周潔

摘 要：建立了利用高效液相色譜法測(cè)定異菌脲含量的方法，采用ODS不銹鋼柱，以乙腈+水=60+40（V/V）為流動(dòng)相，在檢測(cè)波長(zhǎng)220nm下采用外標(biāo)法對(duì)異菌脲原藥進(jìn)行了定量測(cè)定。相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.18%，回收率99.65%，線性相關(guān)系數(shù)0.9997。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜；異菌脲；外標(biāo)法

1 概述

異菌脲是一種廣譜殺菌劑，為了檢測(cè)異菌脲含量，文章采用高效液相色譜外標(biāo)法對(duì)其含量進(jìn)行了測(cè)定，建立了簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的測(cè)定方法，方法的精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果令人滿意，可以用于異菌脲原藥的含量測(cè)定。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器

LC-1260高效液相色譜儀；平頭注射器（100μL）

超聲波

Auw220D電子天平（日本島津）。

2.2 試劑

乙腈：HPLC級(jí)；純水：純化水；磷酸：分析純；

異菌脲標(biāo)樣（含量≥98%）：異菌脲樣品

2.3 高效液相色譜操作條件

流動(dòng)相：乙腈+水=60+40（V/V），水用磷酸調(diào)節(jié)pH至4.0。

色譜柱：C18 250mm×4.6mm×5.0μm；

流動(dòng)相流速：1.0mL/min

檢測(cè)波長(zhǎng) 220nm。

2.4 測(cè)定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的制備。稱取異菌脲標(biāo)樣約50mg（稱準(zhǔn)至±0.1mg）于50ml容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。移取5ml于50ml容量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻待用。

2.4.2 試樣溶液的制備。稱取異菌脲樣品約50mg（稱準(zhǔn)至±0.1mg）于50ml容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。移取5ml于50ml容量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻待用。

2.4.3 實(shí)驗(yàn)方法。在2.3所述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，按標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序依次進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖并計(jì)算異菌脲的峰面積。

2.4.4 結(jié)果計(jì)算。將測(cè)得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩標(biāo)準(zhǔn)溶液中異菌脲峰面積，按下式計(jì)算異菌脲百分含量。

式中：R1-標(biāo)樣溶液中，異菌脲峰面積；R2-試樣溶液中，異菌脲峰面積；M1-異菌脲標(biāo)樣的質(zhì)量，g；M2-試樣的質(zhì)量，g；P-異菌脲標(biāo)樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果與討論

3.1 測(cè)定結(jié)果及精密度

取同一樣品，依據(jù)2.4.3所述方法重復(fù)測(cè)定6次，按2.4.4所述方法計(jì)算測(cè)定結(jié)果及精密度，見(jiàn)表1。

經(jīng)測(cè)定樣品中異菌脲的平均含量為97.02%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.17，變異系數(shù)為0.18%，方法精密度良好。

3.2 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

在已知含量的樣品中分別加入不同質(zhì)量的異菌脲配成5個(gè)已知樣，定量進(jìn)樣，在相同的色譜操作條件下定量分析，進(jìn)行回收率試驗(yàn)。異菌脲的回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

3.3 流動(dòng)相配比及酸度的影響

流動(dòng)相的選擇對(duì)樣品分離的好壞起到至關(guān)重要的作用，異菌脲在乙腈中有很好的溶解度，所以選用乙腈作溶劑，為了得到最佳的分離效果，對(duì)乙腈和水按不同比例，在色譜柱上進(jìn)行比較，乙腈的量較大時(shí)，樣品洗脫較快，色譜基線還未走平異菌脲峰即被洗脫出來(lái)，將導(dǎo)致積分面積誤差較大，含量不準(zhǔn)。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)，最后確定流動(dòng)相的配比為乙腈+水=60+40（V/V）。

3.4 波長(zhǎng)的選擇

在220nm波長(zhǎng)處，異菌脲有較大的吸收，且峰型對(duì)稱，無(wú)其它雜質(zhì)干擾，因而選定220nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.5 流動(dòng)相流速的選擇

依次改變流速為0.6min/ml、0.8min/ml、1.0min/ml、1.2min/ml進(jìn)行流速選擇，發(fā)現(xiàn)當(dāng)流速較小時(shí)，出峰速度太慢，流速大則樣品中的雜質(zhì)分不開(kāi)，經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)最后確定流動(dòng)相流速為1.0min/ml，在此流速下測(cè)定得到良好的分離效果。

3.6 線性關(guān)系曲線

稱取異菌脲標(biāo)準(zhǔn)品0.0500g于50ml容量瓶中，按乙腈溶解定容后，分別移取1ml，2ml，3ml，5ml，10ml于50ml容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。在上述的色譜條件下分別進(jìn)樣測(cè)定，最后校正以異菌脲的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，繪制線性關(guān)系曲線。

方程：y=3.195×107x+93465

相關(guān)系數(shù)：R=0.9997

4 結(jié)束語(yǔ)

實(shí)驗(yàn)表明，利用高效液相色譜法測(cè)定異菌脲原藥具有操作簡(jiǎn)便、快速，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，準(zhǔn)確度、精密度高，重現(xiàn)性好，適合異菌脲產(chǎn)品的檢驗(yàn)。

參考文獻(xiàn)

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