孔一晗，董亞，常柏

（1.天津醫(yī)科大學(xué)研究生院，天津 300070；2.天津醫(yī)科大學(xué)朱憲彝紀(jì)念醫(yī)院，天津市內(nèi)分泌研究所國(guó)家衛(wèi)健委激素與發(fā)育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津市代謝性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300134）

糖尿病心肌?。╠iabetic cardiomyopathy，DCM）是在患有糖尿病的人群中，排除了缺血性心臟病以及高血壓之后，仍存在明顯心肌結(jié)構(gòu)及功能改變的特異性心臟病[1]。DCM 作為一種糖尿病常見(jiàn)并發(fā)癥，其病因、發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜。臨床結(jié)果表現(xiàn)為充血性心力衰竭、心源性休克，甚至猝死[2]。在我國(guó)，由糖尿病所致的心力衰竭發(fā)病率從1993年的12.3%增長(zhǎng)到2007 的22.1%，糖尿病是除冠心病、高血壓之外導(dǎo)致心力衰竭最主要的原因[3]。銀杏葉為銀杏科植物銀杏的干燥葉[4]。有文獻(xiàn)報(bào)道銀杏葉治療DCM有著明確的療效，可以減輕氧化應(yīng)激損傷，抑制炎癥反應(yīng)等[5-8]，但詳細(xì)機(jī)制尚未明確，因此借助大數(shù)據(jù)分析，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)平臺(tái)探究銀杏葉治療DCM的靶點(diǎn)通路具有重要意義。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)融合生物學(xué)、藥理學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)等多學(xué)科知識(shí)，基于“疾病-基因-靶點(diǎn)-藥物”的構(gòu)建，進(jìn)行綜合網(wǎng)絡(luò)分析[9]。其與整體觀、辨證施治的傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)思想具有異曲同工之處[10]。本次研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分析方法，從分子水平探討了銀杏葉抗DCM 的潛在作用機(jī)制，為進(jìn)一步探究銀杏葉防治DCM 提供了方向和思路，進(jìn)而指導(dǎo)臨床實(shí)踐。

1 材料與方法

1.1 銀杏葉的作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)[11]TCMSP，以口服生物利用度OB 值≥30%、類藥性DL 值≥0.18 為篩選條件篩選出銀杏葉的活性化學(xué)成分，使用UniProt[12]數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)活性成分對(duì)應(yīng)的蛋白名稱進(jìn)行轉(zhuǎn)化，統(tǒng)一格式以便進(jìn)行下一步的操作。

1.2 DCM 疾病靶點(diǎn)的構(gòu)建 以“Diabetic cardiomyopathy”為關(guān)鍵詞，在人類基因數(shù)據(jù)庫(kù)GeneCards[13]，OMIM[14]、Disgenet 數(shù)據(jù)庫(kù)中，收集匯總DCM 的相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3 銀杏葉治療DCM 的潛在靶點(diǎn)預(yù)測(cè)及蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 利用Venny 2.1.0 繪制交集靶點(diǎn)，得到疾病和藥物的交叉靶點(diǎn)。將共同靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 平臺(tái)[15]，物種選項(xiàng)設(shè)定為“Homosapiens”，并將靶點(diǎn)之間的最低聯(lián)系數(shù)值按系統(tǒng)默認(rèn)值0.400 設(shè)定[16]，構(gòu)建銀杏葉與DCM 交集靶點(diǎn)的互作網(wǎng)絡(luò)。把PPI 網(wǎng)絡(luò)文件導(dǎo)入Cytoscape 軟件[17]中，進(jìn)行可視化分析。拓?fù)鋵W(xué)分析插件NetworkAnalyzer 對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行重要性檢測(cè)，通過(guò)度值（DC）、介數(shù)中心值（BC）和緊湊度（CC）對(duì)相關(guān)節(jié)點(diǎn)的重要性進(jìn)行評(píng)價(jià)，以大于各個(gè)值的中位數(shù)為條件篩選得到關(guān)鍵目標(biāo)基因。度值代表有多少邊與節(jié)點(diǎn)相連，介數(shù)中心性表示互作圖中某節(jié)點(diǎn)上的最短路徑通過(guò)此節(jié)點(diǎn)的整個(gè)路徑數(shù)量的比例，緊密中心性也稱接近中心性，即一個(gè)節(jié)點(diǎn)在整個(gè)結(jié)構(gòu)中所處的位置[18]。節(jié)點(diǎn)對(duì)應(yīng)的以上參數(shù)值越大，則代表該節(jié)點(diǎn)在整個(gè)網(wǎng)絡(luò)中起到的作用越大。

1.4 “核心靶點(diǎn)-關(guān)鍵化合物”的構(gòu)建 利用Cytoscape 軟件，將篩選出的交集靶點(diǎn)中的核心靶點(diǎn)與其對(duì)應(yīng)的化合物進(jìn)行作圖，構(gòu)建化合物-靶點(diǎn)相互作用圖。

1.5 GO 富集分析和京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）富集分析 將銀杏葉與DCM 的交集靶點(diǎn)導(dǎo)進(jìn)DAVID（生物學(xué)信息注釋）數(shù)據(jù)庫(kù)[19]，設(shè)置物種為“Home Sapiens”，選定生物過(guò)程（BP）、細(xì)胞成分（CC）、分子功能（MF）進(jìn)行銀杏葉干預(yù)DCM 靶點(diǎn)的GO 富集分析；選中KEGG 進(jìn)行信號(hào)通路分析。以P＜0.05 為篩選條件，P 值越小，其統(tǒng)計(jì)學(xué)意義越大，將P 值進(jìn)行升序排列，篩選出差異顯著的GO 功能過(guò)程和可信的信號(hào)通路。應(yīng)用微生信軟件對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行可視化分析，并用條形圖和氣泡圖展示篩選結(jié)果。

1.6 構(gòu)建“疾病-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò) 將疾病名稱、篩選出來(lái)的疾病靶點(diǎn)以及KEGG 富集到的20 條關(guān)鍵通路進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，更加直觀的體現(xiàn)三者之間的相互作用關(guān)系。

1.7 分子對(duì)接驗(yàn)證 分析PPI 網(wǎng)絡(luò)中排名前3 的靶點(diǎn)，即銀杏葉作用于DCM 的關(guān)鍵核心靶點(diǎn)，并與其對(duì)應(yīng)的銀杏葉相關(guān)化合物進(jìn)行分子對(duì)接驗(yàn)證。利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)下載化合物的結(jié)構(gòu)，利用Chem 3D 20.0 軟件進(jìn)行3D 轉(zhuǎn)換并進(jìn)行能量?jī)?yōu)化。使用PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)將關(guān)鍵靶蛋白的結(jié)構(gòu)下載下來(lái)，去水、加氫處理之后以pdbqt 格式的文件保存。利用AutoDock Vina1.1.2 軟件[20]將關(guān)鍵化合物與3 個(gè)核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接分析。AutoDock Vina 運(yùn)算速度快、精準(zhǔn)性較強(qiáng)，已被廣泛應(yīng)用于分子蛋白的對(duì)接領(lǐng)域[21]。

2 結(jié)果

2.1 銀杏葉的作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 通過(guò)TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索得到銀杏葉活性成分307 種，通過(guò)口服生物利用度OB 值和類藥性DL 值篩選得到活性成分27種。采用Uniprot 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)將靶點(diǎn)統(tǒng)一規(guī)范為Gene Symbol，舍去7 個(gè)無(wú)相應(yīng)靶點(diǎn)的活性成分，并刪除重復(fù)靶點(diǎn)，最終獲得20 個(gè)藥物活性成分靶點(diǎn)，具體成分見(jiàn)表1。

表1 銀杏葉主要化合物及相關(guān)OB、DL 值Tab 1 Main compounds of ginkgo biloba leaves and their OB and DL values

2.2 DCM 疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)的構(gòu)建 以“Diabetic cardiomyopathy”為關(guān)鍵詞，在GeneCards、OMIM、Disgenet 數(shù)據(jù)庫(kù)全面檢索，共獲取5 496 個(gè)靶點(diǎn)，GeneCards 中4 799 個(gè)靶點(diǎn)，OMIM 中477 個(gè)，Disgenet 中220 個(gè)。在GeneCards 中設(shè)定Relevance score≥10 的靶點(diǎn)為DCM 的重要靶點(diǎn)，結(jié)合OMIM、Disgenet 數(shù)據(jù)庫(kù)加以補(bǔ)充，并刪除重復(fù)靶點(diǎn)，最后獲取到1 181 條靶點(diǎn)信息。

2.3 銀杏葉干預(yù)DCM 的靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 將銀杏葉的相關(guān)靶點(diǎn)及DCM 的主要靶點(diǎn)導(dǎo)進(jìn)Venny 軟件，兩者取交集，可見(jiàn)其共同靶點(diǎn)有91 個(gè)，見(jiàn)圖1。

圖1 銀杏葉-DCM 靶點(diǎn)交集Fig 1 Ginkgo leaf-DCM target intersection

2.4 PPI 網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建分析 為獲取蛋白質(zhì)間的相互作用關(guān)系，將藥物疾病的91 個(gè)交集靶點(diǎn)基因?qū)隨TRING 數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建互作網(wǎng)絡(luò)，將與其他靶點(diǎn)無(wú)鏈接的靶點(diǎn)隱藏后，共有90 個(gè)節(jié)點(diǎn)，1 645 條邊，邊的數(shù)量越多說(shuō)明其相互作用越強(qiáng)，見(jiàn)圖2。利用Cytoscape 軟件，制作蛋白基因互作網(wǎng)絡(luò)圖，如圖3 所示，通過(guò)節(jié)點(diǎn)的面積和顏色體現(xiàn)度值的大小，即面積越大、顏色越深，則代表度值越大。利用軟件中的Network Analyzer 插件對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)鋮?shù)分析，以節(jié)點(diǎn)度值、介數(shù)中心性以及緊密度對(duì)節(jié)點(diǎn)的重要性進(jìn)行分析，以大于中位數(shù)為條件篩選出了11 條核心靶點(diǎn)，包括絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（Akt）1、腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）等，其中度值最高的前3 個(gè)為Akt1、TNF、IL-6，推測(cè)可能在銀杏葉干預(yù)DCM 過(guò)程中起主要作用，見(jiàn)表2。

圖2 交集靶點(diǎn)PPI 網(wǎng)絡(luò)Fig 2 Intertarget PPI network

圖3 交集蛋白互作圖Fig 3 Intersection protein interaction diagram

表2 核心交集靶點(diǎn)Tab 2 Core intersection targets

2.5 “核心靶點(diǎn)-關(guān)鍵化合物”的構(gòu)建 將核心靶點(diǎn)以及對(duì)應(yīng)的化合物成分導(dǎo)入Cytoscape 進(jìn)行作圖，構(gòu)建化合物-靶點(diǎn)相互作用圖，如圖4。

圖4 中藥化合物-核心靶點(diǎn)相互作用圖Fig 4 Diagram of traditional Chinese medicine compound - core target interaction

2.6 銀杏葉作用于DCM 靶點(diǎn)的GO 富集分析 對(duì)91 個(gè)交集靶點(diǎn)進(jìn)行BP、CC 和MF 分析。分析得到BP 條目2 386 個(gè)，CC 條目133 個(gè)，MF 條目162 個(gè)。分別按P＜0.05 為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選并升序排列，取前20 條進(jìn)行可視化分析，三合一條形圖及氣泡圖分別如圖5～8 所示。結(jié)果顯示，銀杏葉干預(yù)DCM 的靶點(diǎn)主要富集在對(duì)含氧化合物的反應(yīng)，凋亡過(guò)程的調(diào)控，對(duì)內(nèi)源性刺激的反應(yīng)，細(xì)胞死亡以及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等生物過(guò)程；細(xì)胞組分主要包括膜微區(qū)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、胞外區(qū)、囊泡、膜筏、陷窩等；在分子功能上，涉及了受體結(jié)合、酶結(jié)合、細(xì)胞因子活性、磷酸酶結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、生長(zhǎng)因子受體結(jié)合、蛋白激酶結(jié)合等。

圖5 GO 分析BP CC MF 三合一柱狀圖Fig 5 GO analysis BP CC MF 3-in-1 histogram

圖6 GO-BP 氣泡圖Fig 6 GO-BP bubble diagram

圖7 GO-CC 氣泡圖Fig 7 GO-CC bubble diagram

圖8 GO-MF 氣泡圖Fig 8 GO-MF bubble diagram

2.7 銀杏葉對(duì)DCM 相關(guān)靶點(diǎn)KEGG 信號(hào)通路富集分析 使用DAVID 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行KEGG 信號(hào)通路分析，以P＜0.05 為條件篩選出152 條主要通路。對(duì)P值進(jìn)行升序排序，取前20 個(gè)代表性通路進(jìn)行可視化氣泡圖分析，見(jiàn)圖9，結(jié)果顯示，銀杏葉抗DCM 的通路主要集中在糖尿病并發(fā)癥中的AGEs-RAGE信號(hào)通路、脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、IL-17 信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路、HIF-1 信號(hào)通路以及癌癥相關(guān)通路等信號(hào)通路。

圖9 KEGG 信號(hào)通路氣泡圖Fig 9 Bubble diagram of KEGG signaling pathway

2.8 構(gòu)建“疾病-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò) 利用Cytoscape軟件將導(dǎo)入的疾病、疾病相關(guān)靶點(diǎn)、KEGG 信號(hào)通路進(jìn)行作圖，見(jiàn)圖10，其中紅色DCM 代表DCM，紫色代表信號(hào)通路，黃色表示靶點(diǎn)。

圖10 疾病-靶點(diǎn)通路互作圖Fig 10 Diagram of disease-target pathway interaction

2.9 分子對(duì)接驗(yàn)證 依據(jù)2.4 中篩選得到的度值前三的核心靶點(diǎn)Akt1、TNF、IL-6，利用Autodock對(duì)化合物與關(guān)鍵核心靶點(diǎn)進(jìn)行半柔性分子對(duì)接測(cè)試。相關(guān)證據(jù)表明，結(jié)合自由能低于0 表示受體和配體可自發(fā)結(jié)合，結(jié)合能越低則說(shuō)明二者的結(jié)合力越強(qiáng)，當(dāng)結(jié)合能＜-5.0 kcal/mol 時(shí)，結(jié)合能力較強(qiáng)[22]。如表3 所見(jiàn)，3 組對(duì)接的結(jié)合自由能皆＜-5.0 kcal/mol，chryseriol（金圣草黃素）與Akt1、TNF，stigmasterol（豆甾醇）與IL-6 均有較好的結(jié)合活性。對(duì)接可視化圖像如圖11～13 所示，圖11 中chryseriol 與Akt1的LEU-110、TRP-80 形成氫鍵，氫鍵的長(zhǎng)度分別為2.8?、3.0?，這些殘基可能是chryseriol 作用于Akt1的關(guān)鍵殘基；圖12 中chryseriol 與TNF 的PRO-100、GLU-116、ARG-98、PRO-113 形成氫鍵，氫鍵的長(zhǎng)度分別為2.7?、3.1?、3.1?、3.1?，這些殘基可能是chryseriol 作用于TNF 的關(guān)鍵殘基；圖13 中stigmasterol 與IL-6 的ASP-34 形成氫鍵，氫鍵的長(zhǎng)度為3.5?，這些殘基可能是stigmasterol 作用于IL-6 的關(guān)鍵殘基。

圖11 金圣草黃素與Akt1 分子對(duì)接圖Fig 11 Molecular docking diagram of chryseriol and Akt1

圖12 金圣草黃素與TNF 分子對(duì)接圖Fig 12 Molecular docking diagram of chryseriol and TNF

圖13 豆甾醇與IL-6 分子對(duì)接圖Fig 13 Molecular docking diagram of stigmasterol and IL-6

表3 分子對(duì)接結(jié)果Tab 3 Molecular docking results

李艷等[23]將桑白皮中的槲皮素與Akt1 的TRP-80 結(jié)構(gòu)進(jìn)行對(duì)接，通過(guò)苯環(huán)與底物的共軛結(jié)構(gòu)之間的π-π 相互作用，更好的結(jié)合到了Akt1 的活性中心，與本文中金圣草黃素與Akt1 相結(jié)合的位點(diǎn)一致，且結(jié)合自由能均在-5.0 kcal/mol 以下。另有實(shí)驗(yàn)表明，補(bǔ)陽(yáng)還五湯中的山奈酚與Akt1 的結(jié)合能為-7.8 kcal/mol[24]，丹蛭降糖膠囊中水蛭中的藏花酸與Akt1 的結(jié)合能與本文中金圣草黃素與Akt1 的結(jié)合能一致，均為-6.1 kcal/mol[25]，這表明Akt1 是糖尿病治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)，可與多種化合物較好的結(jié)合。彭澤等[26]在洋參御唐方中檢索出化合物成分豆甾醇，也將之與核心靶點(diǎn)IL-6 進(jìn)行對(duì)接，結(jié)合能為-8.5 kcal/mol。相關(guān)研究得出，豆甾醇與TNF 的結(jié)合能為-28.87 kJ/mol，換算后為－6．9 kcal/mol[27]。比本文中金圣草黃素與TNF 的結(jié)合能略小，說(shuō)明金圣草黃素與蛋白分子TNF 的結(jié)合更加緊密，猜測(cè)其藥物療效也更好。

3 討論

DCM 的發(fā)生與糖脂代謝紊亂、心臟胰島素信號(hào)受損、晚期糖基化終末產(chǎn)物積累、炎癥等病理過(guò)程緊密相關(guān)[28－29]。目前對(duì)于DCM 的治療主要以使用降糖藥、胰島素和促胰島素分泌劑、β 受體阻斷劑等傳統(tǒng)西藥為主，均存在一定的不良反應(yīng)并易產(chǎn)生藥物依賴性[30]?，F(xiàn)代實(shí)驗(yàn)表明，中藥單藥及復(fù)方治療DCM 有著較為顯著的療效，如柚皮苷可通過(guò)減輕心肌的氧化應(yīng)激水平，抑制細(xì)胞凋亡從而產(chǎn)生心肌保護(hù)作用[31]。銀杏葉具有活血化瘀、通絡(luò)止痛的功效，其有效成分主要包括內(nèi)酯類、黃酮類化合物[32]，常用于治療胸痹心痛、瘀血阻絡(luò)、高脂血癥等。

本研究通過(guò)構(gòu)建PPI 互作網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)行拓?fù)鋵W(xué)分析并篩選得到銀杏葉干預(yù)DCM 的核心作用靶點(diǎn)，分析結(jié)果表明，銀杏葉抗DCM 的作用機(jī)制與Akt1、TNF、IL6、VEGFA、TP53 等靶點(diǎn)密切相關(guān)。為進(jìn)一步明確化合物與核心靶點(diǎn)的結(jié)合能力，通過(guò)分子對(duì)接技術(shù)對(duì)排名前3 的靶點(diǎn)與其對(duì)應(yīng)的化合物金圣草黃素、豆甾醇進(jìn)行對(duì)接實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各組結(jié)合能均＜－5．0 kcal/mol，表明兩兩結(jié)合活性較好，結(jié)合力較強(qiáng)。Akt1 是Akt 家族的成員之一，可以調(diào)節(jié)代謝、生長(zhǎng)增殖、細(xì)胞存活及血管生成[33]。是糖尿病代謝紊亂經(jīng)典通路PI3K－Akt 中的成分之一。相關(guān)研究顯示，在脂肪細(xì)胞分化進(jìn)程中，強(qiáng)烈抑制Akt1 會(huì)影響脂肪轉(zhuǎn)錄程序的激活，從而造成脂肪的累積[34]。由此考慮糖尿病患者可能因心肌脂肪增加導(dǎo)致肌肉收縮能力下降，加重心肌病變，而銀杏葉的活性成分則通過(guò)上調(diào)Akt1 的表達(dá)改善心肌病變。白羽等[35]也通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了中藥干預(yù)的DCM 大鼠體內(nèi)p－Akt 含量顯著上升。炎癥是糖尿病發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制之一，此次分析得到的核心靶點(diǎn)中有3 個(gè)屬于炎性因子，TNF－α 由單核細(xì)胞及巨噬細(xì)胞分泌產(chǎn)生，可誘導(dǎo)細(xì)胞損傷，參與免疫反應(yīng)，研究表明，心肌炎癥可通過(guò)降低TNF－α、IL－6 的水平來(lái)抑制[36]。IL－6 在炎癥、損傷、免疫應(yīng)答中均擔(dān)任重要角色，高水平的IL－6 可減少胰島素釋放，胰島素分泌不足造成高血糖又反過(guò)來(lái)刺激胰島β 細(xì)胞產(chǎn)生較多IL－6[37]，如此惡性循環(huán)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）家族是血管新生的重要調(diào)節(jié)因子，其中VEGFA 最受關(guān)注[38]，是心肌病變的重要預(yù)測(cè)靶點(diǎn)。

KEGG 富集結(jié)果表明，銀杏葉治療DCM 的作用機(jī)制可能與糖尿病并發(fā)癥AGEs－RAGE 信號(hào)通路、脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、IL－17 信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路、HIF－1 信號(hào)通路等密切相關(guān)。Akt1 在17 條通路上富集，是核心靶點(diǎn)中富集通路最多的基因，同樣提示Akt1 是參與改善心肌病病變的關(guān)鍵因子之一。除此之外，TNF－α、IL－6、IL－1β 富集的通路也均在10 條以上。AGEs－RAGE 信號(hào)通路通過(guò)激活核轉(zhuǎn)錄因子－κB 產(chǎn)生促炎因子（IL－6、TNF、IL－1β 等）及黏附因子，引起慢性損傷，造成心肌病的加重。氧化應(yīng)激作為DCM 發(fā)生、發(fā)展的主要分子機(jī)制之一，是促成DCM 進(jìn)展的“引火線”[39]，IL－17 信號(hào)通路與炎癥密切相關(guān)，心肌病變也被證實(shí)由炎癥及氧化應(yīng)激介導(dǎo)形成，IL－6 等靶點(diǎn)也是通過(guò)此信號(hào)通路調(diào)節(jié)炎癥來(lái)干預(yù)DCM。TNF 信號(hào)通路可通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的途徑，破壞心肌纖維組織，造成糖尿病心肌纖維化病變，而銀杏葉的活性成分可通過(guò)抑制此通路的表達(dá)起到保護(hù)心肌組織的作用。另外也有研究報(bào)道，DCM 表現(xiàn)為細(xì)胞因子TNF－α 和TGF－β1 的表達(dá)增加[40]。與本研究結(jié)果一致。

當(dāng)前對(duì)于應(yīng)用銀杏葉單味藥干預(yù)DCM 的文獻(xiàn)報(bào)道較少，曹鵬飛等[6]通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)得出主要成分為黃酮類和萜內(nèi)酯類的銀杏葉提取物可調(diào)節(jié)血糖并改善心肌損傷，與本文中黃酮類化合物金圣草黃素作用于炎性因子的機(jī)制一致。另有研究發(fā)現(xiàn)，銀杏葉提取物可降低活性氧簇、乳酸脫氫酶等水平，減輕心肌損傷[41]。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中也驗(yàn)證了銀杏葉提取物通過(guò)絲裂原活化蛋白激酶/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白途徑能夠減少高糖誘導(dǎo)的H9C2 細(xì)胞凋亡[42]。王曉梅等[5]研究顯示，與對(duì)照組相比，銀杏葉提取物可有效降低DCM 患者VCAM－1、ICAM－1 濃度，改善血液循環(huán)及炎癥。本研究應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)，對(duì)銀杏葉干預(yù)DCM 的關(guān)鍵作用靶點(diǎn)進(jìn)行全方位的預(yù)測(cè)和分析，通過(guò)分析結(jié)果并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，發(fā)現(xiàn)銀杏葉可能通過(guò)Akt1、TNF、IL－6、VEGFA、TP53 等靶點(diǎn)，在IL－17 信號(hào)通路、TNF 信號(hào)通路、糖尿病并發(fā)癥中AGE－RAGE 信號(hào)通路等作用下干預(yù)DCM。并且分子對(duì)接顯示，與關(guān)鍵核心靶點(diǎn)對(duì)應(yīng)的化合物主要有金圣草黃素和豆甾醇，提示其主要是通過(guò)這兩種化合物作用于心肌組織，減輕炎癥和氧化應(yīng)激水平，抑制心肌細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮療效。本次研究基于線上數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行挖掘，具有一定的參考價(jià)值，但后期尚需通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)論的可靠性。