丁瑤瑤，楚娟，陳凡，朱姣姣，張倩倩，秦天生★，魏林珍，田青霞

（1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院 甘肅省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省隴南市西和縣人民醫(yī)院；3.蘭州大學(xué)第一醫(yī)院介入醫(yī)學(xué)科）

隨著醫(yī)學(xué)科技的進(jìn)步，人乳頭瘤病毒的疫苗和篩查廣泛應(yīng)用于臨床，但宮頸癌在中低收入國家的發(fā)病率和死亡率較高［1］。因此臨床中宮頸癌的診斷和治療仍備受關(guān)注。近年來發(fā)現(xiàn)，miRNAs在宮頸癌組織中異常表達(dá)，通過抑制靶基因翻譯或誘導(dǎo)靶基因的切割或降解來發(fā)揮作用，大約調(diào)節(jié)1/3的人類基因，包括參與多種重要細(xì)胞過程以及細(xì)胞循環(huán)、增殖、分化和凋亡的基因，說明miRNAs的異常表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［2］。本文就近年來miRNAs在宮頸癌中的異常表達(dá)與作用機(jī)制等方面的研究進(jìn)展做一綜述。

1 miRNAs的發(fā)現(xiàn)、檢測與功能

miRNAs是非編碼RNA家族的重要組成部分，與人類癌癥相關(guān)［3］。1993年miRNAs首次被發(fā)現(xiàn)于秀麗新小桿線蟲中［4］。miRNAs是長度為19～25個核苷酸的調(diào)節(jié)核糖核酸，通過與靶mRNA的3'非翻譯區(qū)（3'UTR）部分堿基配對來調(diào)節(jié)基因表達(dá)水平［3］。其在血液中循環(huán)，通常在微泡中或由血液中的結(jié)合蛋白保護(hù)，它們可以被化學(xué)修飾（如甲基化），從而高度抵抗核糖核酸酶的作用，并且由于其穩(wěn)定性和易于檢測，可能作為潛在的生物標(biāo)記物，但細(xì)胞釋放循環(huán)miRNAs的來源和詳細(xì)機(jī)制仍不明確［5］。miRNAs可以通過凋亡和壞死細(xì)胞釋放到循環(huán)中；也可以由癌細(xì)胞分泌，這可能會促進(jìn)腫瘤的生長和擴(kuò)散；也可以由許多其他細(xì)胞類型釋放，如血細(xì)胞、免疫效應(yīng)細(xì)胞和其他參與腫瘤侵襲和炎癥反應(yīng)的細(xì)胞［5］。

既然miRNA可能是疾病中潛在的生物標(biāo)記物，因此獲得樣品中整體miRNAs表達(dá)譜經(jīng)濟(jì)有效的方法是miRNAs陣列，而定量RT-PCR反應(yīng)通常用于確定大量樣品中差異表達(dá)的單個miRNA，miRNAs圖譜研究的數(shù)量迅速增長，確定可靠的miRNAs特征將有助于理解宮頸癌的進(jìn)展［6］。

為了研究宮頸中miRNAs對癌癥發(fā)生的影響，He等［6］進(jìn)行的Meta分析顯示，miRNAs通過整合病毒癌蛋白、失調(diào)的miRNAs和其靶點(diǎn)建立了一個miRNAs-RNA相互作用網(wǎng)絡(luò)，宮頸癌不同階段的失調(diào)miRNAs參與了關(guān)鍵的癌癥相關(guān)通路，如細(xì)胞周期、p53和Wnt信號通路，表明失調(diào)的miRNAs可能與宮頸癌密切相關(guān)，miRNAs可能是宮頸癌相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物。miRNAs不僅對宮頸癌細(xì)胞有影響，也有助于腫瘤微環(huán)境的形成。研究發(fā)現(xiàn)一些miRNAs靶向重要的癌細(xì)胞調(diào)節(jié)分子并參與了癌細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境之間復(fù)雜的信號網(wǎng)絡(luò)，除了直接參與細(xì)胞間信號傳導(dǎo)外，部分miRNAs通過微泡或者體外分泌影響癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移［7］。miRNAs對宮頸癌發(fā)生發(fā)展、診斷、治療和預(yù)后的作用機(jī)制和相關(guān)途徑仍需要進(jìn)一步的研究。

2 miRNAs和宮頸癌

2.1 miRNAs與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展 宮頸癌發(fā)生的主要病因是人乳頭瘤狀病毒（HPV）感染，主要為16型和18型［8］。HPV感染的檢測與治療屬于宮頸癌的二級預(yù)防，可以預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。Zhao等［9］研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-154-5P通過靶向CUL23'UTR在抑制HPV16 E7介導(dǎo)的pRb降解中起至關(guān)重要的作用，表明miRNA-154-5P是治療HPV誘導(dǎo)的宮頸癌潛在的靶點(diǎn)。腫瘤發(fā)生發(fā)展的機(jī)制是多層次、多因素的，在分子水平上主要表現(xiàn)為癌基因或抑癌基因功能障礙，導(dǎo)致細(xì)胞增殖、遷移、凋亡和自噬調(diào)節(jié)機(jī)制失衡［10］。Cao等［11］研究發(fā)現(xiàn)，miR-665 在宮頸癌中下調(diào)，miR-665的過表達(dá)可抑制宮頸癌的生長和轉(zhuǎn)移，闡明了lnc-DACR介導(dǎo)的miR-665靶點(diǎn)的新通路，提示了miR-665、ERK/SMAD信號通路等可能作為宮頸癌預(yù)防和治療中的新靶點(diǎn)。Liu等［12］研究發(fā)現(xiàn)miR-3647-5p 在宮頸癌的發(fā)展過程中下調(diào)，轉(zhuǎn)錄因子TP53可上調(diào) miR-3647-5p 的表達(dá)，在轉(zhuǎn)錄后水平miR-3647-5p 能夠靶向 AGR2基因的3' UTR從而抑制AGR2表達(dá)，因此，TP53/miR-3647-5p/AGR2 軸抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)凋亡，為宮頸癌的靶向治療提供了新的策略。Wu等［13］研究發(fā)現(xiàn)，與正常宮頸細(xì)胞End1/E6E7相比，宮頸癌細(xì)胞中circAGFG1水平較高，circAGFG1和miR-370-3p定位于細(xì)胞質(zhì)中并相互作用，miR-370-3p在宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，對RAF1有負(fù)調(diào)控作用，circAGFG1可能通過海綿化miR-370-3p促進(jìn)RAF1的表達(dá)，從而激活RAF/MEK/ERK通路，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖和遷移。Tan 等［14］研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌中miRNA-381表達(dá)水平的降低減輕GPR34轉(zhuǎn)錄后沉默是宮頸癌生長和發(fā)展的原因，揭示了靶向miRNA-381/GPR34分子軸作為宮頸癌替代治療策略的可能性。Liu等［15］發(fā)現(xiàn)miR-195-5p過表達(dá)可能通過靶向YAP13' UTR抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。Zhang等［16］通過抑制細(xì)胞增殖、侵襲和遷移將miRNA-1193確定為宮頸癌中的關(guān)鍵腫瘤抑制因子，證實(shí)CLDN7是miRNA-1193的重要靶位，其上調(diào)表達(dá)顯著增強(qiáng)了miRNA-1193引起的腫瘤抑制作用。Fan等［17］發(fā)現(xiàn)，PTENP1競爭抑制了miR-160b來調(diào)節(jié)PTEN的表達(dá)，PTENP1的過度表達(dá)和對miR-160b的抑制有助于抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖和加速細(xì)胞凋亡，表明PTENP1可能是宮頸癌的潛在治療靶點(diǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-520d-5p通過調(diào)節(jié)PTK2抑制宮頸癌細(xì)胞的增殖和侵襲，此發(fā)現(xiàn)可能為宮頸癌提供了新的治療思路［18］。Ni等［19］發(fā)現(xiàn)，上調(diào)的miRNA-802顯著抑制宮頸癌細(xì)胞的生長和侵襲性，MYLIP是miRNA-802的功能靶點(diǎn)，與miRNA-802呈負(fù)相關(guān)，MYLIP的過表達(dá)消除了miRNA-802對宮頸癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移相關(guān)特性的抑制作用，因此，miRNA-802在宮頸癌中低表達(dá)，與宮頸癌患者的不良臨床結(jié)果相關(guān)。綜上所述，miRNAs是宮頸癌潛在的治療靶點(diǎn)，有應(yīng)用于臨床中治療宮頸癌的可能性，但需進(jìn)一步研究。

2.2 miRNAs與宮頸癌的早期診斷 在臨床中液基薄層細(xì)胞和HPV的檢測是宮頸癌的主要篩查方式，進(jìn)一步的確診則是陰道鏡下的宮頸取材活檢。盡管如此，宮頸癌在中低收入的國家發(fā)病率與死亡率仍然較高，造成了較大的負(fù)擔(dān)［1］。研究尋找宮頸病變和宮頸癌的早期診斷生物標(biāo)志物勢在必行。Ma等［20］多階段研究并驗(yàn)證了宮頸癌患者血漿中的4種miRNAs（miR-146a-5p、miR-151a-3p、miR-2110、miR-21-5p）是診斷宮頸癌的潛在無創(chuàng)生物標(biāo)志物，血漿的miRNAs生物標(biāo)志物組和當(dāng)前早期診斷的組合可以應(yīng)用于宮頸癌患者的篩查。Liu等［21］招募了582例宮頸疾病患者和145例對照者，與正常宮頸樣本相比，宮頸癌和癌前病變中6種miRNAs（miR20a、miR92a、miR141、miR183*、miR210 和 miR944）的表達(dá)水平顯著上調(diào)，表明它們是致癌miRNAs，并且這6種miRNAs可用于區(qū)分宮頸癌前病變或癌癥患者與正常人，特別是在宮頸病變中它們還具有良好的預(yù)測能力，這6種miRNAs的聯(lián)合使用進(jìn)一步提高了任何單一miRNA標(biāo)記的診斷準(zhǔn)確性。

臨床中檢測和監(jiān)測宮頸癌的血清腫瘤生物標(biāo)志物有癌胚抗原（CEA）、鱗狀細(xì)胞癌抗原（SCC Ag）以及 CA19-9已被廣泛使用［22-26］。但研究發(fā)現(xiàn)，使用單一類型生物標(biāo)志物的敏感性和特異性在臨床應(yīng)用中經(jīng)常導(dǎo)致不令人滿意的結(jié)果，多種血清生物標(biāo)志物的聯(lián)合分析可以提高早期宮頸癌無創(chuàng)檢測的準(zhǔn)確性，并有可能作為一種新的早期宮頸癌檢測方法［27］。以上研究有力的說明了miRNAs是宮頸癌早期潛在的生物檢測標(biāo)志物，未來在臨床中成熟、廣泛的應(yīng)用有助于宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)，為宮頸癌患者爭取更多的診療機(jī)會。

2.3 miRNAs與宮頸癌治療的預(yù)后 宮頸癌患者主要治療方法為手術(shù)、放療及化療，但是應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況配合應(yīng)用。患者經(jīng)過治療后會出現(xiàn)不同的結(jié)果，一部分患者會出現(xiàn)癌組織的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的明顯的生物學(xué)特點(diǎn)，是造成患者死亡的重要因素。宮頸癌的發(fā)展受miRNA-mRNA網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控，基于3個基因（EZH2、FLT1、GAPDH）的風(fēng)險評分模型可以有效預(yù)測宮頸癌患者的總生存期，這3個基因可能通過肥大細(xì)胞、CD4和CD8細(xì)胞相互作用在宮頸癌中發(fā)揮調(diào)控作用［28］。Liu等［29］報道，circRNA8924在宮頸癌組織中高表達(dá)，并與腫瘤大小、FIGO分期和子宮肌層浸潤密切相關(guān)；在進(jìn)一步的體外研究中發(fā)現(xiàn)，circRNA8924與miR-518d-5p/519-5p家族競爭性結(jié)合，上調(diào)了CBX8的表達(dá)水平，導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的增強(qiáng)。Xu等［30］建立了circRNA-miRNA-RNA調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)包括宮頸癌中的33個circRNAs、2個miRNAs和189個mRNA，對TCGA數(shù)據(jù)集的分析顯示，調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中共有3個靶基因（COPE、RAB3B和TFPD）與宮頸癌中具有臨床顯著結(jié)果的生存線相關(guān)，提示這些基因有可能成為新的生物標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)。Chen等［31］研究發(fā)現(xiàn)，LncRNA HOXD-AS1在宮頸癌組織和細(xì)胞系中過表達(dá)，其高水平預(yù)示宮頸癌患者預(yù)后較差，siRNA介導(dǎo)的HOXD-AS1敲除抑制了宮頸癌細(xì)胞的遷移和侵襲，HOXD-AS1競爭內(nèi)源性RNA miR-877-3p可導(dǎo)致其靶基因FGF2上調(diào)，miR-877-3p過表達(dá)或抑制FGF2，可終止HOXD-AS1誘導(dǎo)的遷移和侵襲，提高患者的預(yù)后。

除了癌組織的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，對放化療等治療手段的不敏感也會導(dǎo)致預(yù)后不良。宮頸癌中多種miRNAs的異常表達(dá)可影響機(jī)體對化療和放療的敏感性，由于miRNAs與宮頸癌的治療耐藥性有關(guān)，可開發(fā)出miRNAs抑制劑或補(bǔ)充化療或放療的新聯(lián)合療法［32］。淋巴轉(zhuǎn)移會導(dǎo)致宮頸癌的復(fù)發(fā)，也是宮頸癌預(yù)后差的原因之一。Chen等［33］利用 R 軟件和生物傳感器軟件包從 TCGA 癌癥基因組圖譜數(shù)據(jù)庫中鑒定差異表達(dá)的miRNAs，發(fā)現(xiàn)4種miRNAs（下調(diào) miR-502 和 miR-145，上調(diào) miR-142 和 miR-33b）的組合被確定為宮頸癌的獨(dú)立預(yù)后標(biāo)志，模塊分析表明CXCL12、IGF1、PTPRC、CDH5、RAD51B、REV3L和WDHD1是與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)的關(guān)鍵基因。總之了解miRNAs與宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制，可能為未來的臨床治療提供新的診斷指標(biāo)和治療靶點(diǎn)。

3 小結(jié)與展望

綜上所述，miRNA-154-5P、miR-665、miR-3647-5p、miR-370-3p、miR-381、miR-195-5p、miR-1193、miR-160b、miR-520d-5p和miR-802影響了宮頸癌細(xì)胞的增殖和遷移；miR20a、miR92a、miR141、miR183、miR210和miR944是宮頸癌的致癌miRNA，具有良好的預(yù)測性能；miR-518d-5p/519-5p和miR-877-3p促進(jìn)了宮頸癌細(xì)胞侵襲，導(dǎo)致宮頸癌細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的增強(qiáng)；多種miRNAs與宮頸癌患者的預(yù)后相關(guān)；以上研究表明，miRNAs對宮頸癌的篩查、診斷、預(yù)測宮頸癌的風(fēng)險有潛在的臨床意義。此外，為宮頸癌尋找高靈敏度和高特異度的非侵入性檢測方法也是非常有必要的。因此，miRNAs可能作為癌癥的診斷、預(yù)測或預(yù)后的生物標(biāo)志物。應(yīng)繼續(xù)開展大規(guī)模人群相關(guān)研究，將miRNAs生物標(biāo)志物進(jìn)一步應(yīng)用于宮頸癌的早期檢測、診斷和預(yù)后，使宮頸病變得到早期發(fā)現(xiàn)，延緩宮頸癌的發(fā)生和復(fù)發(fā)，為患者提供更多治療的機(jī)會，減輕國家醫(yī)療負(fù)擔(dān)。