季寶成,楊瀾瑞,韓雨,白艷紅,許旭

1.鄭州輕工業(yè)大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院,河南 鄭州 450001;2.河南省冷鏈?zhǔn)称钒踩|(zhì)量安全控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河南 鄭州 450001;3.食品生產(chǎn)與安全河南省協(xié)同創(chuàng)新中心,河南 鄭州 450001

0 引言

動(dòng)物源性食品是人體各種營(yíng)養(yǎng)元素的重要來源,是日常飲食不可或缺的部分,主要包括肉類、蛋類、奶類及其制品等[1]。長(zhǎng)期以來,人們對(duì)動(dòng)物源性食品的需求不斷提高,對(duì)其安全性的關(guān)注度也隨之增加。獸藥可預(yù)防、治療動(dòng)物疾病并促進(jìn)其生長(zhǎng),在保障我國(guó)畜牧業(yè)持續(xù)高速發(fā)展方面發(fā)揮著重要作用[2-4]。但研究[5]表明,動(dòng)物源性食品是人體無意中攝入抗生素等獸藥殘留的主要來源,獸藥濫用導(dǎo)致的藥物殘留嚴(yán)重影響了動(dòng)物源性食品的安全。長(zhǎng)期攝入獸藥殘留超標(biāo)的動(dòng)物源性食品,不僅易對(duì)人體造成毒性作用、過敏和變態(tài)反應(yīng)、三致作用等直接危害,還會(huì)造成腸道菌群失衡、細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)等一系列不良反應(yīng)[6]。因此,我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部、國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)及國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局于2019年9月聯(lián)合發(fā)布《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》[7],對(duì)動(dòng)物源性食品中獸藥最大殘留限量做了嚴(yán)格、詳細(xì)的規(guī)定。然而,動(dòng)物源性食品中獸藥殘留水平低,種類多,待篩查樣本量大,因此發(fā)展快速、高靈敏度、高準(zhǔn)確度、高通量的獸藥多殘留分析方法對(duì)于保障動(dòng)物源性食品安全非常重要。

相較于電化學(xué)方法、酶聯(lián)免疫分析、熒光分析法等,液相色譜-質(zhì)譜(Liquid Chromatography-Mass Spectrometry,LC-MS)聯(lián)用技術(shù)具有分析速度快、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、篩查通量大等優(yōu)點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于動(dòng)物源性食品獸藥多殘留的監(jiān)測(cè)與安全控制工作[8-9]。但動(dòng)物源性食品種類多樣、基質(zhì)組成較復(fù)雜,易對(duì)LC-MS聯(lián)用電噴霧離子化過程中形成的待測(cè)分子信號(hào)造成干擾,影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏度。因此,需要采用基質(zhì)凈化技術(shù)對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行適宜的基質(zhì)凈化前處理,減弱和消除基質(zhì)效應(yīng)。本文擬對(duì)LC-MS聯(lián)用技術(shù)用于檢測(cè)獸藥多殘留時(shí)待測(cè)樣品前處理的基質(zhì)凈化技術(shù)及該技術(shù)應(yīng)用于不同種類動(dòng)物源性食品獸藥多殘留檢測(cè)的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述,以期為L(zhǎng)C-MS聯(lián)用技術(shù)在食品質(zhì)量與安全控制領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用提供參考。

1 動(dòng)物源性食品基質(zhì)凈化技術(shù)

基質(zhì)凈化技術(shù)是最基本的基質(zhì)效應(yīng)消除技術(shù),通過對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行一定的物理、化學(xué)方法處理,將待測(cè)組分與干擾基質(zhì)分離,從而達(dá)到樣品凈化的目的。目前,已報(bào)道的應(yīng)用于動(dòng)物源性食品的基質(zhì)凈化技術(shù)主要包括液-液萃取(Liquid-Liquid Extraction,LLE)技術(shù)、分散液-液微萃取(Dispersive Liquid-Liquid Microextraction,DLLME)技術(shù)、固相萃取(Solid-Phase Extraction,SPE)技術(shù)、固相微萃取(Solid-Phase Microextraction,SPME)技術(shù)、分散固相萃取(Dispersive Solid Phase Extraction,DSPE)技術(shù)、磁性固相萃取(Magnetic-Solid Phase Extraction,M-SPE)技術(shù)等[4,6]。

1.1 LLE技術(shù)

LLE技術(shù)通過向樣品溶液中加入與其互不相溶的溶劑,利用待測(cè)組分與干擾基質(zhì)在溶劑中溶解度的不同,達(dá)到分離和凈化的目的,已較廣泛地應(yīng)用于動(dòng)物源性食品的基質(zhì)凈化前處理[10]。H.N.Jung等[11]使用乙酸-乙腈溶液(V(乙酸)∶V(乙腈)=1∶99)作為提取液,采用乙腈飽和正己烷脫脂,結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)技術(shù)同時(shí)檢測(cè)鰻魚、比目魚和蝦中氯生太爾、氯硝柳胺、硝碘腈酚等12種驅(qū)蟲藥,發(fā)現(xiàn)該技術(shù)在5～50 μg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,基質(zhì)效應(yīng)適中(-99.47%～51.98%),回收率介于61.58%～119.37%之間(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差≤19.05%),檢出限和定量限分別為0.3～1.6 μg/kg和1.0～5.0 μg/kg,具有較好的準(zhǔn)確性和較高的靈敏度。雖然LLE技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件和儀器要求不高,簡(jiǎn)單易行,但該技術(shù)通常需要消耗大量的有機(jī)溶劑,基質(zhì)凈化能力和凈化選擇性均相對(duì)較弱,特別是基質(zhì)組成較復(fù)雜的動(dòng)物源性食品,其凈化前處理過程中需要反復(fù)進(jìn)行溶劑萃取,易造成環(huán)境污染及出現(xiàn)危害實(shí)驗(yàn)人員身體健康等問題。

1.2 DLLME技術(shù)

DLLME技術(shù)使用分散劑提升了萃取劑在水相中的分散度,增加了水相與萃取劑的接觸面積,可加速目標(biāo)化合物在樣品溶液與萃取劑之間的溶質(zhì)傳遞進(jìn)程[12]。L.Vera-Candioti等[13]分別使用250 μL二氯甲烷和1250 μL乙腈作為萃取劑和分散劑,用于萃取豬血中維布沙星、二氟沙星、恩諾沙星等9種喹諾酮類藥物。研究發(fā)現(xiàn),溶液pH環(huán)境能夠顯著影響喹諾酮類藥物分子的萃取效率,當(dāng)在500 μL豬血中添加40 μL濃度為0.2 mol/L的HCl溶液時(shí)(pH值為6.8),可獲得最佳的萃取效果。J.J.Gao等[14]使用新型1-丁基-3-甲基咪唑-3-萘甲酸鹽([C4MIM][NPA])和傳統(tǒng)1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽([C2MIM][BF4])這2種離子液體作為混合分散溶劑,開發(fā)了可用于牛奶和雞蛋中四環(huán)素類抗生素(TCs)殘留的DLLME檢測(cè)技術(shù)。研究發(fā)現(xiàn),[C4MIM][NPA]在水溶液中呈強(qiáng)酸性,既可起到pH調(diào)節(jié)劑的作用,還可提供非極性環(huán)境,進(jìn)而提高對(duì)TCs的回收率。作為一種新型的樣品前處理技術(shù),DLLME技術(shù)在樣品分離和富集方面具有操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)少、成本低、試劑消耗少、回收率和富集效率高等優(yōu)點(diǎn),且與后期檢測(cè)具有良好的相容性,近年來在動(dòng)物源性食品獸藥殘留檢測(cè)中呈現(xiàn)良好的應(yīng)用前景,但該技術(shù)的選擇性較差,且主要應(yīng)用于液態(tài)食品檢測(cè)中,適用范圍有限。

1.3 SPE技術(shù)

SPE技術(shù)主要基于待測(cè)組分和干擾基質(zhì)在固相萃取劑上作用力的不同,實(shí)現(xiàn)凈化的目的,具有凈化效果好、適用性廣、特異性強(qiáng)、分析結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)[15]。常用的固相萃取劑有硅膠、氧化鋁、十八烷基鍵合硅膠(C18)、環(huán)己基填料等,操作步驟包括平衡、加樣、凈化和洗脫4個(gè)部分,目前已成功應(yīng)用于各種動(dòng)物源性食品的基質(zhì)凈化。P.Y.Liu等[16]先分別使用甲酸-乙酸乙酯溶液(V(甲酸)∶V(乙酸乙酯)=2∶98)和丙酮對(duì)豬肉中的磺胺類藥物進(jìn)行兩步萃取,然后采用Oasis MCX混合陽離子固相萃取柱對(duì)樣品進(jìn)行凈化,最后結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)技術(shù)檢測(cè)豬肉中11種常見磺胺類藥物。研究發(fā)現(xiàn),待測(cè)藥物在20～400 μg/kg范圍內(nèi)均表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系,檢出限和定量限分別為0.1～1.0 μg/kg和0.2～3.0 μg/kg,且在50 μg/kg、100 μg/kg和150 μg/kg加標(biāo)水平下,其回收率均處于79.3%～105.5%之間。SPE技術(shù)在動(dòng)物源性食品前處理領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛,能夠快速、簡(jiǎn)便、高效地去除各類食品中的干擾基質(zhì),達(dá)到分離和富集待測(cè)組分的目的,可有效解決傳統(tǒng)LLE技術(shù)所需樣品量大、易乳化、提取體積不準(zhǔn)確等問題[17]。此外,SPE技術(shù)已實(shí)現(xiàn)了操作自動(dòng)化,越來越廣泛地應(yīng)用于大批量食品安全篩查分析工作中。

1.4 SPME技術(shù)

SPME技術(shù)利用待測(cè)物在基質(zhì)與萃取相之間的非均相平衡,使待測(cè)組分?jǐn)U散吸附到石英纖維表面的固定相涂層上,待吸附平衡后,再與色譜進(jìn)樣裝置聯(lián)用,或解吸后再進(jìn)樣,集萃取、富集和解析于一體,具有高效、便捷和高通量的優(yōu)點(diǎn),在動(dòng)物源性食品基質(zhì)凈化領(lǐng)域應(yīng)用廣泛[18]。A.Khaled等[19]開發(fā)了一種SPME全自動(dòng)高通量檢測(cè)技術(shù),用于檢測(cè)雞肉和牛肉組織中驅(qū)蟲劑、鎮(zhèn)靜劑、喹諾酮類、興奮劑等100余種獸藥。與LLE技術(shù)和QuEChERS(Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, Safe)技術(shù)相比,SPME技術(shù)凈化效果較好,僅2種獸藥呈現(xiàn)顯著的基質(zhì)效應(yīng),而使用LLE技術(shù)和QuEChERS技術(shù)分別有42%和30%的獸藥呈現(xiàn)顯著的基質(zhì)效應(yīng)。C.Y.Peng等[20]通過使用管內(nèi)固相微萃取(in-tube SPME)技術(shù)富集豬肉中的萊克多巴胺,發(fā)現(xiàn)該技術(shù)對(duì)萊克多巴胺具有良好的選擇性,可作為食品中痕量萊克多巴胺的檢測(cè)方法。微萃取涂層部分是SPME技術(shù)的核心組成,其吸附性能、薄厚程度、耐溶劑性能、熱穩(wěn)定性能等都是直接影響獸藥分子萃取過程選擇性及靈敏度的重要因素。加強(qiáng)對(duì)SPME涂層材料的研究,是實(shí)現(xiàn)目標(biāo)分析物高倍富集、促進(jìn)SPME技術(shù)發(fā)展的重要途徑。

1.5 DSPE技術(shù)

DSPE技術(shù)可靈活地選用不同種類和配比的凈化材料,將其分散于樣品提取液中,通過選擇性吸附干擾基質(zhì)且不影響目標(biāo)物質(zhì),從而達(dá)到凈化的目的[21]。M.Nemati等[22]開發(fā)了一種基于深度共晶溶劑的新型懸浮DSPE技術(shù),并成功用于檢測(cè)巴氏殺菌和未經(jīng)巴氏殺菌牛奶樣品中四環(huán)素類獸藥的殘留。研究發(fā)現(xiàn),回收率為80%～91%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差≤9.8%,有較低的檢出限((0.1～0.3 μg/kg)和定量限(0.6～1.0 μg/kg)。此外,作為一種典型的DSPE技術(shù),QuEChERS技術(shù)利用傳統(tǒng)的LLE技術(shù)提取目標(biāo)物后再進(jìn)行鹽析,隨后利用吸附劑填料與干擾基質(zhì)的相互作用以達(dá)到除雜凈化的目的,具有操作簡(jiǎn)單、回收率高、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)[23]。與SPE技術(shù)相比,QuEChERS技術(shù)的吸附劑可直接添加到溶液中,不僅省去了萃取柱填裝、平衡等過程,還增大了干擾基質(zhì)與吸附劑之間的接觸面積。目前,用于QuEChERS技術(shù)的凈化材料主要包括N-丙基乙二胺鍵合硅膠(PSA)、C18、石墨化炭黑(GCB)等,可用于去除基質(zhì)中的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、色素等雜質(zhì),但總體基質(zhì)凈化效果適中。若將QuEChERS技術(shù)與其他凈化或萃取技術(shù)相結(jié)合,盡管會(huì)增加操作的復(fù)雜性,但在一定程度上能提高其選擇性、靈敏度及對(duì)復(fù)雜樣品的基質(zhì)凈化能力。

1.6 M-SPE技術(shù)

M-SPE技術(shù)是以磁性或可磁化材料作為吸附基底的一種萃取技術(shù)[24]。磁性吸附劑被直接分散到樣品溶液中用于萃取目標(biāo)物質(zhì),隨后在外部磁場(chǎng)的作用下實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物與干擾基質(zhì)的分離。與SPE技術(shù)相比,M-SPE技術(shù)操作簡(jiǎn)便、重現(xiàn)性好,不需要繁瑣的活化、上樣、除雜、洗脫等流程,且無萃取柱堵塞之虞,具有良好的應(yīng)用前景[25]。H.Wang等[26]利用IRMOF-3包覆SiO2/Fe3O4合成磁性固相萃取劑,結(jié)合UPLC-MS/MS技術(shù)成功應(yīng)用于河水、養(yǎng)殖水和魚肉中10種喹諾酮類藥物的檢測(cè)。研究發(fā)現(xiàn),該方法具有較低的檢出限(0.005～0.010 μg/kg)和定量限(0.100～0.200 μg/kg),加標(biāo)回收率均在80.8%～112.0%之間,且具有較高的靈敏度和較好的準(zhǔn)確性,適用于食品和環(huán)境樣品中痕量喹諾酮類藥物的檢測(cè)。M-SPE技術(shù)可避免使用大量有機(jī)溶劑,減少樣品處理過程對(duì)環(huán)境的污染及對(duì)分析人員的傷害,但其萃取效果也會(huì)受到吸附劑種類、萃取時(shí)間長(zhǎng)短、pH值等因素的影響。因此,開發(fā)萃取效果好、適用范圍廣的吸附劑并實(shí)現(xiàn)其自動(dòng)化、高通量是M-SPE技術(shù)未來發(fā)展的重要方向。

2 LC-MS聯(lián)用技術(shù)在動(dòng)物源性食品獸藥多殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

2.1 肉類及其制品中獸藥多殘留檢測(cè)

在畜禽養(yǎng)殖過程中,獸藥濫用現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生,畜禽肉獸藥殘留問題不容忽視。L.M.Zhao等[27]利用LC-MS聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)豬肌肉、牛肌肉、牛肝、牛腎和雞肝中的獸藥殘留,方法學(xué)考查表明,90%以上的獸藥回收率在60%～120%之間,且具有良好的重現(xiàn)性(相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差<20%)。郭添榮等[28]利用Oasis?PRiME HLB 固相萃取柱與超高效液相色譜-四級(jí)桿/靜電場(chǎng)軌道阱高分辨質(zhì)譜(UPLC-Q-Orbitrap HRMS)聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)豬肝、牛肝、羊肝、雞肝、鴨肝、鵝肝等動(dòng)物肝臟中的45種獸藥殘留,該方法在1～2000 μg/L范圍內(nèi),所檢測(cè)獸藥均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2均大于0.996,樣品前處理過程簡(jiǎn)單、篩查通量高、結(jié)果準(zhǔn)確。以上研究均表明,LC-MS聯(lián)用技術(shù)在畜禽動(dòng)物肌肉組織及其內(nèi)臟獸藥殘留分析中具有良好的適用性。

此外,LC-MS聯(lián)用技術(shù)還可用于檢測(cè)水產(chǎn)品中的多種獸藥殘留[29-31]。H.Park等[32]建立了一種可用于同時(shí)檢測(cè)不同畜禽產(chǎn)品(牛肉、豬肉等)及水產(chǎn)品(扁魚、鰻魚和蝦)中94種獸藥多殘留(包括酰胺醇類、咪唑類、頭孢菌素、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類、四環(huán)素類等)的定量方法,581個(gè)實(shí)際樣品的獸藥殘留分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),陽性樣本檢出率高達(dá)22.5%,其中檢出率最高的獸藥依次為氟甲喹、土霉素、恩諾沙星、甲氧芐啶、環(huán)丙沙星和甲苯咪唑。Q.T.Dinh等[31]采用QuEChERS技術(shù)與UPLC-MS/MS技術(shù)相結(jié)合的方法對(duì)鱈魚、三文魚、比目魚、羅非魚、鱒魚、白蝦和巨型虎蝦中多種獸藥殘留(包括磺胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、林可酰胺類藥物等)進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,38%的受試樣本至少有1種獸藥或其代謝物被檢出,其中孔雀石綠的檢出率最高(13%)。此外,四環(huán)素、差向土霉素、土霉素、甲硝唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲惡唑和甲氧芐啶的最大殘留量分別為36 μg/kg、18 μg/kg、13 μg/kg、13 μg/kg、4.8 μg/kg、4.2 μg/kg和0.59 μg/kg。由以上報(bào)道可知,該方法在多種海鮮微量獸藥殘留分析中具有較高的應(yīng)用潛力。

雖然人類對(duì)于動(dòng)物蛋白的需求主要來源于馴養(yǎng)動(dòng)物(牛、羊、豬、家禽)和水產(chǎn)品,但隨著可食用野生動(dòng)物消費(fèi)市場(chǎng)擴(kuò)大而衍生的野生動(dòng)物獸藥殘留安全問題也備受關(guān)注[33]。C.R.Casey等[33]采用乙腈-水溶液(V(乙腈)∶V(水)=8∶2)提取樣品,經(jīng)DSPE技術(shù)凈化后結(jié)合UPLC-MS/MS技術(shù)建立了野牛、鹿、麋鹿、兔子等野生動(dòng)物中112種獸藥殘留分析方法,為野生動(dòng)物食品的獸藥安全控制奠定了基礎(chǔ)。

肉制品是以畜禽肉為主要原料,經(jīng)調(diào)味制作的熟肉制成品或半成品,如香腸、火腿、培根、醬鹵肉、燒烤肉等。雖然肉品加工過程可能會(huì)使獸藥部分降解或轉(zhuǎn)化,但肉制品中潛在的獸藥殘留問題一直受到業(yè)界關(guān)注[34-35]。張飛等[34]通過乙腈-水溶液(V(乙腈)∶V(水)=8∶2)提取結(jié)合PRiME HLB固相萃取柱凈化,建立了鹵肉中金剛烷胺、磺胺類、喹諾酮類、氯霉素類等36種獸藥殘留的UPLC-MS/MS檢測(cè)方法。結(jié)果表明,36種獸藥在0.5～20.0 ng/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(R2>0.999),檢出限和定量限分別為0.10 μg/kg和0.20 μg/kg,在高中低3個(gè)不同加標(biāo)水平(0.5 μg/kg、1.0 μg/kg和5.0 μg/kg)的回收率為70.8%～106.9%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(n=6)≤5.3%。該方法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確性高、回收效果和重現(xiàn)性好,可同時(shí)對(duì)鹵肉中的36種獸藥殘留進(jìn)行檢測(cè)。S.J.Lehotay等[35]采用UPLC-MS/MS技術(shù)結(jié)合基質(zhì)匹配曲線方法對(duì)熱狗、鯰魚、嫩雞肉、油炸培根和香腸中的186種獸藥殘留進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)在10 μg/kg、33 μg/kg和100 μg/kg加標(biāo)水平下,不同肉制品中83.8%～94.6%的獸藥回收率均處于70%～120%之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差<25%,可滿足魚類和即食肉基質(zhì)中獸藥多殘留的常規(guī)監(jiān)測(cè)。

鑒于肉類及其制品基質(zhì)的復(fù)雜多樣性和獸藥分子理化性質(zhì)的差異性,提取過程多采用酸化乙腈或含水乙腈溶液,以實(shí)現(xiàn)對(duì)不同獸藥多殘留的同時(shí)萃取。但同時(shí)建立數(shù)十種乃至上百種獸藥多殘留的凈化方法仍較困難。SPE技術(shù)凈化效果較好、基質(zhì)效應(yīng)低,但部分獸藥殘留與固相萃取材料間的吸附作用導(dǎo)致其回收率較低。相比之下,DSPE技術(shù)的獸藥殘留兼容量高,可視為一種獸藥多殘留凈化的理想方法,但其基質(zhì)凈化能力仍有待進(jìn)一步提升。就現(xiàn)階段基質(zhì)凈化技術(shù)發(fā)展而言,獸藥分析通量與基質(zhì)凈化效率尚屬一對(duì)難以調(diào)和的矛盾體,未來可在定性篩查情況下,對(duì)部分檢出率高及安全風(fēng)險(xiǎn)高的獸藥殘留進(jìn)行定量方法的研究,以建立專屬性強(qiáng)并能準(zhǔn)確定量的方法,實(shí)現(xiàn)對(duì)肉類及其制品中獸藥殘留的全面監(jiān)管及安全風(fēng)險(xiǎn)的控制。

2.2 蛋類及其制品中獸藥多殘留檢測(cè)

在產(chǎn)蛋雞飼養(yǎng)過程中,獸藥濫用導(dǎo)致的雞蛋獸藥殘留問題時(shí)有發(fā)生。研究[36]表明,將QuEChERS技術(shù)與UPLC-MS/MS技術(shù)相結(jié)合檢測(cè)雞蛋中獸藥殘留,具有簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、低成本等優(yōu)點(diǎn)。X.Xu等[37]通過制備硅烷化三聚氰胺海綿作為凈化材料,結(jié)合UPLC-MS/MS技術(shù)實(shí)現(xiàn)了雞蛋中多種獸藥殘留的檢測(cè),該方法檢出限低(0.1～3.8 μg/kg),在2～500 μg/kg范圍內(nèi)線性良好(R2≥0.999),適用于雞蛋中獸藥殘留的高靈敏度檢測(cè)。此外,C.F.Wang等[38]基于LC-MS聯(lián)用技術(shù)成功開發(fā)了雞蛋中磺胺類、喹諾酮類、大環(huán)內(nèi)酯類、β-內(nèi)酰胺類等7大類獸藥殘留的檢測(cè)方法,獸藥篩查通量進(jìn)一步提升。

此外,張珊等[39]利用QuEChERS技術(shù)與超高效液相色譜-電噴霧-串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜(UPLC-ESI-MS/MS)技術(shù)相結(jié)合的方法檢測(cè)鴨蛋中的大環(huán)內(nèi)酯類(紅霉素、替米考星、吉他霉素和泰樂霉素)和喹諾酮類(諾氟沙星、環(huán)丙沙星、洛美沙星和恩諾沙星)獸藥殘留。研究發(fā)現(xiàn),所檢測(cè)獸藥在1～100 μg/kg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2>0.99),檢出限為0.010～0.174 μg/kg,定量限為0.034～0.576 μg/kg,在低、中、高3個(gè)加標(biāo)水平(5 μg/kg、50 μg/kg和100 μg/kg)下的回收率均大于70%,即該方法具有較高的靈敏度和較好的準(zhǔn)確性。張培楊[40]使用乙腈和OasisR MCX×3cc(60 mg)固相萃取小柱對(duì)樣品進(jìn)行提取和凈化,并結(jié)合HPLC-MS/MS技術(shù)對(duì)不同禽蛋(雞蛋、鴨蛋、鵝蛋)中的左旋咪唑、甲苯咪唑、羥基甲苯咪唑和氨基甲苯咪唑進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)這4種獸藥在禽蛋中的平均回收率為85.98%～97.38%,檢測(cè)限為0.03～0.33 μg/kg。

皮蛋、鹵蛋、咸蛋、蛋黃粉等均為消費(fèi)者喜愛的蛋制品。M.H.Petrarca等[41]通過QuEChERS技術(shù)與親水作用液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(HILIC-QToF-MS)技術(shù)相結(jié)合的方法測(cè)定嬰幼兒蛋制品中的12種磺胺類獸藥(磺胺噻唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基胍等)殘留,發(fā)現(xiàn)該方法靈敏度高,可在較低水平(10 μg/kg)下實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋制品中磺胺類獸藥殘留的高靈敏檢測(cè)。

由于產(chǎn)蛋期諸多獸藥被禁用,故對(duì)禽蛋中獸藥多殘留分析方法的靈敏度要求較高。相較于其他分析技術(shù),LC-MS/MS技術(shù)因具有高靈敏度和高選擇性,在禽蛋獸藥殘留安全檢測(cè)方面發(fā)揮著巨大作用,能夠同時(shí)對(duì)禽蛋中多種潛在獸藥殘留進(jìn)行定性定量分析,且大部分獸藥殘留檢出限低至微克水平。相較于肉類及其制品,蛋類及其制品的基質(zhì)干擾相對(duì)較弱,基于改良吸附劑的新型QuEChERS方法結(jié)合LC-MS/MS技術(shù)在不同禽蛋前處理過程中的凈化效果良好,特別是在禽蛋多獸藥殘留同時(shí)分析中應(yīng)用較廣泛,已逐漸發(fā)展成為蛋類及其制品中獸藥多殘留監(jiān)控的常用分析方法。

2.3 奶類及其制品中獸藥多殘留檢測(cè)

獸藥濫用可能導(dǎo)致牛奶中獸藥殘留并對(duì)消費(fèi)者健康造成危害。B.C.Ji等[42]首次采用彈性多孔三聚氰胺海綿作為基質(zhì)吸附劑,并結(jié)合UPLC-MS/MS技術(shù)實(shí)現(xiàn)了牛奶中多種獸藥殘留的檢測(cè),該方法所檢測(cè)獸藥的基質(zhì)效應(yīng)均為-20%～20%,檢出限和定量限分別為0.1～3.8 μg/kg和0.2～6.3 μg/kg,可用于快速檢測(cè)牛奶中的獸藥殘留。M.R.Jadhav等[43]將LC-MS/MS技術(shù)應(yīng)用于不同種類牛奶中78種獸藥殘留的定量分析,發(fā)現(xiàn)該方法適用于標(biāo)準(zhǔn)化牛奶、巴氏殺菌牛奶、調(diào)和牛奶和全脂奶油牛奶中獸藥殘留的分析。J.Li等[44]采用乙腈提取、正己烷脫脂并與UPLC-MS/MS技術(shù)相結(jié)合的方法檢測(cè)牛奶中β-內(nèi)酰胺類、喹諾酮類、β-激動(dòng)劑、苯酚、糖皮質(zhì)激素和硝基呋喃6類獸藥殘留,發(fā)現(xiàn)該方法日內(nèi)精密度(1.7%～11.1%)、日間精密度(2.5%～10.4%)均良好,平均回收率為65.9%～123.5%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差<10.8%,具有簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、可靠等優(yōu)點(diǎn)。

除牛奶外,羊奶、酸奶、奶酪等也備受人們喜愛,但其獸藥殘留問題仍不容忽視。高鵬飛等[45]對(duì)多種牛奶、羊奶中獸藥殘留檢測(cè)方法進(jìn)行對(duì)比,發(fā)現(xiàn)HPLC-MS/MS和UPLC-MS/MS技術(shù)適用范圍廣、結(jié)果準(zhǔn)確可靠且不需要衍生化反應(yīng),適用于超痕量目標(biāo)物的檢測(cè)分析。S.B.Ye等[46]利用QuEChERS技術(shù)與UPLC-MS/MS技術(shù)相結(jié)合的方法檢測(cè)羊奶中19種喹諾酮類藥物,發(fā)現(xiàn)這些藥物的回收率在73.4%～114.2%范圍內(nèi),定量限為5 μg/kg,且重復(fù)性好。黑真真等[47]利用PRIME固相萃取柱與液相色譜-串聯(lián)單四極桿質(zhì)譜技術(shù)相結(jié)合的方法檢測(cè)牛奶和酸奶中33種(咪唑類、β-受體激動(dòng)劑和大環(huán)內(nèi)酯類)獸藥殘留,發(fā)現(xiàn)該方法具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高、成本低等優(yōu)點(diǎn)。曹亞飛等[48]采用0.1 mol/L的Na2EDTA緩沖溶液和體積分?jǐn)?shù)為5%的醋酸乙腈作為提取溶劑,經(jīng)NaCl和無水Na2SO4鹽析及C18吸附劑凈化后,結(jié)合LC-MS/MS技術(shù)成功開發(fā)了奶酪中大環(huán)內(nèi)酯類、磺胺類、喹諾酮類和四環(huán)素類共50種獸藥殘留的檢測(cè)方法,該方法快速、簡(jiǎn)便,適用于奶酪中獸藥殘留的快速檢測(cè)和日常監(jiān)控。

奶類及其制品中蛋白質(zhì)、脂肪等含量偏高,而提取液中共存的干擾基質(zhì)會(huì)對(duì)獸藥殘留分析結(jié)果造成顯著影響,其中影響最大的是前處理中沉淀蛋白及除脂過程。LC-MS技術(shù)常與SPE、QuEChERS等技術(shù)相結(jié)合用于檢測(cè)奶類及其制品中的獸藥殘留。液態(tài)奶中獸藥殘留萃取多采用高比例乙腈溶液,但其較高的含水量會(huì)導(dǎo)致青霉素、四環(huán)素、喹諾酮類等極性獸藥殘留的回收率較低。此外,多肽類獸藥殘留易與蛋白質(zhì)結(jié)合,低pH值條件會(huì)破壞其相互作用從而提高回收率,而四環(huán)素類獸藥殘留在此條件下的降解風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增大。因此,實(shí)現(xiàn)奶類及其制品中多獸藥處理同時(shí)萃取依然存在一定的挑戰(zhàn)性,開發(fā)普適性強(qiáng)、萃取效率高的獸藥殘留提取方法非常重要。

2.4 其他動(dòng)物源性食品中獸藥多殘留檢測(cè)

除上述肉類、蛋類、奶類及其制品外,動(dòng)物源性食品還包括蜂蜜、蜂王漿、動(dòng)物血制品、阿膠等。陳瑞[49]利用QuEChERs技術(shù)與UPLC-MS/MS技術(shù)相結(jié)合的方法用于檢測(cè)豬血、鴨血、羊血、血豆腐等食品中磺胺類、喹諾酮類等39種獸藥殘留,檢出限和定量限分別為0.01～0.30 mg/kg和0.03～0.85 mg/kg,該方法具有方便、快速、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。張帥[50]利用甲酸-乙腈溶液(V(甲酸)∶V(乙腈)=0.5∶99.5)提取與Z-sep+凈化管處理相結(jié)合的方法檢測(cè)阿膠樣品中的獸藥殘留,并構(gòu)建了132種獸藥液相色譜高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù),可用于阿膠中獸藥多殘留的快速篩查。勵(lì)炯等[51]利用所建立的β2-受體激動(dòng)劑殘留分析方法檢測(cè)了20個(gè)批次的阿膠,其中3個(gè)批次阿膠中檢測(cè)出了鹽酸克倫特羅。研究[52-54]表明,QuEChERs技術(shù)與LC-MS/MS技術(shù)相結(jié)合的快速檢測(cè)方法已逐漸發(fā)展成為檢測(cè)蜂蜜和蜂王漿中獸藥殘留的主要手段。

不同動(dòng)物源性食品基質(zhì)組成差異較大,建立準(zhǔn)確、靈敏的動(dòng)物源性食品獸藥多殘留LC-MS聯(lián)用分析方法需要考慮的影響因素眾多,但主要涉及以下幾個(gè)環(huán)節(jié),如樣品預(yù)處理、獸藥殘留提取、基質(zhì)凈化、基質(zhì)匹配校正等。因此,利用LC-MS聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行動(dòng)物源性食品獸藥多殘留定量分析時(shí),需要綜合考慮獸藥與糖或蛋白質(zhì)等的結(jié)合作用、金屬離子螯合作用、鹽析作用、不同食品源干擾基質(zhì)組成、樣品凈化方法和定量校準(zhǔn)方法選擇等多因素,方能實(shí)現(xiàn)對(duì)動(dòng)物源性食品中獸藥多殘留的準(zhǔn)確、高靈敏分析。

3 總結(jié)與展望

本文綜述了利用LC-MS聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)動(dòng)物源性食品獸藥多殘留時(shí)需采用的主要基質(zhì)凈化技術(shù)研究進(jìn)展,以及LC-MS聯(lián)用技術(shù)在肉類、蛋類、奶類及其制品等不同動(dòng)物源性食品中的應(yīng)用現(xiàn)狀。LC-MS聯(lián)用技術(shù)具有的高靈敏度、高選擇性與高通量特征使其成為動(dòng)物源性食品獸藥多殘留檢測(cè)的良好確證技術(shù),但其關(guān)鍵在于開發(fā)獸藥殘留兼容性強(qiáng)、基質(zhì)凈化效果好的樣品前處理技術(shù)。建立動(dòng)物源性食品獸藥多殘留高通量前處理方法依然極具挑戰(zhàn)性,需要綜合考慮不同動(dòng)物源性食品基質(zhì)組成、基質(zhì)凈化方法特征、獸藥分子理化性質(zhì)等,且需兼顧樣品預(yù)處理、獸藥殘留提取、基質(zhì)凈化、定量校準(zhǔn)等過程。隨著獸藥檢測(cè)范圍的擴(kuò)大及檢測(cè)要求的提高,動(dòng)物源性食品獸藥殘留從單種類向多種類同步凈化轉(zhuǎn)變將是未來食品安全監(jiān)查技術(shù)的主流趨勢(shì)。此外,針對(duì)不同動(dòng)物源性食品基質(zhì)的差異性,如何發(fā)展不同動(dòng)物源基質(zhì)特異性高通量?jī)艋夹g(shù)將是未來LC-MS聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)動(dòng)物源性食品獸藥多殘留的重要研究方向。動(dòng)物源性食品獸藥殘留安全監(jiān)控工作繁重、任務(wù)艱巨,簡(jiǎn)化動(dòng)物源性樣品的前處理步驟,建立簡(jiǎn)便快速、自動(dòng)化程度高的檢測(cè)方法,提高檢測(cè)效率和應(yīng)用水平,也將成為未來食品獸藥殘留安全控制的必然趨勢(shì)和發(fā)展需求。