劉 娟,馮玉梅,韓 冰 ,邢燕平,李淑芬,楊 燕

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院 植物生物技術(shù)功能實(shí)驗(yàn)室,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010;2.內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學(xué)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010031)

小麥(TriticumaestivumL.)屬于禾本科(Poaceae)小麥族(Triticeae dumort)小麥屬(TriticumL.)。作為世界三大糧食作物之一,全球有近35%的人口以小麥為主食,據(jù)預(yù)測,到2050年,全世界人口將達(dá)到97億,人類對(duì)小麥的需求將會(huì)持續(xù)不斷地增加[1-2],隨著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的快速發(fā)展,農(nóng)作物的產(chǎn)量雖有了顯著提高,但由于生產(chǎn)條件改變所引起的倒伏問題也頻繁發(fā)生,因此,培育抗倒伏品種成為作物高產(chǎn)育種的主要目標(biāo)之一。在小麥育種工作中,小麥品種、環(huán)境因素和栽培措施都會(huì)使小麥發(fā)生倒伏現(xiàn)象,小麥自身品種因素作為主要因素,主要包括株高、節(jié)間長度、莖壁厚度、節(jié)間重量以及節(jié)間中纖維素和木質(zhì)素含量等[3]。株高的建成直接影響到小麥的抗倒伏性,研究發(fā)現(xiàn),小麥株高與倒伏呈顯著正相關(guān),在沒有倒伏的前提下,小麥株高與產(chǎn)量呈正相關(guān)[4-5]。株高的降低增加了植株的抗倒伏性,并使更多的營養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)移到發(fā)育的籽粒中[6]。目前,通過控制株高來優(yōu)化小麥株型,增強(qiáng)其倒伏性已經(jīng)成為小麥高產(chǎn)育種的重點(diǎn)工作。

小麥株高屬于微效多基因控制的復(fù)雜數(shù)量性狀,在其建成過程中會(huì)受Rht-1、Rht-2、Rht8、GAMyb、GA20ox和GA3ox等遺傳因素[7-8]以及環(huán)境因素的影響[9]。GAMyb基因是從大麥糊粉層細(xì)胞的cDNA文庫中分離發(fā)現(xiàn)[10],屬于GAs誘導(dǎo)的R2R3型MYB類轉(zhuǎn)錄因子[11],在GA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起正向調(diào)控作用[12],具有促進(jìn)種子萌發(fā)、花粉萌發(fā)及莖稈伸長等功能[13-15]。在小麥中,TaGAMyb基因定位于3AL3-0.42-0.78、3BL3-0.63-1.00和3DL3-0.81-1.00染色體上,Haseneyer等[16]在42份小麥的A、B和D染色體上分別鑒定出1,7,3種單倍型,由此可以看出,不同基因型小麥材料中TaGAMyb-A是完全保守的,而TaGAMyb-B和TaGAMyb-D存在多個(gè)等位變異,TaGAMyb-B的等位變異更加豐富。劉進(jìn)英等[17]在不同休眠特性的小麥材料中克隆了TaGAMyb基因在3A、3B和3D染色體上的全長,發(fā)現(xiàn)TaGAMyb-B基因在小麥中存在2種等位基因,將其分別命名為TaGAMyb-Ba(GenBank:KU589288)和TaGAMyb-Bb(GenBank:KU589289),與TaGAMyb-Ba序列相比,TaGAMyb-Bb在第一內(nèi)含子存在84 bp的插入序列。劉夢等[18]利用93份春小麥自然群體研究發(fā)現(xiàn),TaGAMyb-Ba和TaGAMyb-Bb2種等位基因型材料與春小麥株高顯著相關(guān)。本研究將利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化技術(shù)進(jìn)一步明確小麥TaGAMyb-B第一內(nèi)含子區(qū)的84 bp差異序列在水稻中的功能。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

水稻遺傳轉(zhuǎn)化受體:粳稻日本晴。

1.2 試驗(yàn)引物

根據(jù)內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物生物技術(shù)功能實(shí)驗(yàn)室在GenBank中注冊(cè)的TaGAMyb-Ba和TaGAMyb-Bb的序列,設(shè)計(jì)特異性引物擴(kuò)增TaGAMyb-Ba和TaGAMyb-Bb(第一內(nèi)含子存在84 bp的插入序列)的基因組序列。所用引物均由北京六合華大基因科技有限公司合成(www.bgi-write.com),序列信息見表1。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 水稻轉(zhuǎn)基因植株的獲得 將構(gòu)建好的植物融合表達(dá)載體(pCAMBIA1390-Ubi-TaGAMyb-Ba/b-GFP)和空載體(pCAMBIA1390-Ubi-GFP)經(jīng)酶切和PCR雙重鑒定正確后轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105感受態(tài)細(xì)胞,利用農(nóng)桿菌侵染技術(shù)侵染日本晴種子的愈傷組織,經(jīng)篩選、繼代培養(yǎng)、鑒定獲得陽性再生苗[19],繼續(xù)培育,獲得T1種子。上述轉(zhuǎn)基因水稻材料種植于安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院崗集基地。

隨機(jī)選取T1各轉(zhuǎn)基因型水稻和對(duì)照組共21個(gè)株系,每個(gè)株系隨機(jī)選取8～10粒種子進(jìn)行萌發(fā),培育到三葉期時(shí),剪取每個(gè)株系的單株幼嫩葉片,提取基因組DNA,PCR鑒定陽性株系。接著,分別選取各轉(zhuǎn)基因型水稻T1陽性株系進(jìn)行小苗的培育(28 ℃,白天光照16 h/晚上光照8 h),待長至三葉期時(shí),剪取幼苗葉片再進(jìn)行陽性單株的鑒定,將陽性單株移栽繼續(xù)進(jìn)行水培,每個(gè)株系至少20個(gè)單株,培養(yǎng)獲得T2種子。上述轉(zhuǎn)基因水稻材料種植于河南省濮陽市試驗(yàn)田。

酶切反應(yīng)體系為:質(zhì)粒DNA 7 μL,內(nèi)切酶KpnⅠ和PmlⅠ/BamHⅠ各1 μL,10×K Buffer 1 μL,BSA 2 μL,加RNase Free ddH2O至20 μL。

PCR反應(yīng)體系為:模板DNA 1 μL,2× EasyTaq PCR SuperMix 6.2 μL,引物0.15 μL(濃度:0.025 nmol/μL),加滅菌雙蒸水至15 μL。PCR反應(yīng)程序?yàn)?95 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性30 s,退火溫度見表1,時(shí)間為30 s,72 ℃延伸30 s,35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min,4 ℃保存。用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測,Gold View核酸染料染色,緩沖體系為1×TAE溶液,100 V電壓下電泳15 min,在凝膠成像儀下觀察并照相。

1.3.2 轉(zhuǎn)基因后代的鑒定與分析

1.3.2.1 T1轉(zhuǎn)基因植株的PCR鑒定 以相同轉(zhuǎn)化條件下轉(zhuǎn)化空載體的轉(zhuǎn)基因材料作為對(duì)照組,以排除報(bào)告基因或其他非目標(biāo)基因的表達(dá)對(duì)目標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄及植株表型的影響[20]。剪取轉(zhuǎn)基因水稻的幼嫩葉片,用新型植物基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA,用表達(dá)載體特異性引物對(duì)JDF/R(該引物橫跨載體和目的基因設(shè)計(jì))部分目的基因和部分載體序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增,以檢測轉(zhuǎn)基因后代中的PCR陽性株系。

1.3.2.2 轉(zhuǎn)錄本表達(dá)分析 提取轉(zhuǎn)基因水稻總RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA。以水稻Q-OsActinF/R作為內(nèi)參,并以轉(zhuǎn)基因水稻種子、根、莖以及葉的cDNA(稀釋20倍)為模板,每個(gè)樣品進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù),3次生物學(xué)重復(fù)。分析結(jié)果采用2-ΔΔCt計(jì)算[21]。具體步驟見Feng等[22]的方法。

1.3.3 脅迫處理 選取飽滿的T2轉(zhuǎn)基因水稻種子,經(jīng)無水乙醇浸泡消毒后,進(jìn)行幼苗培育(28 ℃,白天光照16 h/晚上光照8 h),待生長至14 d,采用澆灌的方式分別進(jìn)行以下脅迫處理。激素脅迫:在培養(yǎng)皿中加入100 mL 0.2 mg/L的GA3;鹽脅迫:在培養(yǎng)皿中加入100 mL 150 mmol/L的NaCl;干旱脅迫:在培養(yǎng)皿中加入100 mL 300 mmol/L的甘露醇。分別于處理前(0 h)和處理后2,6,12,24,48 h取樣、液氮速凍,-80 ℃保存?zhèn)溆?每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.4 T2轉(zhuǎn)基因水稻表型鑒定 收獲T2轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻,每株系選取10棵單株進(jìn)行株高,穗長,第一、二、三莖長及莖粗,百粒質(zhì)量,穗粒質(zhì)量和分蘗等表型鑒定和分析。

1.3.5 轉(zhuǎn)基因水稻第二節(jié)間石蠟切片制作與分析 分別選取轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻的T2成熟種子進(jìn)行培養(yǎng)(28 ℃,白天光照16 h/晚上光照8 h)。待幼苗發(fā)芽并生長至14 d剪取單株第二莖節(jié),用于制作轉(zhuǎn)基因水稻第二節(jié)間石蠟切片,制作方法參照毛曉霞[23]的方法。

2 結(jié)果與分析

2.1 重組載體的鑒定

將構(gòu)建好的重組載體TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP經(jīng)過酶切鑒定(圖1)與PCR鑒定均得到預(yù)期大小的目的片段(圖2),同時(shí)測序結(jié)果也進(jìn)一步表明表達(dá)載體TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP構(gòu)建成功。

M.DL10000 bp DNA Marker;1.Ubi-TaGAMyb-Bb-GFP;2.Ubi-TaGAMyb-Ba-GFP.

M.DL1000 bp DNA Marker;1.TaGAMyb-Bb(764 bp);2.TaGAMyb-Ba(659 bp).

M.DL2000 bp DNA Marker;1—9.部分轉(zhuǎn)基因水稻陽性單株;CK.轉(zhuǎn)基因水稻陰性單株(沒有該檢測基因)。 M.DL2000 bp DNA Marker;1—9.Some positive individuals of transgenic rice; CK.Negative individuals of transgenic rice(no gene for this test).

2.2 轉(zhuǎn)基因水稻的鑒定

2.2.1 轉(zhuǎn)基因水稻T1的PCR鑒定 用特異性引物JDF/R對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻T1各株系單株進(jìn)行PCR陽性檢測(圖 3),在檢測的20個(gè)轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻株系中,共檢測到19個(gè)陽性單株,轉(zhuǎn)基因效率為95%。

2.2.2 轉(zhuǎn)基因水稻不同組織器官中TaGAMyb-B轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)分析 對(duì)轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻株系T2種子以及生長30 d幼苗的根、莖、葉進(jìn)行RT-qPCR分析,結(jié)果表明,在轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻被檢測的各組織中,TaGAMyb-B的轉(zhuǎn)錄本均有表達(dá),且在各組織中轉(zhuǎn)錄本表達(dá)水平的趨勢為莖>根>種子>葉(圖4)。

圖4 轉(zhuǎn)基因水稻中TaGAMyb-B基因的相對(duì)表達(dá)量Fig.4 The relative expression levels of TaGAMyb-B in transgenic rice

2.2.3 轉(zhuǎn)基因水稻在不同脅迫處理下TaGAMyb-B轉(zhuǎn)錄本表達(dá)變化 小麥株高由多個(gè)節(jié)間構(gòu)成,基部節(jié)間的健壯程度與小麥抗倒伏性相關(guān)程度為:第二節(jié)間>第一節(jié)間>第三節(jié)間[24]。為進(jìn)一步研究轉(zhuǎn)基因水稻在應(yīng)對(duì)不同非生物脅迫處理時(shí)TaGAMyb-B基因轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)變化,對(duì)轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻T2的第二莖節(jié)分別用NaCl(150 mmol/L)、甘露醇(300 mmol/L)和GA(0.2 mg/L)處理2,6,12,24,48 h,以處理前0 h作為對(duì)照。RT-qPCR分析結(jié)果顯示(圖5):在NaCl(150 mmol/L)脅迫處理不同時(shí)間的第二莖節(jié)材料TaGAMyb-B在各處理時(shí)期的表達(dá)量總是TaGAMyb-Bb-GFP大于TaGAMyb-Ba-GFP;并且轉(zhuǎn)錄本表達(dá)量的變化趨勢在處理6 h之前,轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP材料幾乎沒有變化,而轉(zhuǎn)TaGAMyb-Bb-GFP基因型材料TaGAMyb-B轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)量降到了最低值;從NaCl處理6 h之后,TaGAMyb-B轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)量在2種轉(zhuǎn)基因類型材料中均是先升高后降低的趨勢,且在處理24 h時(shí)再次達(dá)到峰值。

圖5 不同脅迫處理下轉(zhuǎn)基因水稻中TaGAMyb-B基因的表達(dá)變化Fig.5 Expression changes of TaGAMyb-B in transgenic rice with during different stress treatments

在甘露醇(300 mmol/L)脅迫處理不同時(shí)間的第二莖節(jié)材料,TaGAMyb-B在各處理時(shí)期的表達(dá)量總是TaGAMyb-Bb-GFP大于TaGAMyb-Ba-GFP。而且轉(zhuǎn)錄本表達(dá)量的變化趨勢均為先迅速升高后緩慢降低,并且在2種轉(zhuǎn)基因材料中,均是在處理2 h時(shí)TaGAMyb-B轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)量達(dá)到峰值,其中在干旱處理2,6 h時(shí),TaGAMyb-B轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)量是對(duì)照組的1.32～2.40倍。

在GA(0.2 mg/L)脅迫處理不同時(shí)間的第二莖節(jié)材料,TaGAMyb-B在各處理時(shí)期的表達(dá)量總是TaGAMyb-Bb-GFP大于TaGAMyb-Ba-GFP。TaGAMyb-B在2種轉(zhuǎn)基因材料TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP中的表達(dá)量先逐漸升高后又迅速降低;在GA處理12 h,TaGAMyb-B的表達(dá)量分別是對(duì)照的9.34,17.61倍;在處理2～12 h過程中,第二莖節(jié)中TaGAMyb-B的表達(dá)量為TaGAMyb-Bb-GFP大于TaGAMyb-Ba-GFP;處理24～48 h的過程中,第二莖節(jié)中TaGAMyb-B的表達(dá)量為TaGAMyb-Ba-GFP大于TaGAMyb-Bb-GFP。

以上非生物脅迫處理的試驗(yàn)結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因水稻中TaGAMyb-B表達(dá)量會(huì)受到NaCl、甘露醇及GA誘導(dǎo)脅迫的影響;TaGAMyb-B在各處理各時(shí)期的表達(dá)量總是TaGAMyb-Bb-GFP大于TaGAMyb-Ba-GFP;且相較于轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP基因型水稻,轉(zhuǎn)TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻在應(yīng)對(duì)外界非生物脅迫處理時(shí)TaGAMyb-B轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)量波動(dòng)范圍更大。

2.2.4 轉(zhuǎn)基因水稻T2表型觀察 對(duì)T2各轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻成熟期表型進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)表明,轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP、TaGAMyb-Bb-GFP和轉(zhuǎn)空載體對(duì)照基因型的表型統(tǒng)計(jì)分析如下:平均分蘗數(shù)分別為8.27,6.33和4.10(TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP與對(duì)照相比差異顯著,P=0.00和P=0.006),且轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻二者之間的分蘗數(shù)也呈顯著差異(P=0.015);穗長分別為16.42,14.40,15.40 cm,且轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻間的穗長呈顯著差異(P=0.007);第一莖粗分別為3.48,2.97,3.18 mm,第二莖粗分別為3.04,2.50,3.00 mm,第三莖粗分別為2.53,2.14,2.44 mm,且轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻二者之間的第一莖粗、第二莖粗、第三莖粗均呈顯著差異(P=0.003,P=0.00和P=0.00);第一莖節(jié)長分別為1.70,2.00,1.63 cm,第二莖節(jié)長為5.97,6.43,5.60 cm,第三莖長為10.90,11.89,10.30 cm(圖6)。以上結(jié)果表明,轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因顯著影響了轉(zhuǎn)基因水稻的莖粗、分蘗數(shù)和穗長。

不同小寫字母表示差異顯著,P<0.05。圖8同。Different lowercase letters indicate significant different,P<0.05.The same as Fig.8.

圖7 轉(zhuǎn)基因水稻第二節(jié)間橫切面Fig.7 Transverse sections of second stem section in transgenic rice

2.2.5 轉(zhuǎn)基因水稻T2第二莖節(jié)厚壁細(xì)胞觀察 馬躍芳等[25]研究發(fā)現(xiàn),水稻抗倒伏品種具有矮而強(qiáng)度大的莖稈以及短而結(jié)實(shí)的第二節(jié)間,水稻的莖稈由節(jié)間組成,節(jié)間由表皮、厚壁組織、維管束以及薄壁組織等組成,其中,厚壁組織對(duì)莖支持起關(guān)鍵作用。本研究通過T2表型鑒定發(fā)現(xiàn):轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻的莖長和莖粗存在顯著差異。進(jìn)一步對(duì)2種轉(zhuǎn)基因材料莖節(jié)制作了組織切片,通過對(duì)切片的觀察和測量發(fā)現(xiàn):轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻橫切面厚壁組織平均厚度分別為10.26,6.89 μm(圖 7),二者呈顯著差異(P=0.025)(圖8);統(tǒng)計(jì)轉(zhuǎn)基因水稻莖節(jié)縱切面連續(xù)分布的30個(gè)完整厚壁細(xì)胞的長度,結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻的厚壁細(xì)胞的平均長度分別為23.1 ,40.6 μm(圖9),二者呈極顯著差異(P=0.00)(圖10)。以上研究結(jié)果進(jìn)一步說明,TaGAMyb-B中84 bp的差異顯著影響了厚壁組織細(xì)胞的寬度和厚壁細(xì)胞的長度,進(jìn)而影響了水稻的莖粗和莖長。

圖8 轉(zhuǎn)基因水稻第二節(jié)間橫切面厚壁組織平均厚度Fig.8 Average thickness of sclerenchyma in transverse sections of second stem section in transgenic rice

圖9 轉(zhuǎn)基因水稻第二節(jié)間縱切面Fig.9 Longitudinal sections of second stem section in transgenic rice

不同大寫字母表示差異極顯著,P<0.01。Different capital letters indicate extremely significant,P<0.01.

3 結(jié)論與討論

越來越多的研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)含子中存在調(diào)節(jié)基因表達(dá)的增強(qiáng)元件,對(duì)基因的表達(dá)具有正向調(diào)控作用[26],根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)的TaGAMyb-Bb在第一內(nèi)含子存在一個(gè)反向重復(fù)的84 bp插入序列,經(jīng)Blast對(duì)比后發(fā)現(xiàn),該重復(fù)序列與小麥中國春一個(gè)腳手架基因(GenBank:HG670306.1)具有100%的同源性[17]。劉夢等[18]在對(duì)TaGAMyb的研究中發(fā)現(xiàn),TaGAMyb-Ba等位基因型材料株高顯著高于TaGAMyb-Bb等位基因型材料,同樣在轉(zhuǎn)TaGAMyb-Ba-GFP和TaGAMyb-Bb-GFP基因型水稻的T2表型鑒定中發(fā)現(xiàn),平均株高為TaGAMyb-Ba-GFP大于TaGAMyb-Bb-GFP。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)基因水稻的第一、第二和第三莖節(jié)平均長度均為TaGAMyb-Ba-GFP小于TaGAMyb-Bb-GFP,第一、二、三莖節(jié)粗度均為TaGAMyb-Ba-GFP大于TaGAMyb-Bb-GFP(P=0.00),并且進(jìn)一步利用細(xì)胞組織學(xué)觀察驗(yàn)證了以上結(jié)果。證明84 bp的序列缺失形成的等位基因TaGAMyb-Ba類型材料不僅增高了水稻植株的高度,而且增加了莖稈的粗度。這一結(jié)果和前人研究的關(guān)于GAMYB基因具有促進(jìn)莖稈伸長的功能[13-15]這一結(jié)果是相符的,不同之處在于本研究是TaGAMyb-B第一含子中84 bp序列的缺失導(dǎo)致水稻莖稈的伸長和增粗,這一結(jié)果將對(duì)增加小麥生物產(chǎn)量、籽粒產(chǎn)量并且增加其莖稈的抗倒伏性具有非常重要的意義。

干旱、高鹽、激素處理等非生物脅迫都是影響植物生長發(fā)育和產(chǎn)量的重要因素。因此,研究應(yīng)答非生物脅迫的基因和培育抗逆性新品種,對(duì)于提高作物產(chǎn)量具有重要的意義。研究發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)錄因子在植物對(duì)非生物脅迫的應(yīng)答中起著重要的作用,而MYB轉(zhuǎn)錄因子作為植物最大的轉(zhuǎn)錄因子家族之一,在植物的生長發(fā)育、代謝、生物和非生物脅迫應(yīng)答中起著重要的調(diào)控作用[24,27]。本研究發(fā)現(xiàn),TaGAMyb-B廣泛表達(dá)于轉(zhuǎn)基因水稻不同的組織器官中,并且轉(zhuǎn)基因水稻第二節(jié)間中TaGAMyb-Bb表達(dá)量最高,同時(shí)其受到NaCl、甘露醇和GA等各種脅迫處理的影響,在各種脅迫處理下均為TaGAMyb-Bb-GFP大于TaGAMyb-Ba-GFP,同時(shí)在各種非生物脅迫處理試驗(yàn)中,TaGAMyb-B的轉(zhuǎn)錄本表達(dá)變化趨勢表現(xiàn)不同。以上結(jié)果表明,TaGAMyb-B基因84 bp的序列差異引起該基因的轉(zhuǎn)錄本表達(dá)量的變化,也引起了應(yīng)對(duì)不同非生物脅迫應(yīng)答時(shí)調(diào)控能力的改變。