白銘松 何佳艷 熊彩云 袁潘 李成功 潘文麗

摘 要：目的：優(yōu)化探索適合雀辣中辣椒素和二氫辣椒素的含量測(cè)定方法，并對(duì)雀辣中的辣椒素及二氫辣椒素進(jìn)行測(cè)定，為雀辣資源的開發(fā)利用開展基礎(chǔ)研究。方法：通過對(duì)不同的提取方法進(jìn)行優(yōu)化，得到較優(yōu)的方法并測(cè)定不同地區(qū)雀辣中辣椒素及二氫辣椒素的含量。結(jié)果：辣椒素在0.019 2～0.191 8 mg·mL-1線性良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999 9，二氫辣椒素在0.015 7～0.157 5 mg·mL-1線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 8；方法回收率為91.06%～101.22%，RSD為0.8%～2.1%。雀辣中辣椒素含量為（3.190±0.025）～（5.308±0.022）mg·g-1，二氫辣椒素含量為（0.868±0.021）～（1.082±0.018）mg·g-1，普洱雀辣中辣椒素及二氫辣椒素含量高于西雙版納雀辣。結(jié)論：本文建立的方法快速、穩(wěn)定、準(zhǔn)確、節(jié)省溶劑，適合雀辣中辣椒素和二氫辣椒素含量的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：雀辣；辣椒素；二氫辣椒素；高效液相色譜

Determination of Capsaicin and Its Analogues in QueLa by High Performance Liquid Chromatography

BAI Mingsong， HE Jiayan， XIONG Caiyun， YUAN Pan， LI Chenggong， PAN Wenli*

（Xiangyun Inspection and Testing Institute for Comprehensive Control， Dali 671000， China）

Abstract： Objective： To optimize and explore a suitable method for determining the content of capsaicin and dihydrocapsaicin in QueLa， and to determine the capsaicin and dihydrocapsaicin in QueLa to provide basic research for the development and utilization of QueLa resources. Method： By optimizing different extraction methods， a better method was obtained and the content of capsaicin and dihydrocapsaicin in different regions of QueLa was determined. Result： The linearity of capsaicin is good within 0.019 2～0.191 8 mg·mL-1， with a correlation coefficient greater than 0.999 9. The linearity of dihydrocapsaicin is good within 0.015 7～0.157 5 mg·mL-1， and the correlation coefficient was 0.999 8; the recovery rate of the method is 91.06%～101.22%， and the RSD is 0.8%～2.1%. The content of capsaicin in QueLa is （3.190±0.025）～（5.308±0.022） mg·g-1， and the content of dihydrocapsaicin is （0.868±0.021）～（1.082±0.018） mg·g-1. The content of capsaicin and dihydrocapsaicin in Puer QueLa is higher than that in Xishuangbanna QueLa. Conclusion： The established method is rapid， stable， accurate， and solvent efficient. It is suitable for the determination of capsaicin and dihydrocapsaicin in QueLa.

Keywords： QueLa; capsaicin; dihydrocapsaicin; high performance liquid chromatography

雀辣資源主要分布于云南普洱地區(qū)、西雙版納地區(qū)和德宏地區(qū)。雀辣在普洱地區(qū)主要分布于寧洱縣黎明鄉(xiāng)、磨黑鎮(zhèn)把邊江流域和勐野江流域，當(dāng)?shù)厝朔Q其為雀屎辣。顧曉振等[1]研究證實(shí)了雀辣更傾向于灌木辣椒（Capsicum frutescens）。辣椒素和二氫辣椒素是辣椒中的主要生物活性成分，已有研究證實(shí)辣椒素具有抗氧化、預(yù)防心血管疾病、保護(hù)胃腸黏膜和抗腫瘤等多種功效[2-10]，今后可從提取辣椒素及類似物的途徑發(fā)展到醫(yī)藥等領(lǐng)域的應(yīng)用和研究。

辣椒素的含量可使用液相色譜法[11-12]、氣相色譜法[13]、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法[14-15]等方法進(jìn)行測(cè)定，但目前鮮有雀辣中辣椒素及二氫辣椒素分析檢測(cè)的報(bào)道。本文建立和優(yōu)化了雀辣中辣椒素和二氫辣椒素的含量測(cè)定方法，并對(duì)普洱雀辣和西雙版納雀辣中辣椒素及二氫辣椒素的含量進(jìn)行分析比較，為雀辣產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

普洱雀辣采購(gòu)于云南寧洱縣黎明鄉(xiāng)，西雙版納雀辣購(gòu)于云南西雙版納（所有樣品經(jīng)烘干后備用）；辣椒素（成都曼思特生物科技有限公司，純度為98.61%）；二氫辣椒素（Stanford Chemicals，純度為99.11%）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司，GZX-GF-101）；分析天平（梅特勒，ME204T）；高效液相色譜儀（賽默飛，UItimate 3000）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品前處理

方法一：取樣品約0.5 g，分別加入10 mL、

5 mL、5 mL 70%乙醇溶液超聲提取3次，每次提取20 min，合并提取液，混勻后直接過0.45 μm濾膜，待測(cè)定。方法二：稱取樣品約1 g，分別加入

20 mL、15 mL、15 mL 50%乙醇溶液超聲提取3次，每次提取20 min，合并提取液，精確量取20 mL于蒸發(fā)皿中蒸至近干，加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混勻后過0.22 μm濾膜，待測(cè)定。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別稱取辣椒素、二氫辣椒素0.019 45 g、

0.015 89 g（精密稱定），用甲醇溶解并稀釋定容至

10 mL，得到濃度為1.92 mg·mL-1的辣椒素和濃度為

1.57 mg·mL-1的二氫辣椒素儲(chǔ)備溶液。分別準(zhǔn)確吸取辣椒素、二氫辣椒素儲(chǔ)備溶液0.01 mL、0.02 mL、

0.04 mL、0.05 mL和0.10 mL于10 mL容量瓶中并用甲醇定容至刻度，配成辣椒素濃度為0.019 2 mg·mL-1、0.038 4 mg·mL-1、0.076 7 mg·mL-1、0.095 9 mg·mL-1和

0.191 8 mg·mL-1，二氫辣椒素濃度為0.015 7 mg·mL-1、0.031 5 mg·mL-1、0.063 0 mg·mL-1、0.0787 4 mg·mL-1和

0.157 5 mg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.2.3 色譜條件

Acclaim? 120 C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，

5 μm）；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相：甲醇+1%磷酸水（80+20），等度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理的優(yōu)化結(jié)果

對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)使用液及不同前處理方法得到的樣品提取液進(jìn)行檢測(cè)分析。用辣椒素和二氫辣椒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間進(jìn)行定性；使用外標(biāo)多點(diǎn)校準(zhǔn)法，以峰面積進(jìn)行定量。辣椒素和二氫辣椒素的測(cè)定結(jié)果見表1。兩種前處理方法檢測(cè)結(jié)果無顯著差異

（P＞0.05），即不同的樣品處理方法對(duì)雀辣辣椒素和二氫辣椒素含量的檢測(cè)結(jié)果沒有太大的影響。但第一種方法操作簡(jiǎn)便，所用試劑較少，故采用方法一進(jìn)行方法確認(rèn)并對(duì)不同產(chǎn)地雀辣中二氫辣椒素和辣椒素的含量進(jìn)行測(cè)定。

2.2 方法的確認(rèn)

2.2.1 線性及相關(guān)系數(shù)

將配制的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液上機(jī)分析，以濃度為橫坐標(biāo)，目標(biāo)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。辣椒素標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=71.856X+0.356 4，相關(guān)系數(shù)大于0.999 9，表明辣椒素在0.019 2～0.191 8 mg·mL-1線性良好。二氫辣椒素標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=101.2X+0.557 6，相關(guān)系數(shù)為0.999 8，表明二氫辣椒素在0.015 7～0.157 5 mg·mL-1線性良好。

2.2.2 方法檢出限和定量限

使用同一濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)儀器多次測(cè)定，選取目標(biāo)峰后較為平直的一段（9～10 min）作為噪音基線，得到化合物的信噪比（S/N）。根據(jù)GB/T 27417—2017中5.4.2.2信噪比法評(píng)估檢出限（LOD），并默認(rèn)信噪比與濃度呈正比，計(jì)算化合物的儀器檢出濃度（信噪比為3）和儀器定量濃度（信噪比為10），得到樣品中化合物的實(shí)際檢出限與定量限。

由表2可知，辣椒素的檢出限為5.84 mg·kg-1，定量限為19.46 mg·kg-1，二氫辣椒素檢出限為

4.68 mg·kg-1，定量限為15.61 mg·kg-1。從已知的資料可知[11-12，16-17]，辣椒中辣椒素和二氫辣椒素的含量遠(yuǎn)高于所建立方法的檢出限和定量限，因此可以推廣應(yīng)用于其他品種辣椒中辣椒素及二氫辣椒素的含量測(cè)定。

2.2.3 方法準(zhǔn)確度

按照定量限、2倍定量限、10倍定量限加入對(duì)照品，按照方法一進(jìn)行前處理，上機(jī)分析，扣除樣品本底值后得到回收率。辣椒中辣椒素及二氫辣椒素在低加標(biāo)濃度時(shí)的回收率分別為91.23%、91.06%，在中加標(biāo)濃度時(shí)的回收率分別為94.85%、93.33%，在高加標(biāo)濃度時(shí)的回收率分別為101.22%、99.58%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度高，準(zhǔn)確度滿足相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)回收率的要求。

2.2.4 方法精密度

稱取約0.5 g的試樣6份，按照方法一進(jìn)行前處理，分別進(jìn)樣測(cè)定。辣椒素測(cè)定結(jié)果為3.221 mg·g-1、

3.215 mg·g-1、3.173 mg·g-1、3.177 mg·g-1、3.217 mg·g-1和3.171 mg·g-1，精密度為0.8%。二氫辣椒素測(cè)定結(jié)果為0.848 mg·g-1、0.886 mg·g-1、0.851 mg·g-1、

0.854 mg·g-1、0.889 mg·g-1和0.869 mg·g-1，精密度為2.1%。該方法精密度良好，滿足相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)方法精密度的要求。

2.3 不同產(chǎn)地雀辣中辣椒素和二氫辣椒素含量

使用方法一對(duì)成熟度一致的2份西雙版納雀辣、2份普洱雀辣進(jìn)行處理，上機(jī)檢測(cè)分析。根據(jù)辣椒素和二氫辣椒素的峰面積求出樣品中辣椒素、二氫辣椒素的含量，結(jié)果見表3。普洱雀辣的辣椒素及二氫辣椒素的含量均明顯高于西雙版納雀辣。有研究表明辣椒中辣椒素及二氫辣椒素的含量與辣椒的品種、成熟度、地理環(huán)境等因素有關(guān)，成善漢等[18]的研究結(jié)果表明，印度超級(jí)辣椒的辣椒素含量最高達(dá)

59.86 mg·g-1；吳奕敏等[17]研究了小米辣的辣椒素含量為（0.050±0.004）～（8.966±0.306）mg·g-1，二氫辣椒素含量為（0.003±0.002）～（1.311±0.055）mg·g-1；MENICHINI等[13]研究了辣椒未成熟階段辣椒素含量為（1 071±16.7）μg·g-1，成熟階段辣椒素含量為

（4 363±23.1）μg·g-1。有研究發(fā)現(xiàn)雀辣中還含有維生素C等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，較其他品種的辣椒含量更高[16]，故雀辣具有明顯的研究開發(fā)價(jià)值。

3 結(jié)論

使用該方法測(cè)定雀辣中辣椒素及二氫辣椒素，辣椒素在0.019 2～0.191 8 mg·mL-1線性良好，相關(guān)系數(shù)大于0.999 9，二氫辣椒素在

0.015 7～0.157 5 mg·mL-1線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 8；方法回收率為91.06%～101.22%，RSD為0.8%～2.1%。優(yōu)化后的提取方法快速、穩(wěn)定、準(zhǔn)確、節(jié)省溶劑，方法適用于測(cè)定雀辣中辣椒素和二氫辣椒素的含量。雀辣中辣椒素含量為（3.190±0.025）～（5.308±0.022）mg·g-1，二氫辣椒素含量為（0.868±0.021）～（1.082±0.018）mg·g-1，普洱雀辣中辣椒素及二氫辣椒素的含量高于西雙版納雀辣。

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