陳 成 陳樹松

腸易激綜合征（IBS）是一種常見的功能性腸病，以腹痛或腹部不適伴排便次數(shù)和糞便性狀改變?yōu)樘卣?，無器質(zhì)性病變，其發(fā)病率較高，以中青年居多，且多見于女性，其中以腹瀉型IBS（IBS-D）較為常見[1]。IBS 癥狀的反復(fù)發(fā)作，目前其發(fā)病機(jī)制尚未明確，近年來研究發(fā)現(xiàn)腸道微生態(tài)失衡和腸黏膜免疫激活是IBS（尤其是IBS-D）發(fā)病的重要因素[2-3]。探究免疫調(diào)節(jié)相關(guān)因子與患者的IBS-D癥狀及腸道菌群的關(guān)系，對于IBS-D 發(fā)病機(jī)制的研究和臨床用藥指導(dǎo)具有重要意義。血清學(xué)標(biāo)志物檢測具有取樣便捷、操作簡單、無創(chuàng)性、價(jià)格低廉等優(yōu)勢。既往研究發(fā)現(xiàn)，免疫調(diào)節(jié)相關(guān)因子IL-10、CC 趨化因子配體16（CCL16）在IBS 患者中表達(dá)異常，但兩者的的表達(dá)變化尚存在爭議[4-7]。本研究檢測了IBS-D 患者的血清IL-10、CCL16 水平，并分析了其與IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度及糞便菌群的相關(guān)性，以期為臨床診治IBS-D 提供參考。

1 研究對象與方法

1.1 研究對象

選擇2019 年1 月至2022 年12 月在來安家寧醫(yī)院就診的65 例IBS-D 患者設(shè)為IBS-D 組，另選擇67 名同期健康體檢者設(shè)為對照組。IBS-D 組患者的納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合IBS-D 羅馬Ⅳ診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，即松散（糊狀）糞便或水樣糞便≥25%，硬質(zhì)糞便或干球狀糞便＜25%；（2）年齡20～59 歲；（3）近2 個(gè)月內(nèi)未服用抗生素、益生菌等；（4）腹部超聲、結(jié)腸鏡等檢查無異常，排除器質(zhì)性疾?。唬?）臨床資料完整。對照組的納入標(biāo)準(zhǔn)為年齡20～59 歲，無腸道疾病，無自身免疫病，無感染病史，近2 個(gè)月內(nèi)未使用抗生素、益生菌等藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病，惡性腫瘤者；（2）有乙醇、藥物濫用史者；（3）智力精神障礙，不能配合研究者；（4）處于妊娠期、哺乳期或月經(jīng)期的女性；（5）有腹部手術(shù)史者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

1.2 血清IL-10、CCL16 水平檢測

所有受試者均于清晨抽取空腹靜脈血6 mL，離心分離血清，應(yīng)用ELISA 法檢測血清IL-10、CCL16 水平，檢測步驟參照IL-10 ELISA 試劑盒（購自南京森貝伽生物科技有限公司）、CCL16 ELISA試劑盒（購自上海西格生物科技有限公司）說明書進(jìn)行，用Infinite F50 酶標(biāo)儀（購自瑞士Tecan 公司）測定吸光度（OD）值，通過制作標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算血清IL-10、CCL16 水平。所有操作均由同一位檢驗(yàn)科醫(yī)生完成。

1.3 糞便菌群檢測

采集所有受試者的新鮮糞便，采用細(xì)菌三級鑒定法對糞便菌群（雙歧桿菌、乳桿菌、擬桿菌和腸桿菌）進(jìn)行鑒別，并計(jì)算每克糞便中的菌群數(shù)量。

1.4 IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度評估

采用Francis 等[9]的IBS 嚴(yán)重程度評分量表評估患者的IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度，該量表從腹痛發(fā)作次數(shù)、腹痛不適程度、當(dāng)天腹脹不適程度、腸道癥狀對生活的干擾程度、對排便情況的滿意度共5 個(gè)方面對IBS-D 癥狀進(jìn)行量化評價(jià)，每個(gè)方面均有5 個(gè)選項(xiàng)，程度從輕到重依次遞進(jìn)20 分，滿分為100 分。計(jì)算IBS 癥狀嚴(yán)重程度總評分（5 項(xiàng)評分之和），根據(jù)總評分將IBS-D 患者分為輕中度組和重度組（75～175 分為輕度；176～300 分為中度；＞300 分為重度）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 25 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料經(jīng)K-S檢驗(yàn)均符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson 或Spearman 相關(guān)性分析探究IBS-D 患者的血清IL-10、CCL16 水平與腸道菌群、IBS-D癥狀嚴(yán)重程度評分的相關(guān)性。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2 組的一般資料比較

2 組的性別、年齡、BMI 相比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 2 組的一般資料比較

2.2 2 組的血清IL-10、CCL16 水平比較

如表2 所示，IBS-D 組的血清IL-10、CCL16 水平均顯著高于對照組（P均＜0.05）。

表2 2 組的血清IL-10、CCL16 表達(dá)水平比較/pg·mL-1

2.3 2 組的糞便菌群數(shù)量比較

如表3 所示，與對照組相比，IBS-D 組的糞便中雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量均顯著減少（P均＜0.05），腸桿菌數(shù)量顯著增多（P＜0.05）。2 組的糞便中擬桿菌數(shù)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表3 2 組的糞便菌群數(shù)量比較/log CFU·g-1

2.4 IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度評分

IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度評分中，腹痛發(fā)作次數(shù)評分最高[（70.00±9.56）分]，其余依次為腸道癥狀對生活的干擾程度評分[（56.00±13.27）分]、對排便情況的滿意度評分[（52.00±12.31）分]、腹痛不適程度評分[（48.00±12.31）分]，當(dāng)天腹脹不適程度評分最低[（36.00±9.12）分]。IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度總評分為（262.00±41.25）分。

2.5 不同IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度患者的血清IL-10、CCL16 水平及糞便菌群數(shù)量比較

根據(jù)IBS 癥狀嚴(yán)重程度總評分將65 例IBS-D患者分為輕中度組（51 例，其中輕度5 例，中度46例）和重度組（14 例）。如表4 所示，與中輕度組相比，重度組的血清IL-10、CCL16 水平均升高（P均＜0.05），糞便中腸桿菌數(shù)量顯著增多（P＜0.05），雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量均顯著減少（P均＜0.05）。重度組與輕中度組的糞便中擬桿菌數(shù)量差異無統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表4 不同IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度患者的血清IL-10、CCL16 水平及糞便菌群數(shù)量比較

2.6 IBS-D 患者的血清IL-10、CCL16 水平與糞便菌群、IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度評分的相關(guān)性

Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，IBS-D 患者的血清IL-10 水平與血清CCL16 水平呈正相關(guān)（r＝0.390，P＝0.001），見圖1。Pearson 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清IL-10、CCL16 水平與雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量均呈負(fù)相關(guān)（P均＜0.05），與腸桿菌數(shù)量呈正相關(guān)（P＜0.05），與擬桿菌數(shù)量不相關(guān)（P＞0.05）；Spearman 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，血清IL-10、CCL16 水平與IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度各項(xiàng)評分及總評分均呈正相關(guān)（P均＜0.05）；見表5。

圖1 IBS-D 患者的血清IL-10 水平與血清CCL16 水平的相關(guān)性分析散點(diǎn)圖

表5 IBS-D 患者的血清IL-10、CCL16 水平與糞便菌群、IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度評分的相關(guān)性

3 討論

IBS 是一組根據(jù)癥狀進(jìn)行分類的臨床癥候群，發(fā)病機(jī)制尚不清楚，目前研究認(rèn)為其由炎性反應(yīng)、免疫、腸道菌群失調(diào)及腦-腸軸異常等多種機(jī)制共同作用導(dǎo)致，具有反復(fù)發(fā)作，遷延難愈的特點(diǎn)[10-11]。根據(jù)患者糞便的性狀，IBS 可分為便秘型IBS（IBS-C）、IBS-D、混合型IBS（IBS-M）和不確定型IBS（IBS-U）[12]，其中IBS-D 為較常見類型，嚴(yán)重影響著患者的生活質(zhì)量，其診斷和治療面臨諸多挑戰(zhàn)[13]。因此，積極尋找與IBS-D 發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的生物標(biāo)志物對于IBS-D 的臨床診治有重要的意義。

IL-10 是一種主要由Th2 細(xì)胞、B 細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞分泌的抑炎細(xì)胞因子，具有抑制抗體產(chǎn)生和促炎細(xì)胞因子釋放及活化等作用，研究表明其在胃腸道疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著調(diào)節(jié)作用[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，IBS-D 患者的血清IL-10水平顯著高于健康者，表明IL-10 在IBS-D 的發(fā)生中可能發(fā)揮了重要的調(diào)控作用，該結(jié)果與曾明曦等[4]的研究結(jié)果一致。然而，雍海江等[5]的研究結(jié)果顯示 IBS 組患者IL-10 水平明顯低于對照組，Abbas 等[6]的研究結(jié)果顯示IBS 組患者與對照組的血清IL-10 水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，上述研究結(jié)果均與本研究結(jié)果不符。造成研究結(jié)果差異的原因可能是當(dāng)IBS-D 患者處于炎性反應(yīng)活動期時(shí)，免疫系統(tǒng)被激活，TNF-α、IL-18 等促炎因子大量分泌，使得抑炎細(xì)胞因子IL-10 水平代償性升高；而當(dāng)IBS-D 患者處于炎性反應(yīng)緩解期時(shí)，促炎因子分泌減少，故IL-10 水平降低[15]。

本研究中，進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，重度IBS-D 患者的血清IL-10 水平顯著高于輕中度IBS-D 患者，且IBS-D 患者的血清IL-10 水平與IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度各項(xiàng)評分及總評分均呈正相關(guān)，表明血清IL-10水平與IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度密切相關(guān)。分析其原因可能是，重度IBS-D 患者體內(nèi)的炎性反應(yīng)及免疫應(yīng)答均較輕中度IBS-D 患者更強(qiáng)，活化的Th2 細(xì)胞、B 細(xì)胞等免疫細(xì)胞分泌更多的抑炎因子，但總體上重度IBS-D 患者體內(nèi)促炎因子占優(yōu)勢，故即使其血清IL-10 水平升高也不能有效緩解IBS-D 癥狀。

趨化因子CCL16 由肝臟、胸腺和脾臟的實(shí)質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，存在于人體血液中，其對單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞有趨化特性，參與肺炎等炎性疾病的發(fā)生、發(fā)展，是一種促炎趨化因子[16-17]。Del Valle-Pinero等[18]的研究發(fā)現(xiàn)，IBS 患者的CCL16 基因表達(dá)顯著升高。但Hayatbakhsh 等[7]的研究發(fā)現(xiàn)IBS 患者的血清CCL16 水平顯著降低，且IBS-D 患者的血清CCL16 水平顯著高于IBS-M 患者，血清CCL16可作為區(qū)分這2 種亞型的標(biāo)志物。本研究結(jié)果顯示，IBS-D 患者的血清CCL16 水平較健康者升高，且其與血清IL-10 水平及IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度評分均呈正相關(guān)，表明CCL16 可能與IL-10 共同參與了IBS-D 的發(fā)生、發(fā)展，兩者有潛力作為診斷IBS-D及評估IBS 癥狀嚴(yán)重程度的血清學(xué)標(biāo)志物。多項(xiàng)研究結(jié)果顯示，CCL16 作為促炎因子在炎性疾病中呈高表達(dá)[7,18]，該結(jié)果與本研究結(jié)果一致，推測IBS-D 發(fā)生、發(fā)展過程中機(jī)體免疫應(yīng)答被激活，IL-10 等抑炎因子水平升高的同時(shí)伴隨著CCL16 等促炎因子水平升高，兩者共同調(diào)控疾病的進(jìn)展。本研究結(jié)果與Hayatbakhsh 等[7]的研究結(jié)果存在差異的原因可能是研究對象的種族、地域及疾病階段存在差異。

研究表明IBS 患者體內(nèi)腸道菌群失調(diào)，IBS 的發(fā)生可能是由于腸道菌群失衡使腸道功能發(fā)生紊亂導(dǎo)致，且不同分型的IBS 患者的腸道菌群變化可能存在差異[2,19]。本研究中，IBS-D 組的糞便中雙歧桿菌、乳桿菌數(shù)量均顯著少于對照組，腸桿菌數(shù)量顯著多于對照組，但2 組的擬桿菌數(shù)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明IBS-D 患者存在腸道菌群失衡。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，雙歧桿菌、乳桿菌和腸桿菌數(shù)量在重度IBS-D 患者中的變化更為顯著，并且均與IBS-D 患者的血清IL-10、CCL16 水平顯著相關(guān)，提示雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌可能與IL-10、CCL16 共同參與了IBS-D 的發(fā)生、發(fā)展。既往研究認(rèn)為，腸道菌群不僅可通過自身的特殊結(jié)構(gòu)、代謝產(chǎn)物及腦-腸軸調(diào)節(jié)引發(fā)相關(guān)的腸道癥狀，而且可通過激活腸道免疫系統(tǒng)導(dǎo)致IBS 發(fā)生和發(fā)展[20-21]。

綜上所述，血清IL-10、CCL16 在IBS-D 患者中均呈高表達(dá)，兩者呈正相關(guān)，并且均與糞便菌群（雙歧桿菌、乳桿菌和腸桿菌）、IBS-D 癥狀嚴(yán)重程度顯著相關(guān)，檢測血清IL-10、CCL16 水平可能有助于診斷IBS-D 及評估病情嚴(yán)重程度，進(jìn)而指導(dǎo)臨床治療。本研究樣本量較小且為單中心研究，未動態(tài)監(jiān)測血清IL-10、CCL16 水平，這些可能使研究結(jié)果發(fā)生偏倚。IBS-D 的病因較多，發(fā)病機(jī)制較復(fù)雜，可能還存在其他影響血清IL-10、CCL16水平的因素，有待進(jìn)一步探究。僅研究糞便菌群可能無法全面反映腸道微生態(tài)的變化[22]，今后將進(jìn)一步探究血清IL-10、CCL16 水平與腸黏膜菌群的相關(guān)性，為其作為IBS-D 診斷的標(biāo)志物提供充分的證據(jù)。