陳鵬寧 陳冠希 李萍 陳昕煜 羅霖 顏啟璋 阮萍 于大海

與高危人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染相關的頭頸部鱗狀細胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)正在迅速增加[1]。主要發(fā)生在特定的口咽部位:扁桃體和舌根部。這種部位特異性提示存在HPV易感轉(zhuǎn)化區(qū),類似于導致HPV相關宮頸癌和肛門癌發(fā)生的鱗狀柱狀上皮交界區(qū)(squamou-columnar junction,SCJ),該區(qū)特異性的表達SCJ標志物,CK7及CK5[2-4]。此外,不局限于HPV感染,在胃食管交界處,亦有類似的SCJ區(qū),胃酸反流性食管炎引起的該區(qū)復層鱗狀上皮所致的柱狀上皮化生形成巴雷特食管(Barrett's oesophagus)。這種不同類型上皮之間的移行區(qū)(transformation zoom,TZ),目前公認是腫瘤前化生和癌發(fā)生的熱點[5]。近年研究表明,宮頸,肛門以及巴雷特食管移行區(qū)上皮基底細胞能同時表達柱狀上皮及鱗狀上皮的標志物,具有著向鱗狀以及柱狀上皮化生能力[2,4-5]。

人類口咽的構成主要是腭扁桃體、舌根(以界溝為界的后1/3舌體組織)、軟腭[6]。舌、腭扁桃體的組織學結(jié)構均為淋巴上皮性組織團塊,上皮向固有層內(nèi)陷入形成隱窩,形成網(wǎng)狀上皮區(qū),被認為是HPV易感區(qū)[7]。隱窩上皮有與宮頸相似的免疫表型(高表達SCJ標志物CK7、AGR2等)[8],Woods等[9]發(fā)現(xiàn)在口咽癌中CK7的表達與HPV感染相關,Regauer等[10]的研究發(fā)現(xiàn)舌根中存在來源于小涎腺導管上皮的CK7陽性鱗癌。這提示了舌根小涎腺或有與扁桃體和宮頸類似,易于被HPV感染發(fā)生惡性轉(zhuǎn)換的區(qū)域。

小鼠口咽部(包括舌根)缺乏類似人類的扁桃體以及其它口咽部淋巴組織聚集的Waldeyer氏環(huán),也就缺乏相應的隱窩上皮易感區(qū)[11]。但本課題組及其他作者的研究發(fā)現(xiàn),小鼠的口腔癌模型無論是4-NQO化學誘導還是HPV轉(zhuǎn)基因小鼠自發(fā)產(chǎn)生,甚至是小鼠乳頭狀瘤病毒在舌前份感染而誘發(fā)的癌癥,均多發(fā)生于舌根部,且均為中低分化鱗癌。與臨床上HPV相關口咽癌類似,前期研究的4-NQO模型還有極高的頜下淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率[12-15]。而且,在小鼠誘導4-NQO30周時觀察到了Von Ebner's腺開口處的鱗狀化生,類似于SCJ轉(zhuǎn)化區(qū)(結(jié)果未發(fā)表)。

人輪廓乳頭下方分布Von Ebner's腺(味覺腺體,又稱舌腺),為純漿液性涎腺,它們通過導管開口于輪廓乳頭溝底,分泌液體,輔助味覺[16]。本研究假設在人輪廓乳頭的Von Ebner's腺體區(qū)也有類似宮頸和肛門的SCJ區(qū),在HPV等刺激下也可形成復層上皮(multilayered epithelial,MLE)樣結(jié)構,從而導致癌變發(fā)生。本研究對人舌根輪廓乳頭標本的組織學觀察,發(fā)現(xiàn)位于該區(qū)的SCJ,以及類似于SCJ移行區(qū)的MLE皮樣結(jié)構,報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究選取2021～2022 年在廣西醫(yī)科大學附屬口腔醫(yī)院經(jīng)舌擴大切除術標本6 例,切取癌周正常區(qū)域輪廓乳頭組織。2021～2022 年在廣西中醫(yī)藥大學附屬瑞康醫(yī)院經(jīng)內(nèi)痔切除術肛門標本6 例,經(jīng)子宮切除術宮頸標本6 例。

1.2 試劑與方法

連續(xù)石蠟切片,采用HE染色觀察上皮移行區(qū)組織形態(tài),采用免疫組化檢測上皮移行區(qū)的免疫表型。鼠抗人單抗CK5、CK7、P63抗體購于北京中杉金橋生物技術有限公司。采用SP法進行IHC染色。

2 結(jié) 果

2.1 舌根輪廓乳頭上皮SCJ區(qū)的組織解剖

HE染色(圖1)可見在輪廓乳頭溝底處Von Ebner's腺管開口位置可以看到一段鱗狀上皮和柱狀上皮間移行區(qū),鱗狀上皮為非角化,逐漸移行成溝頂?shù)慕腔[狀上皮,柱狀上皮為導管段,兩者之間的復層上皮,形態(tài)學類似肛門的SCJ的移行區(qū)MLE,該區(qū)域CK5,CK7均染色。因此,將該區(qū)上皮亦稱為移行區(qū)MLE。此外,CK5除了味蕾以及柱狀上皮,在鱗狀上皮均染色。而CK7染色定位于柱狀上皮以及味蕾。P63染色定位于鱗狀上皮和移行區(qū)MLE的基底層以及相連導管的肌上皮(圖2)。

圖1 輪廓乳頭 (HE,×40)

圖2 Von Ebner's腺,宮頸和肛門過渡區(qū) (HE和IHC,×100)

2.2 與宮頸和肛門SCJ區(qū)比較觀察

宮頸和肛門的SCJ移行區(qū)可見CK7和CK5均強表達,亦可發(fā)現(xiàn)宮頸柱狀上皮鱗狀化生區(qū)域出現(xiàn)CK5的強表達;宮頸的P63陽性局限于鱗狀上皮區(qū)基底細胞,肛門P63在鱗狀上皮和移行區(qū)上皮基底細胞均表達。而Von Ebner's腺管開口的移行區(qū)上皮亦同時表達了CK7、CK5,相鄰鱗狀上皮細胞不表達CK7。CK5在柱狀上皮細胞不表達,P63 在所有上皮基底細胞均染色,尤其是腺管上皮基底的肌上皮細胞亦有染色,這一與宮頸上皮不同(無肌上皮細胞)(圖3)。

圖3 Von Ebner's腺與宮頸和肛門SCJ示意圖

3 討 論

宮頸、肛門和食管的鱗柱交界區(qū)(SCJ)可有易癌變的移行區(qū)(TZ)結(jié)構,在局部刺激因素下該過渡區(qū)易癌變[17]。人舌根Von Ebner's腺為舌根部僅有的純漿液腺,在過去并未得到深入的研究。本研究發(fā)現(xiàn),在輪廓乳頭溝底Von Ebner's腺開口處亦有類似于宮頸以及肛門的SCJ。目前研究認為宮頸的SCJ移行在區(qū)表現(xiàn)為單層的CK7/CK5陽性上皮,而肛門移行區(qū)表現(xiàn)為復層的CK7/CK5陽性上皮,且具有底層的P63陽性基底細胞。本研究還發(fā)現(xiàn)在Von Ebner's腺SCJ區(qū)亦具有移行區(qū)MLE樣結(jié)構,同時表達CK7/CK5陽性,而到了側(cè)壁的鱗狀上皮失去了CK7陽性的表達;此外,其移行區(qū)和鱗狀上皮區(qū)均具有P63陽性基底細胞。但是其在柱狀上皮區(qū)與宮頸和肛門不同,因為是涎腺導管,存在包繞管腔位于基底的肌上皮細胞,所以其基底有一層P63陽性的肌上皮細胞與移行區(qū)的P63陽性基底細胞直接相連。

過去對HPV相關口咽癌的研究都集中于腭和舌扁桃體的隱窩網(wǎng)狀上皮易感區(qū),而忽略了與之相鄰的輪廓乳頭,本研究中通過與宮頸和肛門的比較,發(fā)現(xiàn)了位于輪廓乳頭Von Ebner's腺開口SCJ區(qū),并發(fā)現(xiàn)了在該區(qū)域的CK7/CK5陽性的MLE,與宮頸、肛門以及食管類似,這種結(jié)構可能是舌根HPV以及其它致癌因素的易感部位。本研究中的6個輪廓乳頭均發(fā)現(xiàn)了不同程度的MLE轉(zhuǎn)化區(qū),可能和癌與慢性炎癥刺激有關,今后可以進一步研究證實。此外,該結(jié)構的致癌易感性還需要進行更多的細胞及分子生物學研究。