒滴度降低．從而導(dǎo)致病毒對(duì)豬體的毒力下降．成為對(duì)豬體不產(chǎn)生致病效應(yīng)的減毒株[33]。馬立新等[34]研究發(fā)現(xiàn)CSFV的NS4A蛋白是一種抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞中RNA干擾(RNAi)的新RNA沉默病毒抑制因子(VSR),VSR作用可以幫助CSFV逃避宿主的抗病毒作用,VSR缺陷型CSFV的復(fù)制被減弱,這為開(kāi)發(fā)減毒活疫苗提供了依據(jù)。張彥明等[35]證明NS4A蛋白可以通過(guò)增強(qiáng)MAVS途徑誘導(dǎo)IL-8產(chǎn)生,并促進(jìn)CSFV復(fù)制。NS4B蛋白可以與宿主的核糖體蛋白R(shí)PLP1相互作用,通過(guò)促進(jìn)病毒基因組的轉(zhuǎn)譯增加病毒產(chǎn)量[36]。曹志等[37]研究表明,NS4B的表達(dá)可以顯著抑制TRIF、IRF3和NF-κB p65的表達(dá),從而抑制poly (I:C)刺激后IFN-β和IL-6的分泌,影響TLR介導(dǎo)的先天免疫應(yīng)答。張彥明等[38]利用慢病毒介導(dǎo)的組成型過(guò)表達(dá)和真核質(zhì)粒瞬時(shí)過(guò)表達(dá)方法,對(duì)Rab5敲除后細(xì)胞中病毒RNA含量進(jìn)行了研究,結(jié)果表明,敲除Rab5對(duì)CSFV產(chǎn)生有抑制作用,并且參與NS4B復(fù)合物的形成。非結(jié)構(gòu)蛋白NS5B是一種RNA依賴(lài)的RNA聚合酶,CSFV NS5B的162位點(diǎn)的氨基酸殘基由脯氨酸突變?yōu)樘K氨酸,可以增加RNA依賴(lài)RNA聚合酶(RdRP)活性,促進(jìn)CSFV基因組的復(fù)制[39]。非結(jié)構(gòu)蛋白NS5A在低濃度時(shí)可以與NS5B結(jié)合形成復(fù)制復(fù)合體,促進(jìn)病毒RNA的合成;當(dāng)NS5A的濃度超過(guò)NS5B時(shí),NS5A可以與NS5B和3’UTR相互作用,抑制病毒的復(fù)制[40],這可能是NS5A通過(guò)濃度變化調(diào)控病毒復(fù)制的原因。肖明等[41]利用谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶下拉試驗(yàn)和免疫沉淀分析表明位于NS5A末端的的氨基酸K399、T401、E406和L413對(duì)NS5A-NS5B相互作用是必需的,這種相互作用可能是NS5B蛋白和NS5A蛋白對(duì)核糖體內(nèi)部位點(diǎn)介導(dǎo)(IRES)的翻譯產(chǎn)生影響的機(jī)制。

綜上所述,非結(jié)構(gòu)蛋白對(duì)病毒毒力和病毒生命周期至關(guān)重要。我們可以更加全面地了解非結(jié)構(gòu)蛋白對(duì)病毒感染的作用,以便更深入地研究這些蛋白中負(fù)責(zé)病毒毒力的專(zhuān)門(mén)區(qū)域,有助于設(shè)計(jì)更有效的生物工具來(lái)控制CSF的發(fā)生。

4 基于3’UTR的致弱機(jī)制研究

CSFV的3’非編碼區(qū)(3’UTR)是一個(gè)富含AU的區(qū)域,該區(qū)域也與病毒的毒力相關(guān)。王毅等[33]發(fā)現(xiàn)在C株的3’UTR中存在12個(gè)堿基序列(CUUUUUUCUUUU)的插入,這是導(dǎo)致中國(guó)豬瘟兔化弱毒疫苗減毒的關(guān)鍵因素。低毒力的經(jīng)典豬瘟病毒Pinar del3’UTR中發(fā)現(xiàn)了一段平均長(zhǎng)度為36個(gè)尿苷的新型聚尿苷束(poly-U),這可能是病毒毒力衰減的原因[42]。在減毒活疫苗Thiverval 3’UTR的233～259 bp之間,存在著一段6-32nt的可變長(zhǎng)度的富T序列,推測(cè)該插入是Thiverval毒力衰減的原因之一[43]。王苗苗等[44]在最近的研究中也發(fā)現(xiàn)在3’端插入poly-U可以導(dǎo)致病毒衰減,減少受感染仔豬排毒量,降低CSFV在體內(nèi)的復(fù)制水平和疾病的嚴(yán)重程度。據(jù)報(bào)道,CSFV 3’UTR的3342位點(diǎn)的脯氨酸僅存在于兔化減毒株中,包括C株、Riems、LPC和HCLV-India株,這表明3342位點(diǎn)的脯氨酸可能是病毒在兔體內(nèi)致弱的原因之一[39]。3’UTR還可以與Erns的RNase功能協(xié)同作用來(lái)調(diào)節(jié)宿主的先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答,從而有利于CSFV在靶組織中的復(fù)制[45]。上述研究表明,3’UTR有著十分廣闊的研究前景,可以通過(guò)對(duì)3’UTR進(jìn)行不同的修飾從而研究病毒毒力的變化,從而進(jìn)一步揭示影響病毒致病力的分子機(jī)制。

5 小結(jié)與展望

近年來(lái),隨著分子生物學(xué)等技術(shù)手段的發(fā)展,有關(guān)CSFV致弱機(jī)制的研究得到了極大的發(fā)展。CSFV的結(jié)構(gòu)蛋白、非結(jié)構(gòu)蛋白以及3’UTR對(duì)病毒致弱有著不同程度的影響。E2蛋白是病毒毒力的決定因子之一,也是免疫原性最好的結(jié)構(gòu)蛋白。Erns蛋白是毒力的必需因子,通常和E2蛋白協(xié)同作用共同調(diào)節(jié)病毒毒力。非結(jié)構(gòu)蛋白Npro可以調(diào)節(jié)病毒毒力,而NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B則通常在病毒復(fù)制過(guò)程中發(fā)揮作用。3’UTR通過(guò)堿基修飾可以使病毒致弱。上述研究成果均提示我們,豬瘟病毒的致弱機(jī)制非常的復(fù)雜,任何病毒基因的變化可能都會(huì)影響病毒的毒力,因此,對(duì)豬瘟病毒致弱毒株的研究和開(kāi)發(fā)是一個(gè)系統(tǒng)的工程?，F(xiàn)有的豬瘟弱毒疫苗雖然具有良好的保護(hù)性和有效性,但仍然面臨著新的病毒突變體和不能進(jìn)行鑒別診斷的挑戰(zhàn)。本文綜述了CSFV可能存在的致弱機(jī)制,這些研究啟發(fā)未來(lái)新型標(biāo)記疫苗的研發(fā)可以通過(guò)對(duì)CSFV結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白的關(guān)鍵位點(diǎn)的基因修飾來(lái)實(shí)現(xiàn),同時(shí)也為抗病毒藥物的開(kāi)發(fā)提供新的研究思路。