王 鼎，王 佳，胡軍華，章晨峰，王振中，林 夏*，肖 偉*

小兒健脾顆粒質(zhì)量標準建立研究

王 鼎1, 2, 3，王 佳2, 3，胡軍華2, 3，章晨峰2, 3，王振中1, 2, 3，林 夏2, 3*，肖 偉1, 2, 3*

1. 南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210000 2. 江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001 3. 中藥制藥過程控制與智能制造技術(shù)全國重點實驗室，江蘇 連云港 222001

建立小兒健脾顆粒（Xiao’er Jianpi Granules，XJG）的定性、定量分析方法。采用TLC法，以“整體鑒別”新模式為基礎(chǔ)，建立了一樣多測（炒萊菔子、甘草及陳皮）及一板多鑒（炒萊菔子、甘草）的鑒別方法。采用HPLC法，采用Kromasil C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，3.5 μm），以0.1%三氟乙酸-乙腈為流動相進行梯度洗脫，進樣量5 μL，柱溫30 ℃，體積流量1 mL/min，檢測波長252 nm（甘草酸）、275 nm（甘草苷）、283 nm（蕓香柚皮苷、橙皮苷）、326 nm（3,6′-二芥子酰基蔗糖、芥子堿硫氰酸鹽）。建立的TLC鑒別方法，斑點清晰，能專屬的鑒別處方中白術(shù)、陳皮、山藥、炒萊菔子、焦山楂、甘草；建立了芥子堿硫氰酸鹽、3,6′-二芥子?；崽恰⒊绕ぼ?、蕓香柚皮苷、甘草苷、甘草酸含量測定方法，6個成分在各自質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（≥0.999 9），精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性良好，加樣回收率為97.8%～101.6%；4批樣品中芥子堿硫氰酸鹽、3,6′-二芥子?；崽恰⒊绕ぼ?、蕓香柚皮苷、甘草苷、甘草酸的質(zhì)量濃度分別為0.57～0.80、0.44～0.64、3.81～4.93、1.45～2.72、0.56～1.14、1.20～1.58 mg/mL。建立了6個藥味的TLC鑒別方法，斑點清晰且專屬性強。建立了HPLC同時測定的6個成分含量測定方法，建立的方法快速、準確、專屬性強，為其質(zhì)量標準建立提供參考依據(jù)。

小兒健脾顆粒；HPLC；TLC；一板多鑒法；質(zhì)量控制；整體鑒別；一樣多測；甘草酸；甘草苷；蕓香柚皮苷；橙皮苷；3,6′-二芥子?；崽?；芥子堿硫氰酸鹽；白術(shù)；陳皮；山藥；炒萊菔子；山楂；甘草

小兒健脾顆粒（Xiao’er Jianpi Granules，XJG）為江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司研發(fā)的“1.1”類新藥，由茯苓、白術(shù)、陳皮、山藥、焦山楂、炒麥芽、炒萊菔子、甘草共8味中藥經(jīng)水提工藝制成的顆粒劑。方中茯苓、白術(shù)為君藥，健脾利濕；陳皮、山藥共為臣藥，理氣防君藥滋補礙胃，同時增強君藥健脾之力；焦山楂、炒麥芽、炒萊菔子為佐藥，健脾和胃、消食化積、通腑行氣；甘草和中緩急為使藥。諸藥合用具有健脾消食功能，主要用于兒童功能性消化不良。方中茯苓、白術(shù)、山藥和麥芽均含有多糖、氨基酸類化合物[1-3]，茯苓還含有三萜類成分[4]，白術(shù)還含有內(nèi)酯類成分[5]；陳皮中主要含有黃酮、檸檬苦素及生物堿等化合物[6]；山楂中主要含有黃酮類、有機酸類、三萜類化合物[7]；萊菔子主要含有硫代葡萄糖苷、含硫衍生物、黃酮苷和生物堿類化合物[8-9]；甘草主要含有黃酮、三萜、香豆素類化合物[10-11]。鑒于處方藥味所含化學(xué)成分復(fù)雜多樣，面臨藥味質(zhì)控指標成分缺失或?qū)傩圆粡姷葐栴}[12]。有必要從整體質(zhì)量控制角度進行設(shè)計，建立能夠全面、有效控制XJG的質(zhì)量標準。

一板多鑒和一樣多測的鑒別方法，在復(fù)方阿膠漿[13]和強肝膠囊[14]等復(fù)方制劑中得到了應(yīng)用，即使用一塊薄層板對多個藥味進行的鑒別。本研究基于整體控制[15]的思路進行鑒別研究，首次建立了采用一個供試品溶液即可同時用于XJG中炒萊菔子、甘草及陳皮的TLC鑒別方法，且炒萊菔子和甘草可用一個薄層板同時鑒別；同時建立了方中君藥白術(shù)、臣藥山藥以及佐藥焦山楂的TLC鑒別方法。能夠以較少的試驗次數(shù)，對方中君藥（白術(shù)）、臣藥（山藥、陳皮）、佐藥（焦山楂、炒萊菔子）、使藥（甘草）進行有效鑒別。

多成分含量測定方法也廣泛應(yīng)用于復(fù)方制劑的質(zhì)量控制[16-17]。本實驗首次建立了HPLC同時快速測定XJG中芥子堿、3,6′-二芥子?；崽?、橙皮苷、蕓香柚皮苷、甘草苷、甘草酸的定量方法。該方法采用常規(guī)十八烷基硅烷鍵合硅膠柱色譜和乙腈-三氟乙酸流動相體系，即可完成處方中生物堿、糖酯、黃酮苷以及三萜類成分的同時測定。建立的6個藥味的TLC鑒別方法及6個指標成分的HPLC同時測定方法，可作為全面控制XJG質(zhì)量的有效方法。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters Arc型高效液相色譜儀，含2998PDA型檢測器，美國沃特世公司；Mettler Toledo XP6型電子分析天平（百萬分之一）、Mettler Toledo MS204型電子分析天平（十萬分之一），瑞士梅特勒公司；Milli-Q Academic型純水儀，美國密理博公司；TG16MW型臺式高速離心機，湖南赫西儀器裝備有限公司；ATS4型全自動點樣儀，香港力楊企業(yè)有限公司。

1.2 試藥

1.2.1 對照品 芥子堿硫氰酸鹽（批號111702-202006，質(zhì)量分數(shù)99.0%）、橙皮苷（批號110721-202019，質(zhì)量分數(shù)95.3%）、甘草苷（批號111610-201908，質(zhì)量分數(shù)95.0%）、尿囊素（批號111501-200202，質(zhì)量分數(shù)100.0%）、白術(shù)內(nèi)酯II（批號111976-201501，質(zhì)量分數(shù)99.9%）、3,6′-二芥子?；崽牵ㄅ?11848-202006，質(zhì)量分數(shù)96.5%）、熊果酸（批號110724-201823，質(zhì)量分數(shù)99.9%）、甘草酸銨（批號110731-202021，質(zhì)量分數(shù)96.2%），均購自中國食品藥品檢定研究院；蕓香柚皮苷（批號ST05590120/8958，質(zhì)量分數(shù)99.9%），購自上海詩丹德標準技術(shù)服務(wù)有限公司。

1.2.2 對照藥材 白術(shù)（批號120925-202013）、甘草（批號120904-202021），均購自中國食品藥品檢定研究院。

1.2.3 樣品 XJG（批號210901、211101、211102、211103）、白術(shù)陰性制劑、甘草陰性制劑、炒萊菔子陰性制劑、陳皮陰性制劑、山藥陰性制劑、焦山楂陰性制劑，均來源于江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司。

1.3 試劑

乙腈，色譜純，批號020901，購自邁瑞達科技有限公司；色譜甲酸，批號202674，購自賽默飛世爾科技有限公司；三氟乙酸，分析純，批號0200718，購自美國天地公司；AB-8型大孔樹脂，批號HO4M7L14173，購自上海源葉生物科技有限公司；-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA），批號6386696-D1，購自安捷倫科技有限公司；活性炭，批號20220111，購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別方法的建立

2.1.1 白術(shù) 取3批XJG（批號211101、211102、211103）粉末各2 g，加水50 mL，超聲20 min，于8000 r/min離心5 min，取上清液，用乙醚萃取3次，每次20 mL，水液備用，合并乙醚液，揮干溶劑，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取白術(shù)陰性制劑，同供試品溶液制備方法同法制備白術(shù)陰性供試品溶液。取白術(shù)對照藥材0.5 g，加水25 mL加熱回流1 h，放冷至室溫，于8000 r/min離心5 min，上清液用乙醚萃取3次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為對照藥材溶液。另取白術(shù)內(nèi)酯II對照品，加甲醇制成含白術(shù)內(nèi)酯II 0.1 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）[18]進行試驗，吸取上述溶液各5～10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-醋酸乙酯（5∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置于紫外燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，且陰性無干擾，表明該方法專屬性良好。結(jié)果見圖1。

2.1.2 甘草、炒萊菔子 取白術(shù)供試品溶液制備過程中備用水液，加正丁醇萃取3次，每次20 mL，合并正丁醇，揮干溶劑，殘渣加甲醇2 mL使溶解，加入PSA 0.2 g混合后離心，取上清液，即得甘草、炒萊菔子供試品溶液。取甘草、炒萊菔子陰性制劑，同供試品溶液制備方法同法制備甘草、炒萊菔子陰性供試品溶液。取甘草對照藥材0.2 g，參照《中國藥典》2020年版一部“甘草”藥材標準方法[19]中的對照藥材制備方法，同法制備對照藥材溶液。另取甘草苷、芥子堿硫氰酸鹽加甲醇分別制成含甘草苷0.5 mg/mL、芥子堿硫氰酸鹽1 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）[18]進行試驗，吸取上述溶液各2～6 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-水（10∶2∶3）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視，結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜及對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，且陰性無干擾（炒萊菔子）。再噴以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜及對照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，且陰性無干擾（甘草）。上述結(jié)果表明方法均專屬性良好。結(jié)果見圖2。

2.1.3 陳皮 供試品制備方法同“2.1.2”項下。取陳皮陰性制劑，同法制備陳皮陰性供試品溶液。另取橙皮苷對照品，加甲醇制成0.4 mg/mL對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）[18]進行試驗，吸取上述各溶液1～3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，且陰性無干擾，表明該方法專屬性良好。結(jié)果見圖3。

2.1.4 山藥 取3批XJG（批號211101、211102、211103）粉末5 g，加60%乙醇50 mL，加熱回流30 min，趁熱濾過，濾液蒸干，殘渣加水5 mL使溶解，加于AB-8型大孔吸附樹脂柱（內(nèi)徑為1.5 cm，柱高為18 cm）上，用水100 mL洗脫，收集洗脫液，洗脫液加于活性炭層析柱（內(nèi)徑為1.5 cm，柱高為10 cm）上，以2滴/s的速度過活性炭層析柱，用水50 mL洗脫，棄去水液，再用50%乙醇50 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加乙醇1 mL，置水浴上加熱溶解，即得供試品溶液。取山藥陰性制劑，同法制得山藥陰性供試品溶液。另取尿囊素對照品，加50%甲醇制成含尿囊素0.2 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）[18]進行試驗，吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以丙酮-三氯甲烷-醋酸乙酯-甲酸-甲醇（5∶1∶8∶1∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以15%對二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性無干擾，表明該方法專屬性良好。結(jié)果見圖4。

1-白術(shù)陰性供試品溶液 2-白術(shù)內(nèi)酯II對照品溶液 3-白術(shù)對照藥材溶液 4～6-XJG供試品溶液（批號21101、211102、211103）

1-山藥陰性供試品溶液 2-尿囊素對照品溶液 3～5-XJG供試品溶液（批號211101、211102、211103）

2.1.5 焦山楂 取3批XJG（批號211101、211102、211103）粉末15 g，加二氯甲烷80 mL，加熱回流2 h，濾過，取濾液，用水洗3次，每次80 mL，分取二氯甲烷液，蒸干，殘渣加二氯甲烷2 mL使溶解，作為供試品溶液。取缺焦山楂陰性制劑，同供試品溶液制備方法制成焦山楂陰性對照溶液。取熊果酸對照品，加甲醇制成含熊果酸1 mg/mL的對照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）[18]進行試驗，吸取上述2種溶液各4～6 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯-甲酸溶液（20∶6∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點，且陰性無干擾，表明該方法專屬性良好。結(jié)果見圖5。

1-焦山楂陰性供試品溶液 2-熊果酸對照品溶液 3～5-XJG供試品溶液（批號211101、211102、211103）

2.2 HPLC定量分析

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，3.5 μm）；流動相為0.1%三氟乙酸水溶液-乙腈，梯度洗脫：0～12 min，5%～19%乙腈；12～15 min，19%～21%乙腈；15～23 min，21%～26%乙腈；23～45 min，26%～90%乙腈；柱溫30 ℃；體積流量1.0 mL/min；進樣量5 μL；檢測波長252 nm（甘草酸銨）、275nm（甘草苷）、283 nm（蕓香柚皮苷、橙皮苷）、326 nm（3,6′-二芥子酰基蔗糖、芥子堿硫氰酸鹽）；理論塔板數(shù)均應(yīng)不低于5000。

2.2.2 對照品溶液的制備 取芥子堿硫氰酸鹽對照品適量，精密稱定，加0.1%三氟乙酸甲醇制成含芥子堿硫氰酸鹽12 μg/mL的對照品溶液；取甘草酸銨、甘草苷、橙皮苷、蕓香柚皮苷、3,6′-二芥子?；崽菍φ掌愤m量，精密稱定，加甲醇制成含甘草酸銨20 μg/mL、甘草苷10 μg/mL、橙皮苷80 μg/mL、蕓香柚皮苷40 μg/mL、3,6′-二芥子?；崽?0 μg/mL的混合對照品溶液。

甘草酸質(zhì)量＝甘草酸銨質(zhì)量/1.0207

2.2.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下樣品，研細，取約0.4 g研細樣品，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（500 W、40 kHz）40 min，放冷，用80%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，離心，取上清液作為供試品溶液。

2.2.4 陰性供試品溶液的制備 取陳皮陰性、甘草陰性、炒萊菔子陰性樣品，按“2.2.3”項下供試品溶液制備方法，制備陰性供試品溶液。

2.2.5 專屬性試驗 精密吸取“2.2.2”項下對照品溶液、“2.2.3”項下供試品溶液和“2.2.4”項下陰性供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，結(jié)果見圖6、7，結(jié)果表明陰性樣品無干擾。

2.2.6 線性關(guān)系考察 精密稱定芥子堿硫氰酸鹽對照品，加0.1%三氟乙酸甲醇溶液配制成質(zhì)量濃度為200.972 μg/mL的對照品儲備液1；精密稱定橙皮苷和甘草酸銨對照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為379.999、97.085 μg/mL的混合對照品儲備液2；精密稱定蕓香柚皮苷、甘草苷和3,6′-二芥子酰基蔗糖對照品，加甲醇制成質(zhì)量濃度分別為539.860、112.765、115.260 μg/mL的混合對照品儲備液3。取以上儲備液作為母液逐倍稀釋，分別精密吸取5 μL，注入液相色譜儀，以峰面積平均值為縱坐標（），對照品質(zhì)量濃度為橫坐標（），繪制回歸曲線，進行線性回歸，得各對照品線性范圍、回歸方程和相關(guān)系數(shù)（），相關(guān)結(jié)果分別為芥子堿硫氰酸鹽＝16 182.0－6 713.7，＝0.999 9，線性范圍4.019～80.389 μg/mL；3,6′-二芥子?；崽牵?4 225.0－11 011.0，＝0.999 9，線性范圍3.602～115.260 μg/mL；甘草酸＝4 046.0－2 701.1，＝0.999 9，線性范圍4.854～97.085 μg/mL；甘草苷＝9 524.1＋1 772.8，＝1.000 0，線性范圍3.524～112.765 μg/mL；橙皮苷＝9 388.07－1 161.66，＝1.000 0，線性范圍19.000～379.999 μg/mL；蕓香柚皮苷＝8 045.1＋15 841.0，＝1.000 0，線性范圍16.871～539.860 μg/mL。

2.2.7 精密度試驗 取供試品溶液（批號210901），連續(xù)進樣6次，以峰面積計算各指標成分RSD，分別為芥子堿硫氰酸鹽1.44%、橙皮苷0.27%、蕓香柚皮苷0.20%、甘草苷0.32%、甘草酸銨0.27%、3,6′-二芥子酰基蔗糖0.42%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液（批號210901），于制備后0、4、8、12、24、34 h注入高效液相色譜儀進行分析，以峰面積計算各指標成分RSD，分別為芥子堿硫氰酸鹽0.24%、橙皮苷0.19%、蕓香柚皮苷0.56%、甘草苷0.66%、甘草酸銨0.66%、3,6′-二芥子酰基蔗糖1.70%；取同一對照品溶液，質(zhì)量濃度為芥子堿硫氰酸鹽0.015 mg/mL、橙皮苷0.076 mg/mL、蕓香柚皮苷0.067 mg/mL、甘草苷0.014 mg/mL、甘草酸銨0.019 mg/mL、3,6′-二芥子?；崽?.014 mg/mL，于制備后0、4、8、12、24、34 h注入高效液相色譜儀進行分析，以峰面積計算各指標成分RSD，分別為芥子堿硫氰酸鹽0.62%、橙皮苷0.81%、蕓香柚皮苷0.40%、甘草苷0.51%、甘草酸銨0.82%、3,6′-二芥子?；崽?.52%。結(jié)果RSD均小于2%，表明供試品溶液和對照品溶液在34 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

圖6 溶劑(A)、陰性樣品溶液(B)、混合對照品溶液(C)和XJG供試品溶液(D)在不同波長下的HPLC圖

圖7 溶劑(A)、陰性樣品溶液(B)、芥子堿硫氰酸鹽對照品溶液(C)、混合對照品溶液(D)和XJG供試品溶液(E)在326 nm下的HPLC圖

2.2.9 重復(fù)性試驗 取同一供試品（批號210901），按“2.2.3”項方法制備供試品溶液，平行制備6份，以本研究色譜條件進行分析，進行重復(fù)性結(jié)果驗證。各成分質(zhì)量分數(shù)分別為芥子堿硫氰酸鹽0.79 mg/g、橙皮苷5.05 mg/g、甘草酸1.38 mg/g、3,6′-二芥子?；崽?.62 mg/g、甘草苷0.58 mg/g、蕓香柚皮苷2.65 mg/g，RSD分別為0.38%、0.23%、0.61%、0.90%、0.51%、0.62%，結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗 稱取已測定的XJG樣品（批號210901）9份，分為高、中、低3組，每組3份，各0.2 g，精密稱定，分別精密加入線性關(guān)系考察“2.2.6”項下儲備液（儲備液1：芥子堿硫氰酸鹽161.410 μg/mL，低、中、高各加0.5、1.0、2.0 mL；儲備液2：橙皮苷379.999 μg/mL、甘草酸銨97.085 μg/mL，低、中、高各加1.0、2.5、4.0 mL；儲備液3：蕓香柚皮苷539.860 μg/mL、甘草苷112.765 μg/mL、3,6′-二芥子酰基蔗糖115.260 μg/mL，低、中、高各加0.5、1.0、1.5 mL），再精密加入80%甲醇補足至25 mL，以重復(fù)性試驗各成分質(zhì)量分數(shù)計算加樣回收率，結(jié)果芥子堿硫氰酸鹽、3,6′-二芥子?；崽?、甘草酸銨、蕓香柚皮苷、甘草苷、橙皮苷的平均加樣回收率分別為98.7%、99.5%、101.5%、101.6%、97.8%、100.9%，RSD分別為1.5%、3.4%、1.7%、1.5%、1.1%、2.0%，結(jié)果表明該方法準確度良好。

2.2.11 4批制劑定量分析結(jié)果 取4批XJG制劑（批號210901、211101、211102、211103）各10袋，研細，分別按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，并按照“2.2.1”項下色譜條件進樣分析，分別計算6個指標成分的含量，結(jié)果見表1。

甘草苷和蕓香柚皮苷的含量批間差異較大，經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)主要為投料飲片含量批間差異大導(dǎo)致，后續(xù)可進一步制定藥材、飲片內(nèi)控標準，細化工藝確保批間一致性。

表1 XJG中6個主要成分含量

Table 1 Contents of six main components of XJG

成分質(zhì)量分數(shù)/(mg?g?1)含量/(mg?袋?1) 芥子堿硫氰酸鹽橙皮苷甘草酸甘草苷3,6′-二芥子酰基蔗糖蕓香柚皮苷芥子堿硫氰酸鹽橙皮苷甘草酸甘草苷3,6′-二芥子?；崽鞘|香柚皮苷 2109010.804.931.290.600.642.722.0012.33.231.461.556.63 2111010.754.981.320.560.602.261.8412.203.251.381.485.56 2111020.654.181.200.590.531.841.5810.202.951.441.294.51 2111030.573.811.581.140.441.451.409.403.892.791.083.55

3 討論

3.1 TLC鑒別供試品溶液制備方法優(yōu)選

考察了樣品經(jīng)水超聲提取后，將水液先后采用乙醚、正丁醇萃取，對不同極性成分進行富集。取乙醚萃取得供試品溶液用于鑒別白術(shù)，結(jié)果白術(shù)鑒別陰性無干擾，專屬性強；取正丁醇萃取得供試品溶液鑒別陳皮、炒萊菔子、甘草，結(jié)果甘草鑒別陰性樣品中有干擾，加入適量PSA后可以有效的去除有機酸和色素，使斑點更加清晰，結(jié)果優(yōu)化后的供試品制備方法陳皮、炒萊菔子、甘草鑒別陰性無干擾，專屬性強。

3.2 含量測定色譜條件優(yōu)選

結(jié)合處方工藝，選取制劑中含量在萬分之二以上成分，芥子堿、3,6′-二芥子?；崽?、橙皮苷、蕓香柚皮苷、甘草苷、甘草酸作為定量指標。采用苯基柱，考察了以乙腈-3%乙酸為流動相，芥子堿硫氰酸鹽分離較好，但是其他5個成分分離度較差；采用常規(guī)C18柱，考察了乙腈-0.1%甲酸水溶液、乙腈- 0.1%三氟乙酸水溶液、乙腈-3%乙酸水溶液3種流動相體系，結(jié)果以乙腈-0.1%甲酸水溶液、乙腈-3%乙酸水溶液為流動相時，其他成分分離較好，芥子堿硫氰酸鹽保留差，分離度達不到要求；以乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液為流動相時，芥子堿硫氰酸鹽保留適中，峰形較好，且其他成分的分離度均在1.5以上，最終選擇了乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液作為流動相?？疾炝?個品牌色譜柱Kromasil C18、Waters Symmetry、Fortis H2O、Shimadzu C18-AQ，結(jié)果6個指標成分均能得到較好分離。

3.3 對照品溶液配制溶劑優(yōu)選

研究發(fā)現(xiàn)芥子堿硫氰酸鹽穩(wěn)定性差。分別采用甲醇、50%甲醇、0.1%三氟乙酸甲醇溶液、3%冰醋酸甲醇溶液配制芥子堿硫氰酸鹽對照品，考察芥子堿硫氰酸鹽在溶液中的穩(wěn)定性。結(jié)果以甲醇、50%甲醇為溶劑時，芥子堿硫氰酸鹽在8 h內(nèi)峰面積下降顯著；以0.1%三氟乙酸的甲醇溶液、3%冰醋酸甲醇溶液作為溶劑時，在冷藏的條件下，30 d內(nèi)芥子堿硫氰酸鹽含量無顯著變化。故選擇采用0.1%的三氟乙酸甲醇溶液作為芥子堿硫氰酸鹽的配制溶劑。

3.4 小結(jié)

本研究建立的6個藥味的TLC薄層鑒別方法及6個成分含量測定方法可以較為全面地對XJG進行質(zhì)量控制。但是鑒于本品的水提工藝，暫未能建立處方中茯苓和麥芽的專屬性成分鑒別，后續(xù)有待進一步研究。含量測定指標成分3,6′-二芥子酰基蔗糖、蕓香柚皮苷在處方藥味中均未進行控制，后續(xù)將繼續(xù)開展藥材質(zhì)量標準提升研究，并建立中間體質(zhì)量控制標準。通過藥材-中間體-制劑質(zhì)控體系的建立，最終實現(xiàn)全過程的質(zhì)量控制。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 朱赟斐, 譚善忠, 王洪蘭, 等. 基于UPLC-Q-TOF-MS/ MS技術(shù)的益氣健脾顆粒化學(xué)成分分析 [J]. 中草藥, 2022, 53(12): 3601-3613.

[2] Luo L, Cai J, Zhou Z,. Polysaccharides from: A review on their extraction, purification, structure, and bioactivities [J]., 2022, 2022: 2338533.

[3] 凌俊紅. 麥芽的化學(xué)成分及炮制學(xué)研究 [D]. 沈陽: 沈陽藥科大學(xué), 2007.

[4] 馮群, 姚景春, 范玉蘭, 等. 基于“五原則”的開心散質(zhì)量標志物 (Q-Marker) 的預(yù)測分析 [J]. 中草藥, 2022, 53(11): 3550-3556.

[5] Deng M, Chen H J, Long J Y,. Atractylenolides (I, II, and III): A review of their pharmacology and pharmacokinetics [J]., 2021, 44(7): 633-654.

[6] 黃芳, 周熙, 羅輝泰, 等. 基于HPLC-Q-TOF-MS及化學(xué)模式識別方法對陳皮的化學(xué)成分快速鑒別及產(chǎn)地判別研究 [J]. 中草藥, 2022, 53(20): 6361-6368.

[7] 董嘉琪, 陳金鵬, 龔蘇曉, 等. 山楂的化學(xué)成分、藥理作用及質(zhì)量標志物(Q-Marker)預(yù)測 [J]. 中草藥, 2021, 52(9): 2801-2818.

[8] Gao L, Li H, Li B Q,. Traditional uses, phytochemistry, transformation of ingredients and pharmacology of the dried seeds ofL. (), A comprehensive review [J]., 2022, 294: 115387.

[9] 高思佳, 王計瑞, 秦偉瀚, 等. 萊菔子炮制前后HPLC特征圖譜及4種成分含量變化研究 [J]. 中國中醫(yī)藥信息雜志, 2021, 28(5): 70-75.

[10] Li F F, Liu B, Li T,. Review of constituents and biological activities of triterpene saponins frometand its solubilization characteristics [J]., 2020, 25(17): 3904.

[11] 李葆林, 麻景梅, 田宇柔, 等. 甘草中新發(fā)現(xiàn)化學(xué)成分和藥理作用的研究進展 [J]. 中草藥, 2021, 52(8): 2438-2448.

[12] 李天嬌, 包永睿, 王帥, 等. 中藥質(zhì)量控制與評價創(chuàng)新方法研究進展及應(yīng)用 [J]. 中草藥, 2022, 53(20): 6319-6327.

[13] 許嘯, 張淹, 劉曉云, 等. 復(fù)方阿膠漿質(zhì)量標準提升研究 [J]. 中草藥, 2021, 52(20): 6226-6233.

[14] 付莉, 韓桂茹. 三種制劑中多味藥材的同時鑒別研究 [J]. 中國藥事, 2012, 26(1): 69-71.

[15] 周躍華, 路金才, 周娟, 等. 關(guān)于中藥新藥復(fù)方制劑“整體鑒別”新模式的思考 [J]. 中草藥, 2021, 52(8): 2199-2204.

[16] 張越, 陳健, 李洋, 等. 經(jīng)典名方溫經(jīng)湯標準湯劑HPLC指紋圖譜建立及9種成分含量測定 [J]. 中草藥, 2020, 51(18): 4664-4672.

[17] 李華, 劉梓晗, 孟欣, 等. 經(jīng)典名方清燥救肺湯的多成分含量測定方法和抗氧化活性研究 [J]. 藥學(xué)學(xué)報, 2021, 56(12): 3511-3517.

[18] 中國藥典[S]. 四部. 2020: 59.

[19] 中國藥典[S]. 一部. 2020: 88.

Establishment of quality standard of Xiao’er Jianpi Granules

WANG Ding1, 2, 3, WANG Jia2, 3, HU Jun-hua2, 3, ZHANG Chen-feng2, 3, WANG Zhen-zhong1, 2, 3, LIN Xia2, 3, XIAO Wei1, 2, 3

1. Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210000, China 2. Jangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China 3. National Key Laboratory on Technologies for Chinese Medicine Pharmaceutical Process Control and Intelligent Manufacture, Lianyungang 222001, China

To establish a qualitative and quantitative analysis method for Xiao’er Jianpi Granules (小兒健脾顆粒, XJG).Based on the new pattern of “holistic identification”, TLC was used to establish the identification methods of one-sample multi-detection [stir-fried Laifuzi (, sRS), Gancao (et, GRR) and Chenpi (, CRP)] and one-plate multi-detection (sRS, GRR). HPLC was performed on a Kromasil C18column (150 mm × 4.6 mm, 3.5 μm) with a gradient elution using 0.1% trifluoroacetic acid-acetonitrile as the mobile phase, the injection volume was 5 μL, the column temperature was 30 ℃, the flow rate was 1 mL/min, and the detection wavelengths were 252 nm (glycyrrhizic acid), 275 nm (liquiritin), 283 nm (narirutin, hesperidin), 326 nm (3,6′-disinapoyl sucrose, sinapine thiocyanate).The established TLC identification methods with clear spots, could exclusively identify Baizhu (, AMR), CRP, Shanyao (, DR), sRS, Shanzha (, CF) and GRR in the prescription. A method was established for the determination of sinapine thiocyanate, 3,6′-dierosyl sucrose, hesperidin, narirutin, liquiritin and glycyrrhizic acid, the linear relationship of the six main components in their respective concentration ranges was good (≥ 0.999 9) and the precision, stability and repeatability were good. The recoveries were 97.8%—101.6%. The mass concentrations of sinapine thiocyanate, 3,6′-dierosyl sucrose, hesperidin, narirutin, liquiritin and glycyrrhizic acid in four batches of sample were 0.57—0.80, 0.44—0.64, 3.81—4.93, 1.45—2.72, 0.56—1.14, 1.20—1.58 mg/mL, respectively.The TLC method for the identification of six medicinal flavors was established, and the identification was clear and exclusive. The HPLC method for the simultaneous determination of six components was established. The established method is rapid, accurate and specific, which provides a reference basis for the establishment of quality standards.

Xiao’er Jianpi Granules; HPLC; TLC; one-plate multi-detection; quality control; holistic identification; one-sample multi-detection; glycyrrhizinate; liquiritin; narirutin; hesperidin; 3,6′-disinapoyl sucrose; sinapine thiocyanate;;;; stir-fried;;et

R283.6

A

0253 - 2670(2023)18 - 5933 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.18.011

2023-02-11

國家中醫(yī)藥管理局—基于重點研究室研究領(lǐng)域的中醫(yī)藥多學(xué)科研究能力提升項目：中藥提取精制新技術(shù)

王 鼎，男，碩士研究生，研究方向為中藥制藥技術(shù)與產(chǎn)品開發(fā)。E-mail: 1162862224@qq.com

肖 偉，中國工程院院士，研究員級高級工程師，博士生導(dǎo)師，研究方向為中藥新藥的研究與開發(fā)。E-mail: kanionlunwen@163.com

林 夏，女，碩士，高級工程師/副主任中藥師，研究方向為中藥新藥研發(fā)。Tel: 15105130710 E-mail: linxia297125856@163.com

[責任編輯 鄭禮勝]